全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１３（１３）：１４６～１４９
第一作者简介：申顺先（１９７８－），男，本科，讲师，现主要从事作
物遗传育种与植物组培快繁技术教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：
ｓｈｅｎｓｈｕｎｘｉａｎ＠１６３．ｃｏｍ．
收稿日期：２０１３－０３－０４
留兰香微繁技术体系研究
申 顺 先，李 学 慧，贺 爱 利，樊 亚 敏
（河南农业职业学院，河南 中牟４５１４５０）
　　摘　要：以留兰香春季萌发的含顶芽幼嫩茎段为外植体，利用正交实验设计等方法研究了留
兰香微繁技术体系。结果表明：用７０％～７５％酒精浸洗３０ｓ，０．１％升汞浸洗６ｍｉｎ对外植体消毒
灭菌效果最好，适宜芽诱导的培养基是ＭＳ＋ＮＡＡ　０．０５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋
７ｇ／Ｌ琼脂，最佳芽增殖培养基是ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．０１ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．１ｍｇ／Ｌ＋２０～
３０ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼脂，最佳生根培养基是１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０～０．０５ｍｇ／Ｌ＋２０～
２５ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼脂。
关键词：留兰香；组织培养；微繁技术；正交实验
中图分类号：Ｓ　５０３．５３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１３）１３－０１４６－０４
　　留兰香（Ｍｅｎｔｈａ　ｓｐｉｃａｔａ　Ｌｉｎｎ）属唇形科薄荷属多年
生芳香性草本植物，原产于欧洲，在世界各地广泛栽培，
在我国江苏、浙江、河南、山东、四川、新疆等地均有分布，
俗称绿薄荷、十香菜［１－２］。可入药［３］，也可作为香料型蔬
菜食用，并用于工业生产留兰香精油，留兰香精油广泛
用于牙膏、胶姆糖及其它食品和药品中［４］。留兰香的常
规繁殖多采用根茎繁殖、分株繁殖和扦插繁殖等方
法［５］，繁殖系数有限。自杨乃博［６］首次报道通过其茎尖
或茎段分化芽及试管无性繁殖留兰香以来，柴明良［７－８］
对留兰香试管苗增殖与生根也进行了研究，沙红等［１］研
究探讨了以留兰香种子为外植体的组织培养技术，王小
敏等［９］以留兰香茎尖为外植体探索了不定芽增殖、试管
苗移栽生根的最佳条件，都为留兰香的组培繁殖奠定了
基础。该试验以留兰香含顶芽幼嫩茎段为外植体，从消
毒方案筛选、诱导培养、丛生芽增殖、试管内生根、练苗
移栽等方面进行探索，初步确立了留兰香微繁技术体
系，为留兰香种苗快速生产提供依据。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试留兰香来自河南农业职业学院科技园。２０１０
年４月下旬，选取春季萌发的含顶芽幼嫩茎段。
１．２　试验方法
１．２．１　初代培养　将含顶芽的幼嫩茎段去叶留茎，放于
洗洁精溶液洗涤，再用流水缓慢冲洗１～２ｈ，蒸馏水漂
洗数次带入无菌操作室，在超净工作台上用７０％～７５％
酒精浸洗３０ｓ，迅速用无菌水漂洗３次，将水沥干；再用
０．１％升汞（注：其中加有适量的吐温－８０）浸洗４、６、８、
１０ｍｉｎ，无菌水漂洗５次，最后用无菌纸吸干残留水分，
在无菌条件下将消毒灭菌后的材料剪成１．５ｃｍ左右长
的茎段，接种在琼脂含量为７ｇ／Ｌ（下同）的固体 ＭＳ培
养基［１０］上培养，培养基ｐＨ５．６～６．０（下同）。培养条件
（下同）为：温度（２５±２）℃，光照强度２　０００～３　０００ｌｘ，每
天光照时间１２ｈ，培养室空气相对湿度７０％左右。２周
后统计污染率、未萌芽率和存活率［１１］。污染率（％）＝（污
染外植体数／接种外植体数）×１００％，未萌芽率（％）＝
［（死亡外植体数＋未萌芽外植体数）／接种外植体数］×
１００％，存活率（％）＝（萌芽不污染外植体数／接种外植体
数）×１００％。
１．２．２　芽诱导培养　将初代培养中获得的无菌材料重
新剪成１．５ｃｍ 左右长的茎段，转接到 ＭＳ＋ＮＡＡ
０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋２５ｇ／Ｌ蔗糖与ＭＳ＋ＮＡＡ
０．０５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖固体培养基
上进行诱导培养。
１．２．３　芽增殖培养　以ＭＳ为基本培养基，进行４因素
３水平正交实验［１２］，正交实验因素及水平见表１。采用
旺盛生长且健壮一致的绿苗，取含顶芽且带２对叶片
　　　　表１　芽增殖试验生长调节剂处理因素水平
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ
ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｉｎ　ｂｕｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
水平
Ｌｅｖｅｌｓ
因素Ｆａｃｔｏｒｓ
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＧＡ３
／ｍｇ·Ｌ－１
蔗糖Ｓｕｇａｒ
／ｇ·Ｌ－１
１　 ０．０１　 ０．１　 ０　 ２０
２　 ０．０５　 ０．５　 ０．１　 ３０
３　 ０．２　 １．５　 ０．２　 ４０
６４１
北方园艺２０１３（１３）：１４６～１４９ ·生物技术·
长度２．５ｃｍ左右的茎段，接种于９组培养基中培养，每
组试验做５次重复，３周后统计芽增殖系数［９］。芽增殖
系数＝有效芽苗数／接种芽苗数，有效芽苗是指株高大
于等于０．５ｃｍ的组培苗。
１．２．４　生根培养　以ＭＳ培养基的微量、铁盐和有机物
为培养基基本成分，对ＭＳ大量元素、ＩＢＡ、ＫＴ和蔗糖浓
度进行４因素３水平正交实验，正交实验因素及水平见
表２。采用旺盛生长健壮一致的绿苗，取含顶芽且长
　　　　表２　生根试验生长调节剂处理因素水平
　　Ｔａｂｌｅ　２　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ
水平
Ｌｅｖｅｌｓ
因素Ｆａｃｔｏｒｓ
ＭＳ大量元素
ＭＳ　ｍａｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔ
ＩＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＫＴ
／ｍｇ·Ｌ－１
蔗糖Ｓｕｇａｒ
／ｇ·Ｌ－１
１　 １／４　 ０．２　 ０　 １５
２　 １／２　 １．０　 ０．０５　 ２０
３　 １　 ２．０　 ０．５　 ２５
度３ｃｍ左右的茎段，接种于９组培养基中培养，每组试
验做５次重复。２周后统计生根率、生根数和平均根长。
生根率（％）＝（生根苗数／接种苗数）×１００％；生根数，为
根长大于等于０．２ｃｍ的根数；平均根长＝每株总根长／
生根数。
２　结果与分析
２．１　无菌体系建立与芽诱导试验
２．１．１　外植体存活情况　由表３可知，随着浸洗时间
（４～１０ｍｉｎ）的延长，污染率降低的速度先快后慢，未
萌发率升高的速度先慢后快，存活率增高的速度先快
后慢，浸洗６ｍｉｎ的存活率最高，为６６．７％。可见，４月
下旬选取的留兰香春季萌发的含顶芽幼嫩茎段，以
７０％～７５％酒精浸洗３０ｓ，０．１％升汞浸洗６ｍｉｎ对外植
体消毒灭菌效果最好。
　　表３ 不同消毒时间对留兰香外植体存活率的影响
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｍｅｎｔｈａ　ｓｐｉｃａｔａ　Ｌｉｎｎ
０．１％升汞浸洗时间
０．１％ ｍｅｒｃｕｒｉｃ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ　ｄｉｐｐｉｎｇ　ｔｉｍｅ／ｍｉｎ
接种株数
Ｎｏ．ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ
污染株数
Ｎｏ．ｏｆ　ｐｏｌｕｔｉｏｎ
污染率
Ｐｏｌｕｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
未萌芽株数
Ｎｏ．ｗｉｔｈｏｕｔ　ｅｍｂｒｙｏ
未萌芽率
Ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｅｍｂｒｙｏ／％
存活数
Ｎｏ．ｏｆ　ｓｕｒｖｉｖａｌ
存活率
Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ／％
４　 ２４　 １８　 ７５．０　 ０　 ０　 ６　 ２５．０
６　 ２４　 ７　 ２９．２　 １　 ４．２　 １６　 ６６．７
８　 ２４　 ６　 ２５．０　 ４　 １６．７　 １４　 ５８．３
１０　 ２４　 ４　 １６．７　 ９　 ３７．５　 １１　 ４５．８
２．１．２　芽诱导情况　接种于 ＭＳ＋ＮＡＡ　０．０５ｍｇ／Ｌ＋
６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖固体培养基上的留兰香在
７ｄ内顶芽与腋芽就开始萌发，然后迅速生长；至第１４
天时，多个腋芽萌发，生长良好；第２１天时，苗明显增多
且健壮；接种于ＭＳ＋ＮＡＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋
２５ｇ／Ｌ蔗糖固体培养基上的留兰香生长势远不如前者，
后期有气生根产生。所以芽诱导以采用 ＭＳ＋ＮＡＡ
０．０５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼
脂培养基较好（图１－１）。
２．２　芽增殖培养
第７天时，各组植株生长正常，腋芽有所增殖，有些
植株茎基部呈浅红棕色；第１４天时，绝大部分植株生长
正常，芽增殖系数由高到低依次是第５、３、２、６、１、９、７、４、８
组，且第４、６、７组各有１～２个茎段基部及下部腋芽处有
白色根产生；第２１天时，芽增殖系数试验结果见表４。
由表４可知，对芽增殖系数高低产生的效应由主到次的
顺序是６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＧＡ３、蔗糖（方差分析表明６－ＢＡ差异
极显著，ＮＡＡ、ＧＡ３与蔗糖均不显著，说明６－ＢＡ浓度的
变化会引起芽增殖系数的显著变化），四者引起平均芽
增殖系数最高的水平依次是第２、１、２、１水平，即 ＭＳ＋
６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．０１ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．１ｍｇ／Ｌ＋
２０ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼脂就是比较适宜的芽增殖培养基
配方。因该配方不在９组试验内，对其验证的平均芽增殖
系数是６．００，且芽质量良好，比表４中平均芽增殖系数的
最高值５．８０略高，说明２号配方也是留兰香芽增殖的适
宜培养基配方。综合考虑芽增殖系数与芽苗质量，ＭＳ＋
６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．０１ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．１ｍｇ／Ｌ＋
２０～３０ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼脂就是最佳的芽增殖培养基
配方（图１－２）。
表４ 留兰香芽增殖培养正交实验
设计方案与试验结果直观分析
　　Ｔａｂｌｅ　４ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ
ｖｉｓｕａｌ　ｂｕｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｍｅｎｔｈａ　ｓｐｉｃａｔａ　Ｌｉｎｎ
试验号
Ｔｅｓｔ　ｎｕｍｂｅｒｓ
因素Ｆａｃｔｏｒｓ
ＮＡＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＧＡ３
／ｍｇ·Ｌ－１
蔗糖Ｓｕｇａｒ
／ｇ·Ｌ－１
均芽增殖系数
Ａｖｅｒａｇｅ　ｃｏｅｆｉｃｉｅｎｔ　ｏｆ
ｂｕｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
１　 ０．０１　 ０．１　 ０　 ２０　 ３．２０
２　 ０．０１　 ０．５　 ０．１　 ３０　 ５．８０
３　 ０．０１　 １．５　 ０．２　 ４０　 ５．００
４　 ０．０５　 ０．１　 ０．１　 ４０　 ２．６０
５　 ０．０５　 ０．５　 ０．２　 ２０　 ５．２０
６　 ０．０５　 １．５　 ０　 ３０　 ３．６０
７　 ０．２０　 ０．１　 ０．２　 ３０　 ２．２０
８　 ０．２０　 ０．５　 ０　 ４０　 ３．６０
９　 ０．２０　 １．５　 ０．１　 ２０　 ４．２０
Ｔ１ ４．６６　 ２．６７　 ３．４７　 ４．２０
Ｔ２ ３．８０　 ４．８７　 ４．２０　 ３．８７
Ｔ３ ３．３３　 ４．２７　 ４．１３　 ３．７３
Ｒ　 １．３３　 ２．２０　 ０．７３　 ０．４７
　　注：表中所有数据均为５次重复的平均值。下同。
Ｎｏｔｅ：Ａｌ　ｄａｔｕｍｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔａｂｌｅ　ａｒｅ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｏｆ　ｆｉｖｅ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｓａｍｅ　ｔｈｅ　ｂｅｌｏｗ．
２．３　生根培养
留兰香离体生根比较容易，早的第３天就产生了
７４１
·生物技术· 北方园艺２０１３（１３）：１４６～１４９
根。第７天时，１～９组均有苗产生根，平均生根数由高
到低依次是第４、６、８、２、１、８、５、７、９、３组，并且根大部分
在茎节的叶腋处产生，少数在茎基部产生；第１４天时，生
根率、平均生根数与平均根长见表５。由表５可知，对平
均生根数高低产生的效应由主到次的因素顺序是 ＭＳ
培养基大量元素、ＫＴ、ＩＢＡ、蔗糖（方差分析表明，ＭＳ大
量元素、ＫＴ浓度表现差异显著，ＩＢＡ、蔗糖均不显著），四
者最适的水平依次是第２、１、１、２水平，即１／２ＭＳ＋ＩＢＡ
０．２ｍｇ／Ｌ＋２０ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼脂就是比较适宜的
促进根分化的配方。对平均根长大小产生的效应由主
到次的因素顺序是 ＭＳ培养基大量元素、ＩＢＡ、ＫＴ、蔗糖
（方差分析表明 ＭＳ大量元素、ＩＢＡ浓度表现差异显著，
ＫＴ、蔗糖均不显著），四者最适水平依次是第２、１、２、３水
平，即１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０．０５ｍｇ／Ｌ＋２５ｇ／Ｌ
蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼脂就是比较适宜的促进根伸长生长的配
方。综合正交实验结果，以生根数与平均根长为主要参
考指标，并综合考虑生根率与组培苗生长状况，最终确
定以１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０～０．０５ｍｇ／Ｌ＋
２０～２５ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼脂为最佳的生根培养基配方
（图１－３）。
　　表５ 留兰香生根培养正交实验设计与结果直观分析
　　Ｔａｂｌｅ　５ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　ｖｉｓｕａｌ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｍｅｎｔｈａ　ｓｐｉｃａｔａ　Ｌｉｎｎ
试验号
Ｔｅｓｔ　ｎｕｍｂｅｒｓ
因素Ｆａｃｔｏｒ
ＭＳ大量元素
ＭＳ　ｍａｃｒｏｅｌｅｍｅｎｔ
ＩＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＫＴ
／ｍｇ·Ｌ－１
蔗糖Ｓｕｇａｒ
／ｇ·Ｌ－１
生根率
Ｒｏｏｔ　ｒａｔｅ／％
平均生根数
Ａｖｅｒａｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｒｏｏｔ
平均根长
Ａｖｅｒａｇｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｒｏｏｔ／ｃｍ
１　 １／４　 ０．２　 ０　 １５　 １００　 ６．２０　 ０．６５
２　 １／４　 １．０　 ０．０５　 ２０　 １００　 ７．００　 ０．５９
３　 １／４　 ２．０　 ０．５　 ２５　 ５７　 ２．００　 ０．４２
４　 １／２　 ０．２　 ０．０５　 ２５　 １００　 ８．８０　 ０．８６
５　 １／２　 １．０　 ０．５　 １５　 １００　 ５．００　 ０．４２
６　 １／２　 ２．０　 ０　 ２０　 １００　 ７．８０　 ０．５２
７　 １　 ０．２　 ０．５　 ２０　 ７１　 ４．００　 ０．４４
８　 １　 １．０　 ０　 ２５　 １００　 ５．４０　 ０．３４
９　 １　 ２．０　 ０．０５　 １５　 ８０　 ３．００　 ０．３０
Ｔ１ ５．０７　 ６．３３　 ６．４７　 ４．７３
Ｔ２ ７．２０　 ５．８０　 ６．２７　 ６．２７
Ｔ３ ４．１３　 ４．２７　 ３．６７　 ５．４０
Ｒ　 ３．０７　 ２．０７　 ２．６０　 １．５３
Ｔ１′ ０．５５　 ０．６５　 ０．５０　 ０．４６
Ｔ２′ ０．６０　 ０．４５　 ０．５８　 ０．５１
Ｔ３′ ０．３６　 ０．４１　 ０．４２　 ０．５４
Ｒ′ ０．２４　 ０．２４　 ０．１６　 ０．０９
　　注：Ｔ１～Ｔ３为平均生根数水平均值；Ｔ１’～Ｔ３’为平均根长水平均值。
Ｎｏｔｅ：Ｔ１～Ｔ３ａｒｅ　ｌｅｖｅｌ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ａｖｅｒａｇｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｒｏｏｔ；Ｔ１’～Ｔ３’ａｒｅ　ｌｅｖｅｌ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ａｖｅｒａｇｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｒｏｏｔ．
图１　留香兰组织培养过程
Ｆｉｇ．１　Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ｍ．ｓｐｉｃａｔａ
２．４　练苗移栽
２０１１年４月上旬开始，在温室内对苗高３～５ｃｍ，生
根２～３条，根长０．５～１ｃｍ的组培苗进行练苗。先闭瓶
练苗７～１０ｄ，然后开口加少量自来水半开口练苗３～５ｄ，
再敞开口练苗３～５ｄ，每天都要更换自来水，待老叶逐
渐脱落新芽逐渐长出，准备移栽。首先用自来水洗净根
上的培养基，在５０％多菌灵可湿性粉剂６００～８００倍溶
液中浸根１０ｍｉｎ，移植入草炭∶蛭石∶珍珠岩（２∶１∶１）
的基质中，浇透水（也可用多菌灵溶液浇灌），盖上小拱
棚，７～１０ｄ后撤去拱棚。期间控制温度２０～３０℃，遮
８４１
北方园艺２０１３（１３）：１４６～１４９ ·生物技术·
光，湿度９０％以上。成活率可达９３．３％以上（图４）。
３　讨论与结论
切取外植体时供体植株的生理状态对于芽的反应
能力有明显的影响。在生长季节开始时由活跃生长的
枝条上切取的外植体，通常能产生最好的效果［１０］。在每
年４月选取留兰香春季萌发的含顶芽的幼嫩茎段作为
外植体不仅培养效果好，而且比较容易消毒灭菌。试验
表明，以７０％～７５％酒精浸洗３０ｓ，无菌水漂洗３次，沥
干水后再用０．１％升汞浸洗６ｍｉｎ，无菌水漂洗５次，存
活率最高，为６６．７％。
在通过促进腋芽萌发来实现芽增殖的丛生芽增殖
型中，培养基中适当浓度的细胞分裂素可增强腋芽生枝
能力，使枝条的繁殖系数显著提高。当细胞分裂素的水
平较高时，形成茎芽的数目可能较多，但每个茎芽的生
长会受到抑制，有时还要加入ＧＡ３以促使茎的伸长［１０］。
芽增殖正交实验结果表明，细胞分裂素６－ＢＡ浓度对芽
增殖系数影响极显著，而ＮＡＡ、ＧＡ３与蔗糖浓度影响不
显著。在 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．０１ｍｇ／Ｌ＋
ＧＡ３０．１ｍｇ／Ｌ＋２０～３０ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ琼脂的培养
基配方上留兰香芽增殖系数最高约为６．００，其植株生产
健壮。随着增殖培养的继代次数增多，较高浓度的６－ＢＡ
会加速玻璃化苗的产生，可以通过降低温度如１８～
２２℃，或提高琼脂浓度如７．５～８．０ｇ／Ｌ等措施防止
玻璃化，使苗健壮。通常认为生长素能促进植物生
根，６－ＢＡ抑制生根，但在芽增殖试验中观察到在６－ＢＡ浓
度较高的６号配方中苗的下部腋芽处也分化出根，这一
现象杨乃博［６］也有报道。
对大多数物种来说，生根培养基中盐的浓度应该减
少，诱导生根需要有适当的生长素［１０］。留兰香生根正
交实验表明，留兰香易生根，早的３ｄ就能长根。ＭＳ
大量元素、ＫＴ浓度对生根数影响显著，ＩＢＡ、蔗糖浓度
影响不显著；ＭＳ大量元素、ＩＢＡ浓度对平均根长影响
显著，ＫＴ、蔗糖浓度影响不显著。综合考虑，１／２ＭＳ＋ＩＢＡ
０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０～０．０５ｍｇ／Ｌ＋２０～２５ｇ／Ｌ蔗糖＋７ｇ／Ｌ
琼脂的培养基就是最佳的生根培养基配方。
留兰香练苗移栽中，温度是基础，控制在２０～３０℃；
湿度是关键，控制在９０％以上；避强光也很重要；移植入
草炭∶蛭石∶珍珠岩（２∶１∶１），成活率达９３．３％以上。
参考文献
［１］　沙红，廖康．药用植物留兰香的组织培养研究［Ｊ］．新疆农业大学学
报，２００３，２６（１）：１０－１２．
［２］　曹继华，朱聪明，李艳丽．薄荷及其伪品的鉴别［Ｊ］．河南中医学院学
报，２００４，１９（１）：３０－３１．
［３］　郑健，高慧媛，陈广通，等．留兰香的活性成分（Ⅰ）［Ｊ］，沈阳药科大学
学报，２００６，２３（３）：１４５－１４７．
［４］　陈创成，万馥磐，杨国华，等．留兰香油成份分析［Ｊ］．香料与香精，
１９８１（１）：１－１０．
［５］　钟敬凤．留兰香的栽培［Ｊ］．现代农业，２００１（９）：１７．
［６］　杨乃博．十二种植物的试管无性繁殖［Ｊ］．植物学报，１９８１，２３（４）：
２８４－２８７．　
［７］　柴明良．留兰香玻璃苗愈伤组织化再生正常植株［Ｊ］．植物生理学通
讯，１９９１，２７（５）：３７１－３７６．
［８］　柴明良．留兰香的试管增殖［Ｊ］．植物生理学通讯，１９９４（１）：３０．
［９］　王小敏，梁呈元，李维林．留兰香组织培养及快速繁殖条件的优化
［Ｊ］．植物资源与环境学报，２００７，１６（４）：３８－４２．
［１０］李俊明．植物组织培养教程［Ｍ］．２版．北京：中国农业大学出版社，
２００２（２１）：２５１－２８２．
［１１］肖显华，王顺珍，藏林荣，等．植物材料表面消毒方法的改进［Ｊ］．生物
技术，１９９９，９（１）：４３－４５．
［１２］方萍．实用农业试验设计与统计分析指南［Ｍ］．北京：中国农业出版
社，２０００：１２５－１５１．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｍｅｎｔｈａ　ｓｐｉｃａｔａ　Ｌｉｎｎ
ＳＨＥＮ　Ｓｈｕｎ－ｘｉａｎ，ＬＩ　Ｘｕｅ－ｈｕｉ，ＨＥ　Ａｉ－ｌｉ，ＦＡＮ　Ｙａ－ｍｉｎ
（Ｈｅｎａｎ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ，Ｚｈｏｎｇｍｕ，Ｈｅｎａｎ　４５１４５０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｔｅｎｄｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｂｕｄ　ｉｎ　ｓｐｒｉｎｇ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ，ｔｈｅ
ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｍｅｎｔｈａ　ｓｐｉｃａｔａ　Ｌｉｎｎ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ
ｄｉｓｉｎｆｅｃｔａｎｔ　ｗａｓ　７０％ｔｏ　７５％ａｌｃｏｈｏｌ（ｗａｓｈｅｄ　ｆｏｒ　３０ｓ）ａｎｄ　０．１％ ｍｅｒｃｕｒｉｃ　ｃｈｌｏｒｉｄｅ（ｗａｓｈｅｄ　ｆｏｒ　６ｍｉｎ）．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｓｈｏｏｔ　ｗａｓ　ＭＳ＋ＮＡＡ　０．０５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋３０ｇ／Ｌ　ｓｕｇａｒ＋７ｇ／Ｌ　ａｇａｒ；ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ
ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔ　ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．０１ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．１ｍｇ／Ｌ＋２０ｇ／Ｌ　ｔｏ　３０ｇ／Ｌ　ｓｕｇａｒ＋
７ｇ／Ｌ　ａｇａｒ；ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｗａｓ　１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０ｔｏ　０．０５ｍｇ／Ｌ＋２０ｇ／Ｌ　ｔｏ　２５ｇ／Ｌ　ｓｕｇａｒ＋
７ｇ／Ｌ　ａｇａｒ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍｅｎｔｈａ　ｓｐｉｃａｔａ　Ｌｉｎｎ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ
９４１