全 文 ：红根草提取物对血小板膜流动性及 5-HT释放的影响
张 锋1 , 张文娟2
(1.舟山市普陀区人民医院 浙江 舟山 316100;2.浙江省中医药研究院 浙江 杭州 310007)
收稿日期:2003-01-10
作者简介:张 锋(1964～ ),男 ,浙江舟山市人 ,主管药师 ,从事药学工作。电话 0580-3030646.
关键词:红根草;血小板膜流动性;5-HT:荧光法
中图分类号:R285 文献标识码:B 文章编号:1001-1528(2003)05-附 2-01
红根草(Salv ia Prionitis Hance)系唇形科鼠尾草属植
物 ,它及其复方制剂红根草片对治疗肠炎菌痢 ,上呼吸道炎
症具有较好的疗效 ,常出现鼻衄副作用 ,对此我们对其进行
抗凝 、抗血小板聚集实验研究 , 发现具有较强的生理活性[ 1] 。
为了阐明抗血小板作用机理 ,本文报道红根草提取物对血小
板膜流动性及 5-HT 释放的影响 。
1 实验材料
1.1 药物及配制方法 红根草正丁醇提取物 , 10mg·
m L-1 , 浙江省医科院天然植物研究所提供 , 批号:000305;巴
米尔[ 2](水溶性阿司匹林):华瑞制药公司 , 批号:990916 , 配
制方法:取 1g巴米尔加 50mL蒸馏水溶解。
1.2 动物 SD 大鼠 , (190 ～ 230)g , ♀♂皆用 ,浙江省中医
药研究院动物房提供。
1.3 仪器 RF-540 荧光光度计。
1.4 试剂 二苯已三烯(DPH),凝血酶:sigma 公司。
2 方法与结果
2.1 对血小板膜流动性的影响 大鼠随机分成 2 组;空白
对照组 、红根草组 , 每组 9 只 ,红根草组按 150mg·kg -1(相当
于 1/ 36 LD50)灌胃给药 , 空白对照组灌等量的水 , 连续给药
7 日 , 末次灌胃 1h , 戊巴比妥钠麻醉 , 腹主动脉取血 , 0.1%
EDTA 抗凝 ,离心 1000r·min-1 5 次 ,分离 PRP ,用 0.01moL·
L-1磷酸缓冲液洗涤 2 次 , 去掉洗涤液 , 再悬浮至原 PRP 体
积的磷酸缓冲液中计数血小板 ,将血小板浓度调为 108/mL ,
取 2mL 血小板悬液 , 加同体积的 DPH 标记工作液 , 振荡混
匀 ,在 37℃水浴孵育 30min , 即获得 DPH 标记的血小板。取
DPH 标记的血小板悬液 , DPH 未标记的血小板悬液和 DPH
工作液在激发波 430nm 测荧光强度 , 求荧光偏振度及微粘
度[ 3] ,结果见表 1。
表 1 红根草对血小板膜流动性的影响
组别 动物数(只)
剂量
(mg·kg -1)
微粘度 n
(泊)
空白对照 9 2.48±0.39
红根草 9 150 2.31±0.43
结果:红根草对大鼠血小板膜脂质微粘度的大小无明显
影响。
2.2 对 5-HT 释放的影响 大鼠分成 3 组:空白对照组 、阳
性对照组 、红根草组 , 每组 8 只。阳性组按 0.2g·kg-1巴米
尔 ,红根草 150mg·kg -1灌胃 , 空白对照组灌等量的水 , 连续
给药 7 日 , 末次给药 1h ,戊巴比妥钠麻醉 ,腹主动脉取血 , 置
事先放有 3.8%枸椽酸钠溶液的硅化离心管中 , 混匀 , 离心
1000r·min-15次 , 取上层悬液 ,即为富血小板(PRP),然后再
离心 , 3000r·min-110 次 ,吸取上清液 , 制得贫血小板(PPP)。
用 PPP 稀释 PRP 至血小板数 20 ～ 22 万/ mm , 加凝血酶
(500U/ L)诱导 5min 立即置于冰浴中 , 加 0.16mol·L-1 ED-
TA 10μl终止反应 , 离心 3000r·min-110 次 ,吸取上清液为聚
集后 PPP ,按荧光法测定[ 4] ,结果见表 2。结果显示:红根草
能明显抑制血小板中 5-HT 的释放。
表 2 红根草对大鼠 5-HT 释放的影响
组别 剂量(mg·kg -1) 5-HT 释放率(%)
空白对照 34.60±8.16
巴米尔 200 23.10±7.102)
红根草 150 25.16±5.351)
与空白对照组比较 , 1)P<0.05 , 2)P <0.01。
3 讨论
血小板的粘附 、聚集和释放反应与血小板膜的流动性密
切相关 , 膜流动性改变可明显影响血小板对致聚物质的反应
性。 DPH 为探剂分析了血小板膜脂质流动性的影响 , 偏振
度的改变 ,反映了膜脂区微粘度的大小 , 微粘度与膜流动性
呈反向关系。初步实验表明:红根草对血小板膜的流动性无
明显影响 ,它能抑制血小板聚集 , 能抑制凝血酶诱导的血小
板活化 , 而对 5-HT 释放的抑制又可能为抗血小板聚集的机
制之一 , 有待进一步证实。
参考文献:
[ 1] 朱传义.红根草抗凝血作用研究[ J] .现代应用药学 , 1987 , 4
(2):11.
[ 2] 中华人民共和国卫生部药政局.新药西药临床前研究指导原则
汇编[ S] , P70.
[ 3] [ 4] 徐叔云.药理实验方法学[ M] .第二版 ,北京:人民卫生出版
社 , 1991 , 1125 , 1128.
2附
2003 年 7 月
第 25 卷 第 7 期
中 成 药
Chinese T raditional Patent Medicine
July , 2003
Vol.25 No.7