全 文 ：　　第 29卷　第 4期 青 　海 　医 　学 　院 　学　报 Vol.29　No.4
　　　　2008年 JOURNALOFQINGHAIMEDICALCOLLEGE 2008
湿生扁蕾提取物对小鼠
实验性肝损伤的保护作用＊
任延明　袁　明　任世存
青海大学医学院
　　摘　要　目的　研究湿生扁蕾提取物对小鼠实验性肝损伤的保护作用 。方法　取四氯化碳
(CCl4)致小鼠急性肝损伤模型小鼠血清和肝组织匀浆 ,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶
(AST)活性及组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果　与模型组比较 ,湿生
扁蕾提取物有明显降低小鼠急性肝损伤模型血清 ALT、AST水平的作用 ,同时有提高 SOD活性 ,清
除氧自由基而降低 MDA的作用 , P均 <0.01。结论　湿生扁蕾提取物对小鼠实验性肝损伤有明显
保护作用 ,其作用机制与抑制脂质过氧化损伤有关 。
关键词　湿生扁蕾　肝损伤　中药疗法
中图分类号　R285.5　　　　　文献标识码　A
PROTECTIVEEFFECTOFGENTIANOPSISPALUDOSA
ONEXPERIMENTALHEPATICDAMAGEINMICE
RenYanming, YuanMing, RenShicun
QinghaiUniversityMedicalColege
　　Abstract　Objective　ToobservetheprotectiveefectofGentianopsispaludosaonexperimentalhepaticdam-
ageinmice.MethodsSerumlevelsofALT, AST, hepaticMDAandSODactivityweremeasuredinthemodel
miceofliverinjuryinducedbycarbontetrachloride(CCl4).ResultsComparedwithcontrolgroup, Gentianopsispal-
udosacansignificantlydecreasedthelevelsofALT、ASTandMDAactivities(P<0.01), andincreaseSODactivi-
ty(P<0.01).ConclusionGentianopsispaludosapossesesabeterprotectiveefectonmicehepaticdamagein-
ducedbyCCl4 , anditsprotectivemechanismmayberelatedwiththeinhibitionoflipoperoxidativedamage.
Keywords　Gentianopsispaludosa　Experimentalhepaticdamage　Levelsofhepaticenzymes
　　湿生扁蕾 GentianopsispaludosaMa.为龙胆科
扁蕾属植物 ,藏药名为机合斗。产于青海 、西藏 、四
川等地 ,一年生草本 ,生长于海拔 1, 180 ～ 4, 600 m
的沼泽 、山坡等地 ,全草入药。具有镇咳 、止痛 、清热
解毒 、利湿消黄 、健脾止泻等功效 [ 1] 。本实验通过
建立 CCl4小鼠急性肝损伤模型 ,对湿生扁蕾进行保
肝实验研究 ,为湿生扁蕾的进一步开发和利用提供
依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物
　　成年健康昆明种小鼠(由青海省实验动物中心
提供),体重 20 ～ 22g,雌雄各半 ,随机分组 。
1.1.2　药物
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＊ 为青海大学医学院中青年基金项目(编号:2006—ky— 04)
　任延明(1972～ ),男 ,汉族 ,青海籍 ,副教授 ,硕士
DOI :10.13452/j.cnki.jqmc.2008.04.005
　　湿生扁蕾干燥全草 1000g经粉碎 ,以 80%乙醇
浸泡过夜 ,回流提取 3times,每次 2h,合并提取液 ,
回收乙醇得浸膏 120g,提取物加蒸馏水使药液相当
于生药 1 g/ml,备用。联苯双酯滴丸由北京协和制
药厂生产 ,批号 06040206,试验时以 30 g/L的二甲
基亚砜溶解 ,再用蒸馏水稀释至所需浓度 。
1.1.3　试剂
　　四氯化碳(CCl4),分析纯 ,由上海化学试剂供
应站提供(批号:811208);谷丙转氨酶(ALT)、谷草
转氨酶(AST)检测试剂盒均由上海荣盛生物技术有
限公司提供(批号:20070504);丙二醛(MDA)、超氧
化物歧化酶(SOD)试剂盒均购自南京建成生物研究
所 。
1.1.4　主要仪器
　　AU2700全自动生化分析仪(日本奥林巴斯公
司);722型分光光度计 (上海第三分析仪器厂);
RE— 52A旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器厂);
WH— 861型旋涡混合器(上海环球物化仪器厂);
TDL-4型离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1.2　方法
1.2.1　 CCl4致小鼠急性肝损伤模型的复制及分
组 、给药方法
将 60只小鼠随机分为 6组(每组 10只),分别
为空白对照组 ,模型组 ,湿生扁蕾提取物高 、中 、低剂
量治疗组 ,联苯双酯治疗组。药物高 、中 、低剂量组
分别按 9、4.5、2.25g/kg· d剂量灌胃 ,联苯双酯治
疗组按 150 mg/kg· d剂量灌胃 ,空白对照组给予等
量生理盐水 ,共 9 d。末次给药后 2 h(除正常对照
组的小鼠外),以 10 ml/kg的剂量按体重一次性腹
腔注射 0.12% CCl4花生油溶剂 ,禁食 16 h后 ,断头
取血分离血清 ,测定血清 ALT、AST的活性 。
1.2.2　肝组织 MDA、SOD活性测定
　　将小鼠处死后立即取出称取 0.5 g的肝组织 ,
在研钵内剪碎后 ,加 0.9% NaCl溶液 5 ml,充分研
碎 ,制成匀浆(100g/L),采用 TBA比色法检测 MDA
水平 ,黄嘌呤氧化酶法测定 SOD活性 。
1.3　数据处理
　　统计学处理用 SPSS12.0 forWindows软件完
成。显著性检验采用方差分析及 LSD检验 。
2　结果
2.1　湿生扁蕾提取物对 CCl4致小鼠急性肝损伤模
型血清 ALT、AST的影响(见表 1)
　表 1 湿生扁蕾提取物对 CCl4致小鼠急性肝损伤模型血清 ALT、AST的影响(x±S)
组别 N ALT(U/L) AST(U/L)
正常对照组 10 56.32±16.25 106.12±26.23
模型组 10 324.25±45.35# 433.62±48.95#
提取物低剂量组 10 232.78±38.66＊＆ 255.03±34.14＊＆
提取物中剂量组 10 186.40±33.49＊＆ 213.17±29.34＊＆
提取物高剂量组 10 142.36±29.11＊ 163.55±26.81＊
联苯双酯治疗组 10 126.37±21.17＊ 148.24±22.46＊
　　注:#与正常对照组比较 , P<0.01;＊与模型组比较 , P<0.01;＆与联苯双酯治疗组比较 , P<0.01.
　　由表 1可知 ,模型组小鼠血清 ALT、AST活性较
正常对照组升高 , 差异均有显著性意义 (P<
0.01),说明造模成功 。提取物高 、中 、低剂量组和
联苯双酯组 ALT、AST活性均低于模型组 ,差异有显
著性意义 (P<0.01),说明湿生扁蕾和联苯双酯均
有对抗 CCl4肝损伤小鼠异常增高的 ALT、AST活性
的作用 ,提示湿生扁蕾能有效减轻肝毒剂 CCl4对肝
细胞的损伤 ,保护肝细胞膜 ,减少细胞内酶的释放;
与联苯双酯组比较 ,湿生扁蕾提取物高剂量组对
ALT的活性影响无显著差异(P>0.05),说明湿生
扁蕾提取物高剂量组的保肝作用与联苯双酯相当 ,
湿生扁蕾提取物中 、低剂量组 ALT、AST的活性较
高 ,其作用均不如联苯双酯。
2.2　湿生扁蕾提取物对 CCl4肝损伤小鼠模型肝组
织 MDA、SOD的影响(见表 2)
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　表 2 湿生扁蕾提取物对 CCl4肝损伤小鼠的肝组织 MDA、SOD影响
组别 N MDA(nmol/mg) SOD(nmol/mg)
正常对照组 10 116.32±21.31 712.33±108.23
模型组 10 413.31±47.39# 138.21±42.25#
提取物低剂量组 10 231.08±21.94＊ 475.02±82.61＊
提取物中剂量组 10 210.36±29.62＊ 428.94±66.38＊
提取物高剂量组 10 221.55±27.61＊ 501.52±92.76＊
联苯双酯治疗组 10 198.33±31.21＊ 490.63±82.91＊
　　注:#与正常对照组比较 , P<0.01;＊与模型组比较 , P<0.01.
　　由表 2可知 ,与正常对照组比 ,模型组肝组织
MAD的活性显著增高 、SOD的活性显著降低 (P<
0.01);与 CCl4模型组比较 ,各用药组和联苯双酯组
MDA的活性明显低于 CCl4模型组 (P<0.01)、SOD
的活性明显高于模型组 (P<0.01),说明湿生扁蕾
提取物各剂量组和联苯双酯有提高 SOD活性 ,清除
氧自由基而降低 MDA的作用 ,对 CCl4所致急性肝
损伤具有明显的保护作用 。提示湿生扁蕾提取物减
轻 CCl4所致肝损伤可能与其增强肝细胞的抗氧化
损伤能力有关。
3　讨论
　　肝细胞损伤是各种类型肝病的共同的病理基
础 ,治疗与纠正肝细胞损伤是各型肝病治疗的主要
措施之一。肝损伤是多因素参与的复杂过程 ,自由
基过剩和脂质过氧化反应 ,在肝损害及肝病中起着
十分重要的作用 [ 2] 。CCl4是典型的肝脏毒物 ,在体
内对肝细胞亲和力大 ,自由基的形成及引发的链式
过氧化反应是 CCl4损伤肝组织的主要机制 ,主要表
现为血清中转氨酶活性增加 、肝细胞脂质过氧化或
坏死。 CCl4在肝内经微粒体细胞色素 P-450分解
活化 ,形成三氯甲基自由基(CC13· ), CC13·迅速
与 02结合转化为氧化三氯甲基自由基(CC13 02· ),
攻击膜磷脂而引起膜脂质过氧化 ,膜磷脂大量降解 ,
从而破坏肝细胞膜结构和功能的完整 ,引起膜通透
性增高 ,导致肝细胞中毒坏死 [ 3] 。ALT为可溶性酶
主要分布在细胞浆内 ,而 AST有 80%分布在线粒体
内 ,其余分布在细胞浆内。当肝细胞破坏 、细胞通透
性增高及线粒体损伤时 , ALT、AST活性增高 ,并且
ALT、AST活性的高低变化与肝细胞受损的程度相
一致。 MDA是不饱和脂肪酸过氧化作用的终产物 ,
可严重破坏细胞膜结构 ,导致细胞肿胀 、坏死。它在
血清及组织中的含量高低 ,间接反映了机体细胞受
自由基攻击时组织的破坏程度 。
　　湿生萹蕾在藏药属于 “藏茵陈 ”类(属 “蒂达”系
列 “机合斗 ” ),目前在藏医中广泛用于治疗和预防
急慢性肝炎。所含的活性成分主要有齐墩果酸 、熊
果酸 、1, 7-二羟基 -3, 8 -二甲氧基口山酮 、β2谷甾
醇 、胡萝卜苷等[ 4, 5] ,其中齐墩果酸具有保肝作用 ,
是肯定的免疫增强剂 [ 6] 。但有关湿生扁蕾的研究
报道并不多 ,并且多局限于成分分析和对其抑菌作
用的研究 ,因此有必要通过实验验证其抗肝损伤作
用 ,同时分离其有效部位 ,以提高疗效。
　　本研究结果表明 ,湿生扁蕾提取物可明显降低
CCl4致小鼠急性肝损伤模型血清 ALT、AST的作用
(P<0.01),并能提高 SOD活性(P<0.01),清除氧
自由基而降低 MDA作用(P<0.01)。表明湿生扁
蕾提取物能在一定程度防止肝细胞膜脂质过氧化所
造成的膜结构和功能损伤 ,减少自由基的攻击所引
起的障碍及肝细胞坏死。提示湿生扁蕾提取物对
CCl4所致小鼠实验性肝损伤有明显保护作用。
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