全 文 :42 CHINA MEDICINE AND PHARMACY
2 0 1 2 年 9 月 第 2 卷 第 1 7 期·药物研究·
肾茶 Clerodendranthus spicatus (Thunb.) C.Y.Wu 为唇形科
肾茶属植物。本品为肾茶的干燥茎叶,主要含有黄酮类化合物、
甾体皂甙类、蒽醌类甙类、氨基酸、多肽、蛋白质、有机酸、糖类、
多糖类、多酚类化合物等 [1-2]。笔者所在单位 2008 年研制了肾
茶胶囊,并对其质量进行了系统研究。
1 仪器与材料
1.1 仪器
天平:北京赛多利斯仪器系统有限公司,型号 BP211D;高
效液相色谱仪:日本岛津,型号 2010;紫外 - 可见分光光度仪:
日本岛津,型号 uv-2100。
1.2 材料
肾茶胶囊:中试样品批号:090816、090817、090818,规格:
0.3 g/ 粒,笔者所在单位单位自制。标准品:芦丁(购自中国药
品生物制品检定所,批号:10080-200705)。
2 方法
总黄酮的含量测定:原标准以薄层扫描方法测定熊果酸的
含量,本研究提取的熊果酸含量很低,故采用 HPLC 法测定主
要成分迷迭香酸的含量,同时肾茶药材中含有较多的黄酮,故
在质量标准中增加了总黄酮的含量测定项,采用紫外分光光度法
测定样品所含总黄酮的含量,取得满意效果,方法灵敏、可靠 [3-4]。
2.1 测定方法
2.1.1 对照品溶液的制备 称取在 120℃减压干燥至恒重的
芦丁对照品约 50 mg,精密称定后,置于 25 mL 量瓶中,加甲醇
适量,置水浴上微热使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀。精密
量取 10 mL,置于 100 mL 量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得(每 1
毫升中含无水芦丁 0.2 mg)。
2.1.2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 1.0、2.0、3.0、
4.0、5.0、6.0 mL,分别置于 25 mL 量瓶中,各加水至 6 mL,加 5%
亚硝酸钠溶液 1 mL,摇匀,放置 6 min,加 10% 硝酸铝溶液 1 mL,
摇匀,放置 6 min,加氢氧化钠试液 10 mL,再加水至刻度,摇匀,
放置 15 min,以相应的溶液为空白对照,采用分光光度法,在
500 nm 的波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标、浓度为横坐
标,绘制标准曲线。
2.1.3 测定法 取装量差异项下的本品内容物适量,研细,从
中称取约 0.25 g,精密称定后,置 25 mL 锥形瓶中,精密称定,加
甲醇 25 mL 超声处理(功率 250 W,频率 20 kHz)30 min,放冷,
精密称定,补足重量,摇匀。精密量取 10 mL,置 100 mL 量瓶
中,加水至刻度,摇匀。精密量取 3 mL,置 25 mL 量瓶中,照标
准曲线制备项下的方法,自“加水至 6 mL”起依法测定吸收度,
从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度(μg/mL),计算,
即得。
本 品 每 粒 含 总 黄 酮 以 芦 丁(C27H30O16)计,不 得 少 于
45.0 mg。
肾茶胶囊中总黄酮的含量测定
吕占国
1
路 更
2▲
王立强
3
1. 解放军第二○二医院医务处,辽宁沈阳 110016;2. 解放军第二一一医院肾内科,黑龙江哈尔滨 150080;
3. 华侨大学分子药物学研究所,福建泉州 362021
[ 摘要 ] 目的 制订肾茶胶囊中总黄酮的含量测定方法。 方法 采用紫外分光光度法,进行了线性关系、重复性、精密度、回
收率等考察,并对该方法进行了验证。 结果 标准品芦丁在 8.03 ~ 48.18 μg/mL 范围内具有良好的线性关系(r
2
=0.999 5);
该方法精密度良好,RSD < 2%;重复性实验结果良好,RSD=0.98;平均回收率 97.0% ~ 103.0%,RSD < 2%,准确性良好。
结论 本测定方法科学可行,完全能控制和检测肾茶胶囊中总黄酮的质量。
[ 关键词 ] 肾茶胶囊;总黄酮;含量测定
[ 中图分类号 ] R917 [ 文献标识码 ] B [ 文章编号 ] 2095-0616(2012)17-42-02
Content determinantion of total flavonoids in orthosiphon capsules
LV Zhanguo
1
LU Geng
2
WANG Liqiang
3
1.Department of Medical Service, No.202 Hospital of PLA, Shenyang 110016, China; 2.Department of Nephrology, No.211 Hospital
of PLA, Harbin 150080,China; 3.Institute of Molecular Medicine, Huaqiao University, Quanzhou 362021,China
[Abstract] Objective To develop methods for content determination of total flavonoids in orthosiphon capsules. Methods
A UV method was used for observing the linear relationship, repeat line, precision,and recovery, and the method was
verified. Results The standard rutin was in good linearity in range of 8.03-48.18 mg/mL(r2=0.999 5).This method has good
precision(RSD < 2%), and also has good repetitive experimental results (RSD=0.98).The average recoveries were between
97.0%-103.0%, RSD < 2% , which has good accuracy. Conclusion The determination method is scientific and feasible,
and flavonoids in orthosiphon capsules can be in good control and test.
[Key words] Orthosiphon capsules;Flavonoid;Content determination
[ 基金项目 ] 福建省自然科学基金资助项目(2010J01208)。
▲
通讯作者
CHINA MEDICINE AND PHARMACY 43
2 0 1 2 年 9 月 第 2 卷 第 1 7 期 ·药物研究·
表4 加样回收率试验结果(n=6)
编号 样品取样量(mg) 样品中黄酮的含量(mg) 加入黄酮量(mg) 测出黄酮总量(mg) 检出黄酮量(mg) 回收率(%) RSD(%)
1 125.4 31.41 27.85 60.02 28.61 102.73
1.63
2 125.9 31.54 27.53 59.42 27.88 101.27
3 124.8 31.26 27.44 58.63 27.37 99.74
4 124.3 31.14 27.56 58.88 27.74 100.65
5 125.2 31.36 27.43 59.13 27.77 101.24
2.2 吸收光谱的测定、光谱一致性检测
精密吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液各 3 mL,分别置于
25 mL 量瓶中,照分光光度法,在 200 ~ 750 nm 波长范围内测
定吸收光谱。结果芦丁对照品与供试品光谱可见光区吸收图
谱基本一致,并且在 500 nm 波长处有最大吸收。
2.3 线性关系的考察
精 密 吸 取 芦 丁 对 照 品 溶 液 1、2、3、4、5、6 mL(相 当 于 芦
丁 8.03、16.06、24.09、32.12、40.15、48.18 μg/mL),按 上 述 测
定法测定吸收度。以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标
准曲线,计算得回归方程。回归方程为:y=0.011 1x+0.018 1,
r2=0.999 5。表明芦丁在 8.03 ~ 48.18 μg/mL 范围内具有良好
的线性关系。见表 1、图 1。
图1 芦丁不同浓度吸收度
对照品浓度(μg/mL) 吸收度
8.03 0.102
16.06 0.199
24.09 0.291
32.12 0.376
40.15 0.463
48.18 0.551
y = 0.011x + 0.0185
R2 = 0.9995
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0 10 20 30 40 50 60
图 1 芦丁线性回归方程坐标图
2.4 精密度试验
按 2.3 项下测定法对对照品溶液重复测定 6 次,计算 RSD,
结果见表 2。试验结果表明,RSD < 2%,方法精密度良好,符
合测定要求。
表2 精密度试验结果(n=6)
序号 浓度(μg/mL) RSD(%)
1 0.294
0.97
2 0.297
3 0.292
4 0.293
5 0.298
6 0.299
2.5 重复性试验
按供试品测定方法测定,对同一批样品(090816)重复测
定 5 次,结果见表 3。
表3 重复性试验结果(n=5)
实验次数 总黄酮含量(mg/粒) 平均含量(mg/粒) RSD(%)
1 51.05
51.04 0.98
2 51.09
3 51.18
4 50.89
5 50.98
2.6 加样回收率试验
精 密 称 取 已 知 含 量 的 同 一 批 号(批 号 为 090816),含 量
250.51 mg/g)的 样 品 125 mg,分 别 精 密 加 入 芦 丁 对 照 品 各
27.5 mg,按正文供试品溶液的制备方法制备及上述光谱条件测
定,测定并计算回收率,平均回收率在 97.0% ~ 103.0% 之间,
RSD < 2%(n=6),方法准确性良好。见表 4。
2.7 含量测定
按上述方法测定各批样品的含量,结果见表 5。
表5 含量测定结果(n=6)
批号 总黄酮的平均含量(mg/粒)
090816 50.31
090817 49.60
090818 50.15
根据3样品测定结果,暂定本品含总黄酮不得少于45.0 mg/粒。
3 结论
通过针对肾茶胶囊中总黄酮的系统研究,包括线性关系考
察、精密度考察、回收率考察、重复性考察等,证实本测定方法
科学可行,完全能控制和检测肾茶胶囊中总黄酮的质量。
[参考文献]
[1] Hsu CL,Hong BH,Yu YS. Antioxidant and anti-inflammatory effects of
orthosiphon aristatus and its bioactive compounds[J].J Agric Food Chem,2010,
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[4] 李晓玫,戴振华,王海燕 . 肾小球系膜细胞增殖抑制因子 [J]. 国外医学(泌
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(收稿日期:2012-04-27)