全 文 ：列康能更显著地降低大鼠血清 FN和 LN的水平。笔
者认为其作用机制主要有以下几个方面:第一，本病
发病因素中，寒、湿、瘀相互搏结而形成的败精瘀阻最
为关键，因而温通经脉、祛寒除湿、活血化瘀就成为本
病的治疗大法，故而运用全国著名针灸专家郑魁山教
授的家传针刺手法温通针法。温可温通经脉，祛寒除
湿;通可疏通经络，行气和血，活血化瘀，从而全面、有
效地针对了本病的病因、病机，降低 CNBP大鼠 FN和
LN水平，缓解或解除了前列腺局部的炎性浸润与纤
维化，较平补平泻针法和前列康疗效佳好。第二，温
通针法针刺关元、曲骨等穴位，不仅改善了前列腺局
部的微循环、达到活血化瘀的目的，还调节了支配前
列腺的所有神经，解除了会阴、少腹及腰骶部的坠胀、
疼痛等不适，促使前列腺分泌功能康复［5］;针刺行间
穴有抗炎和抗变态反应、扩张外周血管、改善微循环
等作用［12］。
综上所述，温通针法治疗 CNBP 的机制与降低
FN、LN含量，调节机体微循环，降低前列腺的纤维化
而达到温通经脉、祛寒除湿、活血化瘀的作用有关;且
温通针法疗效明显优于平补平泻针法和前列康。该
法疗效确切，效果独特，值得推广应用。
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作者简介
赵耀东(1972 －)，男(汉族)，甘肃兰州人，硕士学位，副
教授，研究方向:传统针刺手法的临床及实验研究。
* 基金项目:甘肃省科技厅自然基金项目(1208ＲJZA248)
收稿日期:2015 －04 －18;修回日期:2015 －07 －07
(编辑 陶 珠)
文章编号:1001 －6910(2015)09 －0072 －04 ·药学研究·
HPLC同时测定甘肃不同产地黄芩及不同炮制品中黄芩苷、
黄芩素及汉黄芩素的含量*
杨志军，杨秀娟，耿广琴，李 晶，邓 毅
(甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000)
摘要 目的:建立反相高效液相色谱法同时测定甘肃不同产
地黄芩及不同炮制品中黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素的含量。
方法:采用 Phecda C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱，以甲
醇 － 2 g /L 冰醋酸溶液为流动相，梯度洗脱，检测波长为
278 nm，流速1． 0 mL/min，进样量10 μL，柱温30 ℃。结果:黄
芩苷、黄芩素、汉黄芩素的线性范围分别为 0． 06 ～ 9． 00 μg
(r =0． 999 9)，0． 001 0 ～0． 300 0 μg(r = 0． 999 9)，0． 001 05 ～
0． 315 0 μg(r =0． 999 96)，黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的平均
回收率分别为 102． 77% (ＲSD = 3． 64%)，98． 75% (ＲSD =
1． 31%)，96． 90%(ＲSD = 1． 84%)。结论:本法操作简便、快
捷、结果准确、可用于黄芩的质量控制。
关键词 黄芩;高效液相色谱法;黄芩苷;黄芩素;汉黄芩素;
含量测定;炮制;甘肃
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:B
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 －6910． 2015． 09． 35
黄芩为唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis
Georgi的干燥根，是我国的传统中药，具有清热燥湿、
泻火解毒、止血安胎等功效［1］。现代研究显示其具有
抗心律失常、抑菌、抗癌等作用［2 － 3］。黄芩的主要活
性成分有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等，不同炮制方法
对其含量亦有影响［4 － 5］。黄芩虽非甘肃道地药材，但
·27· 中医研究 2015 年 9 月 第 28 卷 第 9 期 TCM Ｒes． September 2015 Vol． 28 No． 9
由于近年来栽培面积大、产量高，临床疗效好，已被确
定为甘肃“十大陇药”之一。本研究拟采用高效液相
色谱法建立同时测定甘肃陇西、岷县、漳县及渭源 4
个代表产区黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素 3 种主
要成分的方法，并分别测定 4 个产地的生黄芩、酒黄
芩和黄芩炭中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量，以探
讨并比较甘肃不同产区黄芩及其不同炮制品的质量
差异，并为下一步进行甘肃不同产区黄芩的药效研究
提供实验数据，也为更好地开发、利用甘肃资源打下
坚实的基础。
1 材 料
1． 1 药品、试剂与仪器
黄芩于 2014 年 11 月初采自甘肃省陇西县文峰
镇(1100)、陇西县首阳镇(1101)、岷县(1102)、渭源
县(1103)、漳县(1104) ，均为两年生植物，按采集次序
依次编号为 1100 －1104，经甘肃中医药大学药学院杜
弢教授鉴定为唇形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis
Georgi的干燥根。甲醇为色谱纯，磷酸等其他试剂均
为分析纯，购自天津市富宇精细化工有限公司，黄芩
苷对照品(批号 10715 － 201117)、黄芩素对照品(批
号111595 －201306)、汉黄芩素对照品(批号111514 －
200403) ，均购自中国药品生物制品检定所。Agilent
1260高效液相色谱仪(DAD检测器，四元泵)，美国 Ag-
ilent公司产品;Phecda C18色谱柱(4． 6 mm × 250 mm，
5 μm) ，Hanbon Sci． ＆ Tech． 公司产品;AL104 电子
天平，梅特勒 －托利多仪器上海有限公司产品;HH
－ S 恒温水浴锅，金坛市大地自动化仪器厂产品;
KQ －250 超声清洗仪，昆山市超声仪器有限公司产
品;SFG －02B电热恒温鼓风干燥箱，黄石市恒丰医
疗器械有限公司产品。
1． 2 炮制品制备
生品黄芩的制备:取黄芩，除去杂质，置沸水中
煮 10 min，取出，焖透，切薄片，干燥。酒制黄芩的制
备:将黄芩以温水泡 1 h，加酒拌匀，蒸至上气时取
出，切片，干燥(每 100 kg 黄芩，用酒 12． 5 kg)。炒
炭黄芩的制备:取黄芩片，置锅内用武火加热，炒至
黑褐色时，喷淋清水少许，灭尽火星，取出，晾透。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
色谱柱为 Phecda C18 (4． 6 mm × 250 mm，
5 μm) ，流动相为 20 mL /L 冰醋酸溶液(A)－甲醇
(B)，梯度洗脱(0 －25 min，50% ～25%A;25 －30 min，
25% ～ 50% A) ，柱温 30 ℃，波长 277 nm，进样量
10 μL，流速 1 mL /min。
2． 2 混合对照品溶液的制备
精密称取黄芩苷 6． 00 mg、黄芩素 5． 00 mg、汉
黄芩素对照品 5． 25 mg，分别置 10 mL 量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀，即得质量分数为 600，500，
525 mg /L的黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素对照品贮备
液。精密吸取黄芩苷对照品溶液 1 mL 置 10 mL 量
瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得质量分数为 60 mg /L
的黄芩苷对照品稀释液;再精密吸取黄芩素及汉黄
芩素对照品溶液各 1 mL，置 25 mL 量瓶中，加甲醇
至刻度，摇匀，即得质量分数分别为 20，21 mg /L 的
黄芩素和汉黄芩素混合对照品溶液 A;再精密吸取
黄芩素及汉黄芩素混合对照品溶液各 0． 5 mL，置
10 mL量瓶中，即得质量分数为 1． 00，1． 05 mg /L 的
黄芩素和汉黄芩素混合对照品溶液 B。精密量取质
量分数为 600 mg /L的黄芩苷贮备液及质量分数分
别为 20，21 mg /L的黄芩素和汉黄芩素对照品混合
溶液各1 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，即得
黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量分别为 60，2． 0，
2． 1 mg /L的溶液，作为混合对照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备
取黄芩药材粉末(过四号筛)约 0． 3 g，精密称
定，置圆底烧瓶中，加入 700 mL /L乙醇 40 mL，超声
处理(功率 250 W，频率 40 kHz)30 min，放冷，滤过;
滤液置 100 mL量瓶中，加 700 mL /L 乙醇分次洗涤
容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加 700 mL /L 乙
醇至刻度，摇匀;精密量取 1 mL，置 10 mL 量瓶中，
加甲醇至刻度，摇匀，即得。用 0． 45 μm 微孔滤膜
过滤，取续滤液 10 μL注入液相色谱仪。
2． 4 线性考察
分别精密吸取 2． 2 项下质量分数为 600 mg /L
的黄芩苷对照品贮备液①2． 5，5，10，15 μL 和质量
分数为 60 mg /L的黄芩苷对照品稀释液②1，2． 5，5，
10 μL，注入液相色谱仪，测得峰面积，再分别精密吸
取 2． 2 项下的黄芩素和汉黄芩素混合对照品溶液 A
1，2． 5，5，10，15 μL 和混合对照品溶液 B 1，2． 5，5，
10 μL，分别以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐
标进行线性回归。结果表明:黄芩苷在 0． 06 ～9． 00 μg
范围内线性关系良好，回归方程为 Y = 3 512． 4X －
115． 4(r = 0． 999 9) ;黄芩素在 0． 001 0 ～ 0． 300 0 μg
范围内线性关系良好，回归方程为 Y = 5 406． 6X +
0． 062 2(r = 0． 999 9) ;汉黄芩素在 0． 001 05 ～
0． 315 0 μg范围内线性关系良好，回归方程为 Y =
6 047． 6X + 2． 021 1(r = 0． 999 96)。
2． 5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 10 μL，连续进样
6 次，测得黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的峰面积 ＲSD
值分别为 0． 48%、0． 40%和 0． 52%。结果表明:仪
器具有良好的精密度。
·37·中医研究 2015 年 9 月 第 28 卷 第 9 期 TCM Ｒes． September 2015 Vol． 28 No． 9
2． 6 重复性试验
分别精密称取同一批药材，按 2． 3 项下方法平
行制备 6 份供试品溶液，按 2． 1 项下色谱条件测定。
结果:黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的平均含量分别为
153． 44，4． 54，1． 49 mg /g，ＲSD 分别为 2． 60%、
3． 18%、3． 08% (n = 6)。结果表明:重复性较好。
色谱图见图 1。
1．黄芩苷;2．黄芩素;3．汉黄芩素;
A．对照品;B．黄芩样品
图 1 黄芩含量测定 HPLC色谱图
2． 7 稳定性试验
取同一供试品溶液，室温放置，并分别于 0，2，
4，6，8，10，12，24 h 进样测定。结果:3 种待测黄酮
峰面积的 ＲSD 分别为黄芩苷 0． 29%，黄芩素
0． 78%，汉黄芩素 1． 54%。结果表明:供试品溶液
在 24 h内稳定。
2． 8 加样回收率试验
精密称取已知黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素含量
分别为 153． 44，4． 54，1． 49 mg /g 的黄芩药材 6 份，
每份约 0． 15 g，加入黄芩苷对照品约 22 mg，精密称
定，精密加入黄芩素对照品溶液(500 mg /L)1． 4 mL、
汉黄芩素对照品溶液(525 mg /L)0． 45 mL，以下按
2． 3 方法制备加样回收供试品溶液，分别精密吸取
对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，注入液相色谱
仪，测定。结果见表 1。
2． 9 含量测定
鉴于岷县酒制品、渭源酒制品中汉黄芩素的含
量及岷县炒炭品中黄芩苷的含量过低，故在 2． 3 项
下供试品溶液的制备方法基础上，将最后一步改为
精密量取 1 mL，置 5 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇
匀，即得。其余样品按 2． 3 项下方法制备。按选定
的色谱条件对甘肃不同产地及不同炮制品的黄芩中
黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素进行测定，每批平行 3
次，含量测定结果见表 2。
表 1 加样回收率试验结果 n = 6
测定成分 取样量 / g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
黄芩苷 0． 147 2 22． 59 22． 58 44． 08 95． 17 102． 78 3． 65
0． 149 6 22． 95 23． 80 47． 75 104． 20
0． 150 2 23． 05 23． 88 48． 08 104． 82
0． 146 7 22． 51 23． 79 47． 21 103． 83
0． 151 8 23． 29 23． 80 48． 01 103． 87
0． 152 4 23． 38 23． 85 48． 37 104． 78
黄芩素 0． 147 2 0． 67 0． 70 1． 35 97． 14 99． 05 1． 49
0． 149 6 0． 68 0． 70 1． 38 100． 00
0． 150 2 0． 68 0． 70 1． 38 100． 00
0． 146 7 0． 67 0． 70 1． 37 100． 00
0． 151 8 0． 69 0． 70 1． 37 97． 14
0． 152 4 0． 69 0． 70 1． 39 100． 00
汉黄芩素 0． 147 2 0． 22 0． 21 0． 42 95． 24 96． 03 2． 02
0． 149 6 0． 22 0． 21 0． 43 100． 00
0． 150 2 0． 22 0． 21 0． 42 95． 24
0． 146 7 0． 22 0． 21 0． 42 95． 24
0． 151 8 0． 23 0． 21 0． 43 95． 24
0． 152 4 0． 23 0． 21 0． 43 95． 24
·47· 中医研究 2015 年 9 月 第 28 卷 第 9 期 TCM Ｒes． September 2015 Vol． 28 No． 9
表 2 甘肃不同产地及不同炮制品黄芩中黄芩苷、
黄芩素与汉黄芩素含量测定 n = 3
产地 炮制方法 黄芩苷 /% 黄芩素 /% 汉黄芩素 /%
陇西(文峰镇) 生品 15． 34 0． 45 0． 15
酒制 15． 32 0． 52 0． 38
炒炭 1． 21 0． 88 1． 12
陇西(首阳镇) 生品 16． 50 0． 49 0． 17
酒制 16． 46 0． 48 0． 32
炒炭 2． 07 0． 71 1． 01
岷县 生品 15． 33 0． 05 1． 14
酒制 15． 84 0． 16 0． 07
炒炭 2． 40 1． 84 1． 54
渭源 生品 16． 87 0． 10 1． 26
酒制 16． 97 0． 22 0． 09
炒炭 9． 51 4． 80 3． 07
漳县 生品 18． 89 0． 16 1． 56
酒制 18． 15 0． 16 1． 72
炒炭 3． 01 2． 20 1． 75
3 讨 论
目前 2010 版《中国药典》一部黄芩项下仅以黄
芩苷的含量测定方法为标准，而黄芩苷在内源酶催
化水解作用下会产生大量黄芩素［7］;因此仅以黄芩
苷作为指标不能全面评价黄芩药材的质量。本实验
采用 HPLC建立同时测定甘肃黄芩中黄芩苷、黄芩
素及汉黄芩素含量的测定方法，为全面衡量及综合
评价黄芩药材质量提供了参考。
在色谱条件的考察过程中，我们对检测波长、流
动相组成、样品提取方式、提取溶剂及提取时间做了
考察，经 HPLC-DAD 检测器全波长扫描，黄芩苷、黄
芩素及汉黄芩素在波长 277 nm处有最大吸收，与文
献报道［8 － 10］基本一致。通过考察甲醇及 700 mL /L
乙醇两种溶媒及提取时间 30 min、45 min、1 h、3 h，
优化出最佳提取条件为黄芩用 700 mL /L 乙醇超声
处理 30 min。本实验以甘肃省黄芩产量较大的陇
西、漳县、渭源及岷县 4 个产区的黄芩为研究对象进
行黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素 3 种成分的含量比较，
结果:4 个产地生品黄芩中黄芩苷含量均符合 2010
版《中国药典》一部饮片标准，不同产地黄芩生品中
黄芩苷含量由高到低依次为漳县 ＞渭源 ＞陇西 ＞岷
县，黄芩素含量由高到低依次为陇西 ＞漳县 ＞渭源
＞岷县，汉黄芩素含量由高到低依次为漳县 ＞渭源
＞岷县 ＞陇西。结果显示:不同产地的黄芩中黄芩
苷、黄芩素和汉黄芩素含量存在一定差异。黄芩的
炮制方法很多，现代炮制中最常用的方法为蒸法、酒
法及炒炭。本研究用以上 3 种炮制方法对 4 个产区
的黄芩进行炮制，以不同产区中 3 种成分含量最高
陇西进行比较，结果:黄芩苷的含量由高到低依次为
生品黄芩 ＞酒制黄芩 ＞炒炭黄芩，黄芩素和汉黄芩
素的含量由高到低依次为炒炭黄芩 ＞生品黄芩、酒
制黄芩。此与黄芩炒炭后黄芩苷的含量下降、黄芩
素与汉黄芩素的含量显著升高的文献报道［11］一致，
提示炒炭后黄芩由于受到局部高热会导致黄芩苷等
黄酮苷分解破坏，可转化成苷元。
本研究采用 HPLC 测定黄芩的 3 种主要成分，
确定甘肃最佳的黄芩产区及最佳的炮制方法，为下
一步进行甘肃产黄芩的药效研究及有效成分的提取
打下了坚实基础。
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作者简介
杨志军(1971 －) ，女(汉族) ，甘肃天水人，副教授，在读
博士研究生，主要从事中药及复方化学成分与药效研究。
通信作者:邓毅，教授，博士生导师，dengyi@ gszy． edu． cn
* 基金项目:甘肃省高校基本科研业务费项目(BH2012 －
020) ;甘肃中医学院中青年基金项目(2305016601)
收稿日期:2015 － 03 － 31;修回日期:2015 － 07 － 06
(编辑 陶 珠)
《中医研究》杂志投稿信箱:zgzyyj@ 126． com
·57·中医研究 2015 年 9 月 第 28 卷 第 9 期 TCM Ｒes． September 2015 Vol． 28 No． 9