全 文 ：2 0 1 2年 1 1 月第 2卷第 2 1期 · 药品鉴定 ·
高效液相色谱法测定肾茶胶囊中总黄酮的含量
路 更 1 李 芳1 王立强 2 ` 侯志勇1 宋伟杰
1
.解放军第二二一一医院 ,黑龙江哈尔滨 15 0 0 80 ; 2 . 华侨大学分子药物研究院 ,福建泉州 , 36 20 21
【摘要 」目的 研究高效液相色谱法测定肾茶胶囊中总黄酮的含量 。 方法 通过高效液相色谱法 ,对线性关系 、 重复行 、 精
密度 、 回收率等考察进行考察 ,并进行多次验证 。 结果 芦丁标准品在 .8 03 一 48 . 1 8 林 gm/ L 范围内具有良好的线性关系
(厂= .0 9 9 95 ) ; 该方法精密度 良好 , R s D < 2% ; 重复性实验结果良好 , R s D = .0 98 ; 平均回收率在 97 0% 一 10 3 0% 之间 ,
R s D < 2%
,准确性良好 。 结论 高效液相色谱法测定肾茶胶囊中总黄酮的含量精确科学 ,能很好地检测和控制肾总黄酮
的质量 。
〔关键词 ] ’肾茶胶囊 ; 总黄酮 ; 含量测定
[ 中图分类号 ] R 9 1 7 [文献标识码 ] B [文章编号 ] 2 0 9 5一 0 6 1 6 ( 2 0 12 ) 2 1一 9 3 一0 3
C o n t e n t d e t e r m i n a n t i o n o f t o t a l fl a v o n o i d s i n o r t h o s iP h o n
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。
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.
H e iL o n自i an g Har b in l 5 00 8O: 2 H u a q ia o U n i v e r s iyt o f M o le e u la r M e d i e in e R e s e ar e h I n s t it u t e , Qu a n z h o u
36 202 1
,
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4 8
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1 8 m g/ m L (
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p r e e i s i o n (R S D < 2% )
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R S D < 2 %
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e叩 s u l e s b y H p L C 15 s e i e n t iif e a n d fe a s i b l e , w h ie h e a n b e in 即 o d e o n t or l a n d t e s t th e fl a v o n o i d s i n o rt h o s i p h o n e a p s u le s .
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a v o n o i d : C
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肾茶味苦 、 凉 ,为唇形科肾茶属植物 , 主要分布于福建 、 台
湾 、 海南 、 广西 、 广东和云南各省。 民间用于治疗急 、 慢性肾炎 、
膀胧炎 、 尿路结石 、 胆结石 、 风湿性关节炎等 1[ 一 2] 。 本品为肾茶
的干燥茎叶 。 主要含有黄酮类化合物 、 幽体皂贰类 、 蕙醒类贰
类 、 氨基酸 、 多肤 、蛋白质 、 有机酸 、 糖类 、 多糖类 、 多酚类化合物
等 。 我院对其质量进行了系统研究 ,现报道如下 。
1 材料与方法
1
.
1 样品和材料
肾茶胶囊 : 单位自制 ,批号 : 2 (xj 4 05 10 ,规格 : .0 3 彭粒。 标准
品 : 芦丁 (购自中国药品生物制品检定所 ,批号 : 10 080一20 07 05 ) 。
1
.
2 实验仪器
天平 : 北京赛多利斯仪器系统有限公司 , 型号 B P ZI I D ; 高
效液相色谱仪 : 日本岛津 , 型号 2 0 10 ; 紫外 一 可见分光光度仪 :
日本岛津 ,型号 u v 一 2 1 0 0 。
1
.
3 测定方法
1
.
3
.
1 对照 品溶液的制备 芦丁对照品 12 0℃减压干燥至恒
重后 ,精密称定 50 m g ,置于 25 m L 量瓶中 ,加适量甲醇置水浴
上微热使溶解 ,放冷 ,加甲醇至刻度 ,摇匀备用 。 精密量取溶液
[基金项 目 ]福建省自然科学基金资助项 目( 2 01 0J 01 2 08 )。
` 通讯作者
10 m L
,置于 10 0 m L 量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀 , 即得 (每毫升中
含无水芦丁 .0 2 m g )。
1
.
3
.
2 标准 曲线的制备 精密量取对照品溶液 1 0 、 2 .0 、 3 0 、 4 .0 、
5 .0
、
.6 0毗 ,分别置于 25 毗量瓶中 ,各加水至 6毗 ,加 5% 亚硝酸
钠溶液 1毗 ,摇匀 ,放置 6 而 n ,加 or % 硝酸铝溶液 I l n L ,摇匀 ,放
置 6 m in , 加氢氧化钠试液 10 m L ,再加水至刻度 ,摇匀 ,放置
巧 而 n , 以相应的溶液为空白 , 照分光光度法 ,在 50 n m 的波长处
测定吸收度 , 以吸收度为纵坐标 、浓度为横坐标 ,绘制标准曲线。
1
.
.3 3 测定法 取装量差异项下的本品内容物适量 ,研细 ,从
中称取约 .0 25 9 ,精密称定后 ,置 25 m L 锥形瓶中 ,精密称定 ,加
甲醇 25 m L 超声处理 (功率 2 5O w ,频率 20 k H z ) 3 0 m in ,放冷 ,
精密称定 ,补足重量 ,摇匀。 精密量取 10 毗 ,置 10 毗 量瓶中 ,
加水至刻度 ,摇匀 。 精密量取 3毗 ,置 25 毗量瓶中 , 照标准曲线
制备项下的方法 , 自 “ 加水至 6 m L’ 起依法测定吸收度 ,从标准
曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度 ( 林 g八I L ) ,计算 , 即得 -34[ 几
本品每粒含总黄酮以芦丁 ( C 27 H 30 0 1。 )计 ,不得少于 45 .0 mg 。
1
.
.3 4 吸收光谱 的测定 、 光谱一致性检测 精密吸取芦丁对
照品溶液 、 供试品溶液各 3 m L ,分别置于 25 m L 量瓶中 , 照分
光光度法 ,在 2 0 一 750 n m 波长范围内测定吸收光谱 。 结果
芦丁对照品与供试品光谱可见光区吸收图谱基本一致 ,并且在
50 0
n
m 波长处有最大吸收 。
C H IN A M E D IC IN E A N D p H A R M A C Y 中日医铸时专 9 3
· 药品鉴定 · 2 01 2 年 1 1 月第 2卷第 2 1期
表4 加样回收率试验结果
编号 样品取样量
( m g )
125
.
4
125
.
9
124 名
124 3
125
.
2
样品中黄酮的含量
( m g )
加人黄酮量
( m g )
测出黄酮总量
( m g )
检出黄酮量
( m g )
1 3
.
4 1 2 7 名5 6 0一 2 0 2 8 石 1
1 3
.
5 4 2 7 石 3 5 4 2 9 27 名8
1 3
.
2 6 2 7
一月4 5 8 石 3 27 37
1 3
.
14 2 7 石 6 5 8 一 88 2 7 一7 4
1 3
.
36 2 7 4 3 5 9
.
1 3 2 7
一
7 7
回收率
( % )
1 2 0
一
7 3
1 1 0
.
2 7
9 9
一
7 4
1 0 0
一
5 6
1 1 0
.
24
2 结果
2
.
1 线性关系的考察
精密吸取芦丁对照品溶液 1 、 2 、 3、 4 、 5 、 m 6L (相当于芦丁
8 0 3
、
1 6 06
、
2 4 0 9
、
2 3
.
1 2
、
4 0
.
1 5
、
4 8
.
1 8 林 g八I L ) ,按上述测定法测
定吸收度 。 以吸收度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘制标准曲线 ,
计算得 回归方程 。 回归方程为 : y = .0 01 l l+x .0 01 8 1 , 尸= .0 99 5 。
表明芦丁在 .8 03 一 48 . 1 8 林 gm/ L 范围内具有良好的线性关系 。
见表 1 。
图 1 芦丁标准曲线
2乃 重复性试验
按供试品测定方法测定 ,对同一批样 品 ( 0 9 08 16 ) 重复测
定 5 次。 见表 3 。
2 4 加样回收率试验
精密称取已知含量 的同一批号 (批号为 09 0 8 16 ,含量为
25 .0 51
1 119龟) 的样品 125 mg ,分别精密加人芦丁对照品各 27 .5 m g ,
按正文供试品溶液的制备方法制备及上述光谱条件测定 , 测定
并计算回收率 ,平均回收率在 97 0% 一 103 0% 之间 , R SD < 2%
(
n =
6 )
,方法准确性良好 。 见表 4 。
对照品浓度 ( 林留m L ) 吸收度
0
.
10 2
0
.
19 9
0 2 9 1
0 3 7 6
0 4 6 3
0石 5 1
6Q介乙气O八
八、01今氏又位刀民O八z介乙、4
…. 三兰
0 10 2 0 30 40 5 0 6 0
2 2 精密度试验
按 “ 3 . 3 ” 项下测定法对对照 品溶液重复测 定 6 次 , 计算
R s D
,结果见表 2 。 试验结果表明 , R s D < 2% ,方法精密度良好 ,
符合测定要求 。
表 2 精密度试验结果
序号 浓度 ( 林留m L ) R SD (% )
0
一
2 94
0
一
2 97
0
一
2 92
0 2 93
0 2 9 8
0
一
2 99
表 3 重复性试验结果
实验次数 总黄酮含量 ( m留粒 ) 平均含量 ( m留粒 ) R S D ( % )
1 5 1
.
0 5
2 5 1
.
0 9
3 5 1
.
18 5 1
.
04 0刀 8
4 50
一
8 9
5 50
一
9 8
2
.
5 含量测定
按上述方法测定各批样品的含量 。 根据 3 样品测定结果 ,
暂定本品含总黄酮不得少于 45 0 m留粒 。 见表 5 。
表 5 含量测定结果
批号 总黄酮含量 ( m留粒 )
0 50 8 16 5 0 3 1
0 50 8 17 4 9
一
60
0 50 8 18 5 0
.
15
3 结论
肾茶为唇形科肾茶属植物 , 又称猫须草 ,其主要活性成分有
迷迭香酸 、 熊果酸和肌醇等。 傣族医书记载肾茶用 以治疗小便
热 、 涩 、 疼痛 、 腰痛等泌尿系统疾病 ,疗效确切 。 为使肾茶这一民
族传统药物更好地用于临床 ,本课题开发了肾茶有效部位制剂
“ 肾茶胶囊 ” ,并对其药效学 、 药理学和毒理学进行了系统研究 。
通过针对肾茶胶囊中总黄酮的系统研究 ,包括线性关系考
察 、 精密度考察 、 回收率考察 、 重复性考察等 ,证实本测定方法
科学可行 ,完全能控制和检测肾茶胶囊中总黄酮的质量 。
〔参考文献 ]
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(下转第 1 06 页 )
9 4 申日医海歼季 C H IN A M E D IC IN E A N D p H A R M A C Y
· 影像与介入 · 2 0 12年 1 1月第 2卷第 2 1期
前支组成 。 神经根型颈椎病主要发生在 C S _ 。 , C、 和 T 、很少发
生 1[] 。 本组患者中 ,该型颈椎病的发病部位也以 C S _ 。居多 ,其
D WBI SS 等的 M RI 表现和统计学处理结果与文献相似 。
3
.
2 常规M R I评价
可 良好地显示颈椎小关节即钩椎关节增生 ,椎间盘突出 ,
神经根受压和黄韧带和后纵韧带肥厚等 4[ 一5] 。 本研究中 ,在患
者的常规 M RI lT w 和 T Zw 图像上 ,笔者还观察到颈项部肌间
隙即脂肪间隙增大 ,肌束等软组织萎缩征象 。 这一表现与小关
节骨质增生或椎间盘突出等所导致的神经根明显受压相对应 。
如无这些 M RI 征象 ,在年轻患者 ,则应注意有无颈部外伤或其
他病史 。
3
.
3 颈椎神经根等结构的 D w BI s 显示情况评价
在 D WBI SS 图像中 , 正常的脊髓外形表现为条状 、 边缘清
晰的连续均匀稍高信号 ,蛛网膜下池表现为高信号。 正常的神
经根表现为粗短线状 、边缘清晰的连续均匀中等高信号 , 正常
的神经节表现为小卵圆形较高信号 , 正常的神经干为粗线状 、
边缘清晰的连续均匀中等高信号 。 经 s oa p B ub bl 。 处理后可
较直观连续显示脊髓外观 , 连续显示 出椎间孔后 的部分神经
根 、 神经节 、 节后神经干走行 。 根据笔者对 C 4一 T 、各神经结构
D w BI SS 图像观察 ,上述各结构的显示 ,对神经节的显示较理想
( 91 .7 %
一
97 .2 % )
, 以 C S _ 。及 T 、 显示较佳 ; 对节后段神经根
显示次之 ( 69 .4 % 一 91 7% ) , 以 C S _ 7 显示较佳 ; 其节前段神经
根显示最差 ( 27 . 8% 一 61 . 1% ) 。 分析原 因 , 可能与下列一些因
素有关 : ( 1 ) 背景抑制效果欠佳 , 因为该技术特性决定了其成
像范围内富含水组织均呈高信号 ,如淋 巴结 、 慢血流小血管等
影响。 ( 2 ) 其次是使用头颈部联合线圈 ,未能用颈部专用线圈 ,
使线圈到靶区 (颈项部 )距离较大 ,从而降低了信噪比 。 ( 3 )磁
场强度 、 F o v 和层厚和重建间隔等也可能不同程度地影响着空
间分辨率等 。 此外 ,本研究中 ,两组 D w BI B s 图像均未能显示
椎管内神经根部分 。 但是 , C M R M 能较好地显示脊髓 、 蛛网膜
下池 、 神经根袖及其内走行的 (位于骨性椎管内的 )神经根 。 因
此 , C MR M 技术可作为 M RI 诊断神经根型颈椎病 的补充 。
3
.
4 颈椎神经根等D w BI s 、 M R 入l及常规 M R I的临床应用 价值
目前 , DW BI S S 是公认的唯一可以同时显示神经节前和节
后损伤的影像学检测手段 , 尽管 D w BI SS 颈神经根成像存在一
些不足 6[ 一7] 。 窦夏睿等 8[] 观察急性期神经根型颈椎病模型 ,受
试大鼠神经节内发生神经元坏死 、 后根神经轴突结构不清和断
裂 、 髓鞘脱失。 灰白质可见胶质细胞大量增生 。 随病程进展 ,
髓鞘有修复和再生 。 笔者对患者 D w BI B S 观察发现 ,有患者病
侧神经根细小和肌萎缩 ( n 例 ) ,有的神经根信号局 限性增高
( 7 例 ) 或局限性减低 ( 8 例 ) ; 特别是在中 、 重度神经根型颈椎
病中 ,上述表现与神经根型颈椎病的常规 M RI 相符合 。 因本组
病例较少 ,神经根型颈椎病的 M R M 表现需详细观察 。 根据动
物模型的病理所见 8[] 和基于 D w l 的 D w BI B s M RI 成像原理推
测 : 这些 D WBI B s 表现也许能反映病变神经根急 、慢性期病理
改变 。 但是 , 要做出详细结论 , 尚需克服和改进 M RI 扫描技术
不足 、选用与颈部适配的线圈等 ,并作大样本进一步观察 。
M ll 神经成像技术可明确臂丛等部位病变特征 、定位诊断「6一7 , 9 ] 。
与 C T 神经成像技术比较 ,常规 M RI 和相关的神经成像技术 已
较为成熟 。 D w I B s s 结合 M R M 对神经根型颈椎病评价具有一
定的临床应用价值 。
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1 0 6 申目医铸时专 C H IN A M E D IC IN E A N D p H A R M A C Y