全 文 ：4 讨论
复方护肝解酒晶是以天然水果及卫生部公布的药食两
用或可用于保健食品的中药为原料，加上适宜的辅料制备
而成，不仅可起到很好的解酒作用，同时还有护肝作用。
本实验发现，复方护肝解酒晶高、中剂量组可显著升
高 ADH活性 (P ＜ 0. 05)，加快乙醇在体内的代谢。由于
在乙醇代谢过程中，ADH起到重要作用，因此根据其活性
可判断乙醇在体内的代谢速度［9］，并能显著抑制肝细胞 TG
和 MDA 水平的升高 (P ＜ 0. 05) ，显著增加 GSH 水平 (P
＜ 0. 05)。乙醇可导致磷酸甘油增多，从而促进 TG 合成，
同时激活氧分子，产生大量氧自由基，致使肝细胞膜的脂
质过氧化及体内 GSH 的耗竭［10］，而且它还能直接与 GSH
结合［11］，消耗后者的量，使其抗氧化能力减弱，导致
MDA水平升高，显著降低血清中 AST 和 ALT 活力 (P ＜
0. 05)，它们主要存在于肝细胞中，当肝脏受损时，肝脏中
的转氨酶会进入血液，引起血清中两者水平升高。正常情
况下，肝内转氨酶的含有量约为血液中的 100 倍，但当肝
脏受损时，1%的肝细胞坏死就可使血清转氨酶的活性升高
1 倍［12］。因此，转氨酶活性的升高是肝脏损害的重要标志。
综上所述，复方护肝解酒晶具有显著的解酒和护肝
作用。
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椭圆叶花锚总黄酮对脂肪性肝炎模型大鼠的药理作用研究
顾秀琰1， 朱建坤2* ， 张 琳1
(1． 甘肃省中医院药学部，甘肃 兰州 730050;2． 甘肃中医学院教学实验中心，甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2014-12-24
基金项目:甘肃省中医药管理局科研立项课题项目 (GZK-2013-2)
作者简介:顾秀琰 (1971—)，女，副主任中药师，研究方向为中药质量控制。Tel:13893322113，E-mail:gzl060111@ 163． com
* 通信作者:朱建坤 (1970—)，男，硕士，讲师，研究方向为中医肝病。Tel:13919979317
摘要:目的 探讨椭圆叶花锚总黄酮对脂肪性肝炎模型大鼠血清中超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、白蛋
白 (ALB)与谷丙转氨酶 (ALT)水平的影响。方法 制备实验大鼠脂肪性肝炎模型，提取椭圆叶花锚总黄酮，混入
饲料作为给药治疗途径。然后，提取血清，检测 SOD与 MDA水平，并制作肝脏病理切片进行观察。结果 椭圆叶花
锚总黄酮可降低 MDA水平、升高 SOD水平，一定程度上改善了肝脏细胞受损程度。结论 椭圆叶花锚总黄酮治疗脂
肪性肝炎的途径可能为其有效成分总黄酮作用于肝脏细胞，改善细胞功能，增强了抗氧化酶系统在抗氧自由基过程中
的作用。
关键词:椭圆叶花锚;总黄酮;脂肪性肝炎;抗氧化酶;抗氧自由基
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2015)10-2308-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 10. 049
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氧自由基关系到多种疾病的发生与发展，许多疾病的
病理变化与过量自由基的产生有关联。在肝炎病变过程中，
氧自由基是参与其间的一类物质，在不同程度和阶段的病
理过程中可有不同程度和范围的作用。椭圆叶花锚作为治
疗肝胆疾病的传统民族植物药［1］，对其黄酮类成分抗氧自
由基作用的研究，是了解该植物的一项必要途径。
1 材料与方法
1. 1 药物与仪器 椭圆叶花锚全草 (采自甘肃省甘南藏族
自治州，地域海拔 3 500 米左右) ，由甘肃省中医院闵云山
主任药师和甘南林业技术服务中心杜平研究员共同鉴定。
大鼠 IgG ELISA、白蛋白 ELISA、ALT ELISA 检测试剂盒
(美国 USCN公司);大鼠 SOD ELISA、丙二醛 ELISA 试剂
盒 (日本株式会社同仁化学研究所) ;恒温水浴箱、分光
光度计、移液枪 (广州聚能生物科技有限公司)。乙醇为
分析纯 (国药集团化学试剂有限公司)。
1. 2 实验动物 SD 大鼠 80 只，SPF 级，体质量 (200 ±
20)g (甘肃中医学院实验动物中心，实验动物生产许可
证号 SCXK ［甘］ 2011-0001)。
1. 3 椭圆叶花锚黄酮提取流程 椭圆叶花锚全草→干燥→
粉碎→过 60 目筛→称定质量→75%乙醇浸提→浸提液减压
浓缩成浸膏→干燥→粉碎。
1. 4 动物模型 (脂肪性肝炎)制备 取正常喂养 1 周后的
大鼠 80 只，随机分为空白对照组、模型对照组、高剂量
组、低剂量组，每组 20 只，均给以普通饲料，自由饮水。
其中，模型组大鼠附加高能量合剂，用合剂加蒸馏水配制
成质量浓度为 1 g /mL的混浊液，按 1 g 高能合剂 /100 g 大
鼠体质量的量，每天灌胃 1 次，连续 30 d。结果，观察到
大鼠行动迟缓、毛色晦暗、肝脏有不同程度的肿大或右肋
下触痛敏感、进食量减少等体貌特征，而且肝脏组织 HE
染色发现，肝小叶结构完整，少许细胞出现脂肪变性，汇
管区有炎症细胞浸润，部分肝细胞坏死，说明造模成功［2］
(高能量合剂的组成为猪油 15 g、植物油 15 g、胆固醇 7. 5
g、蔗糖 15 g、胆盐 1 g、奶粉 8 g、复合维生素 0. 5 g、吐温
8. 5 mL、丙二醇 5 mL，加蒸馏水至 100 mL［3］)。
1. 5 给药方法 造模成功后 7 d开始给药，其中高、低剂
量组是给药组，分别以 5、1 gkg的量加入椭圆叶花锚黄酮
(加入方法为称定每组大鼠的总体质量，分别以 5、1 gkg
的比例称取椭圆叶花锚黄酮，混入粉碎的饲料中，压制烘
干)，连续给药 15 d，给药结束后按造模前正常的饲养方法
进行饲养。
1. 6 实验动物处理 给药结束，正常饲养 7 d 后，麻醉大
鼠，股动脉采血 (不加抗凝剂)约 5 mL。然后，断颈处死
大鼠，剖腹摘取肝脏，置于 4%福尔马林溶液中固定。
1. 7 标本处理
1. 7. 1 肝脏切片 取固定好的肝脏组织，放入脱水机中进
行脱水 (95%乙醇阶段加上 E 染色操作)，再通过透明、
透蜡、包埋、切片、贴片、烘干、脱蜡、复水以及 H 染色
后，得到肝脏组织细胞染色切片。然后，通过显微镜观察、
对比、分析肝脏组织学变化。
1. 7. 2 血清检测 利用酶联免疫法分别对 SOD、MDA、血
清白蛋白 (ALB)以及 ALT 这四种生化物质进行定量检
测，将采得的血液置于试管中，待其凝固后，分离血清。
然后，准备酶联反应孔板，设定空白孔、标准孔以及加标
孔，分别加样，按照温育→配液→洗涤→加酶→温育→洗
涤→显色→终止的步骤，应用 SOD试剂得到测定液。在待
测样品终止 15 min内进行测定，以空白孔调零，450 nm波
长下依次测量各孔的吸光度，分别得到 SOD和 MDA的 OD
值。由于光度值直接反映了生化物质含有量的变化，因此
本实验直接用它进行结果比较与分析，不进行含有量值的
转换。
1. 8 数据分析 利用 SPSS 12. 0 统计软件进行分析，结果
以 x ± s表示，实验结果采用方差分析，组间差异的两两比
较采用 q检验。
2 结果
2. 1 椭圆叶花锚黄酮对脂肪性肝炎模型大鼠肝细胞的影响
在肝脏切片病检时观察到，模型对照组大多 (15 个切
片，占 75%)肝细胞肿大，胞浆疏松，呈网状半透明，具
备胞浆疏松化特征，汇管区有少量炎性细胞的浸润，胞浆
内多见脂滴性空泡，提示肝细胞脂肪性变化特征。另外，
低剂量治疗组病理切片观察结果与模型对照组细胞的组织
特点接近，见图 1;高剂量治疗组大多 (14 个切片，占
70%)干细胞分布均匀，胞浆疏松化肝细胞较少，胆管与
汇管区受压程度减轻，炎症细胞少见或没有，见图 2。
图 1 模型对照组肝脏切片 (20 ×40)
图 2 高剂量药物组肝脏切片 (20 ×20)
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2. 2 椭圆叶花锚黄酮对 SD大鼠血清 ALB和 ALT水平的影
响 与空白组比较，模型组 ALB 水平降低，ALT 水平升
高，提示模型大鼠肝细胞受损，血清蛋白合成减少，细胞
受损后转氨酶释入血液的量显著增加 (P ＜ 0. 05);与模型
组比较，各剂量组 ALB水平升高，ALT 水平降低，提示肝
细胞受损程度明显缓解 (P ＜ 0. 05)。另外，低、高剂量组
间 ALB和 ALT水平的差异不显著 (P ＞ 0. 05)，但反映出
含有量变化趋势，高剂量黄酮与低剂量相比，在保护肝细
胞方面呈现出一定范围内的正比例关系，见表 1。
表 1 椭圆叶花锚黄酮对 SD大鼠血清 ALB和 ALT水平的
影响 (x ± s)
组别 例数
ALB /
(mg·L －1)
ALT /
(U·L －1)
空白组 20 370. 6 ± 23. 5 215. 2 ± 21. 4
模型组 20 180. 4 ± 16. 3 615. 2 ± 34. 2△
椭圆叶花锚黄酮低剂量组 20 278. 4 ± 41. 2 490. 4 ± 12. 6*
椭圆叶花锚黄酮高剂量组 20 321. 1 ± 14. 5 410. 3 ± 32. 2
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05;与空白组比较，△P ＜ 0. 01
2. 3 椭圆叶花锚黄酮对 SD 大鼠血清 SOD 与 MDA 水平的
影响 与空白组比较，模型组 SOD水平减少、MDA水平升
高，表明在肝病过程中，过氧化反应加速，肝细胞处于受
损的变化状态，清除氧自由基的酶系能力显著降低 (P ＜
0. 05);与模型组比较，剂量组 SOD 水平明显升高 (P ＜
0. 05) ，但低、高剂量组间 SOD 水平的差异不显著 (P ＞
0. 05);与模型组比较，低剂量组 MDA 水平降低，但两组
间差异不显著 (P ＞ 0. 05) ，而低、高剂量组间 MDA 水平
的差异显著 (P ＜ 0. 05)，见表 2。
表 2 椭圆叶花锚黄酮对 SD 大鼠血清 SOD 与 MDA 水平
的影响 (x ± s)
组 别 动物数
SOD /
(U·g － 1)
MDA /
(mol·g － 1)
空白组 20 252. 82 ± 32. 42 174. 71 ± 31. 11
模型组 20 128. 13 ± 30. 35 403. 10 ± 33. 76△
椭圆叶花锚黄酮低剂量组 20 290. 85 ± 43. 26 350. 56 ± 67. 49*
椭圆叶花锚黄酮高剂量组 20 312. 23 ± 29. 12 210. 79 ± 53. 13
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05;与空白组比较，△P ＜ 0. 01
3 讨论
肝炎发病机制复杂，导致肝细胞损害和坏死，病理过
程中免疫系统的参与是主要的病理环节。有研究证实，在
肝病变过程中，肝脏局部会聚集大量的 Treg 细胞，是外周
Treg细胞对病变组织的趋化［4］，表明在肝病过程中免疫机
制是增强的。此外还有非免疫因素，如微循环障碍、内毒
素 (ETM)和氨基酸失衡等，氧自由基 (OFＲ)与病毒性
肝炎关系之研究正日益引起重视并逐步深入［5］。OFＲ 对组
织的损害，除了对肝细胞直接毒性外，它还参与免疫功能紊
乱、肝微循环障碍、内毒素血症、钙稳定失衡等一系列病
毒性肝炎的病理生理过程，在整个病理过程中都可能对肝
细胞造成损害。氧自由基过多对机体的危害表现在使许多
生物分子，如核酸、蛋白、膜多聚不饱和脂肪酸 (PUFA)
等产生过氧化反应，生物大分子出现交链或断裂，引起细
胞结构功能的破坏。PUFA 的过氧化将直接影响膜结构，
使膜孔隙扩大、通透性增加;细胞内质网膜、线粒体膜、
溶酶体膜等生物膜系统的液体镶嵌模式发生改变，导致细
胞广泛损害。另外，自由基和过氧化脂质 (LPO)在肝炎
的肝细胞损害中也起到了重要作用。
SOD能催化·O －产生歧化反应，是体内·O －的天然清
除酶，在清除自由基和抑制脂质过氧化过程中起着主要作
用［6］。肝炎患者抗氧化酶系统中的一些分子可能受到损
害，从而使清除自由基的能力降低，增加的氧自由基通过
破坏生物大分子，导致了肝细胞抗原结构的改变以及肝组
织细胞结构的损害，促进了免疫反应及炎症的发展，炎症
的发展使自由基的产生进一步增加，血清 LPO 水平升高，
而自由基增加又可加重肝细胞的病变，从而形成恶性循
环［7］。对抗氧自由基是药物治疗肝炎机制中的一个可能环
节［8］，通过药物影响氧自由基变化的实验，可以证明椭圆
叶花锚治疗肝炎的可能途径之一是抗氧自由基路径。另一
方面，黄酮是广泛分布的一类物质，生物类黄酮能够有效
清除体内的自由基，具有消炎、抗菌、抗病毒、保肝、护
肝等作用，黄酮类物质抗氧自由基作用是确定的。该类化
合物的结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基
等官能团，此外，它还常与糖结合成苷，黄酮苷一般易溶
于水，而如白藜芦醇等化合物的水溶性很低，故必须与相
关蛋白结合后才能在血清中保持较高的浓度［9］。花锚全草
含有三萜类、黄酮类、酮类等近 20 种化学成分，其中水溶
性成分花锚苷和去甲氧基花锚苷为抗肝炎的主要有效成
分［10］。椭圆叶花锚中含有齐墩果酸，已有大量研究证实，
它具有清热、消炎、抑菌、保肝、护肝、增加白细胞、降
低转氨酶等作用［11］。而且，黄酮苷元类成分是药效物质基
础之一［12］，其中呫吨酮苷对 CCl4 所引起的实验性肝损伤
有促进恢复的作用，能促进肝细胞再生，增加肝细胞内糖
元与核糖核酸［13］。花锚的酮单体成分和提取部位均具有保
肝、免疫调节、抗氧化、抗病原微生物等作用［14］。MDA
是氧自由基使细胞膜中的 PUFA发生过氧化反应的终产物，
通过测定血清中 MDA 水平，可间接反应氧自由基的活性，
与 SOD共同作为反映人体自由基代谢的一对指标，两者呈
负相关关系，也可作为肝细胞损伤程度的指标，与病情活
动或疾病进程相关［15］。中药清除超氧自由基、过氧化氢、
羟自由基等产物，使得 SOD、和 CAT 活性增加，也减少了
氧自由基对组织和细胞的攻击，使 MDA水平下降［16］。
基于以上认识，我们开展了对椭圆叶花锚黄酮药理作
用的实验研究，在测定血清 SOD 和酯质过氧化产物 MDA
水平变化的同时，对大鼠肝脏进行了病理切片观察，从选
用实验指标在实验中的变化关系上，验证椭圆叶花锚治疗
肝炎的可能途径。从理论上讲，SOD 广泛存在于机体，其
活力的体现一方面是其水平高低差异直接的影响，而另一
方面，是在一定水平上不同强度 (水平)的作用力，这与
机体一定阶段的生化状态条件有关，由于其广泛存在，故
是主要的机制，也能体现中医药作用的本质在于改善机体
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生化状态而不单纯是物质在量上的累加。目前涉及 SOD 的
药物是其自身制剂，而提高其水平的大多是中医药研究，
或者是与本实验相关度不高的药物。所以，实验中没有设
立药物对照组，而是通过自身对照来证明药物实际药理
效应。
本实验发现，椭圆叶花锚总黄酮能降低实验模型大鼠
血清 MDA水平，同时提高 SOD 水平，表明黄酮类成分在
治疗肝病的过程中，对抗氧自由基酶系统 (SOD 是其中主
要的一种酶)起到了辅助增强的作用，判断依据是 SOD水
平的升高与 MDA水平的下降。肝脏病理检查提示，椭圆叶
花锚总黄酮可以改善肝细胞受损的状态，这种作用应该归
结于对酶类分子合成与衰减的调节，调节分子代谢的途径
可以归类于基因靶位的作用，但具体的分子机制在本实验
中无法得到明确的认识。
另外，本实验只是在总黄酮和血清物质含有量测定的
水平上进行，是对药物进行研究的初步实验层次，而对药
物透彻的把握，需要深入到分子层面，从具体分子调控的
位点与途径去分析药物的作用机理。而且，对药物还应该
进一步提纯，越是纯化的药物成分，越能反映药理作用的
可靠性。调控细胞因子产生和作用的关键点便能控制氧自
由基损伤肝细胞的病理过程，通过调节内源性细胞因子产
生、应用细胞因子增强或抑制分子应答，可能成为治疗肝
病的一个途径。今后，对椭圆叶花锚的研究应该以此为标
准，纯化药物成分并确定实验分子水平的理论路径，开展
进一步深入的研究。
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