全 文 ：·技术与方法·
收稿日期:2015－09－18
作者简介:张好科(1970－)，男，主管中药师，医学学士，主要从事药品采购工作。
西藏不同产区长梗秦艽中龙胆苦苷和马钱苷酸含量研究
张好科1，付兆媛2
(1．白银市景泰县人民医院药剂科，甘肃 景泰 730400;
2．甘肃中医药大学附属医院肿瘤科，甘肃 兰州 730020)
摘要:目的 比较西藏不同产区长梗秦艽中龙胆苦苷和马钱苷酸含量的差异。方法 收集西藏 3 个地
区共 8份长梗秦艽样品，采用高效液相色谱(HPLC)法对其中龙胆苦苷和马钱苷酸的含量进行测定。色谱
柱为 Kromasil C18(4．6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为甲醇－0．1%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速为 1
mL /min，检测波长 245 nm，柱温 35 ℃，进样量 10 μL。结果 龙胆苦苷回归方程为 Y = 1 050X+34．6，r = 0
．999 7，结果表明龙胆苦苷在 61．063～977．000 μg /mL范围内线性关系良好;马钱苷酸回归方程为 Y= 8 98．7X
+47．9，r= 0．999 9，结果表明马钱苷酸在 11．563 ～ 185．000 μg /mL 范围内线性关系良好。龙胆苦苷含量均值
依次为拉萨＞林芝＞昌都，马钱苷酸含量均值依次为拉萨＞昌都＞林芝;且西藏 8 个产地中只有昌都地区一个
样地的长梗秦艽中龙胆苦苷与马钱苷酸的含量总和未达到 2015版《中华人民共和国药典》标准(2．5%)。结
论 该方法快捷、有效，可用于长梗秦艽中龙胆苦苷与马钱苷酸的含量测定。
关键词:长梗秦艽;龙胆苦苷;马钱苷酸;高效液相色谱;含量测定
中图分类号:Ｒ284．2 文献标志码:B 文章编号:1003－8450(2016)05－0024－04
DOI:10．16841 / j．issn1003－8450．2016．05．08
中药秦艽临床应用广泛，是治疗风湿关节痛、结
核病潮热、黄疸等的主药之一。《中华人民共和国
药典》收载的秦艽(Gentiana macrophylla Pall．)、粗茎
秦艽 (G． crassicaulis Duthie ex Burk．)、小秦艽(G．
dahurica Fisch．)、麻花秦艽(G． straminea Maxim．)以
干燥根入药［1］。目前，这 4 种秦艽野生资源均处于
濒危状态［2］。长梗秦艽(G．waltonii Burk．)是秦艽的
近缘品种，分布于拉萨、林芝、墨竹工卡、林周、浪卡
子、加查、日喀则等地，为国产秦艽中西藏特有品种，
也是藏药解吉那保的原植物来源之一［3］。作为藏
药，它的药用部位是花，但在中药中，它的根在民间
也被作为秦艽而广泛使用。虽然顾成玉等［4］、吴立
宏等［5］和吴靳荣等［6］在研究秦艽药材的化学成分
时，把长梗秦艽作为近缘种采集了 1～2 个产地做了
比较研究，但采样量太少，不能很好地说明问题所
在。本试验笔者收集了西藏 3 个地区共 8 份样品，
测定了其有效成分龙胆苦苷和马钱苷酸的含量，以
期为长梗秦艽的质量评价提供更有力的依据。
1 仪器、药物与试剂
1．1 仪器
Agilent1100 高效液相色谱仪(美国，手动进样
器、在线脱气机、高压二元梯度泵、柱温箱、DAD检测
器，Agilent1100 色谱工作站)，A1104 电子分析天平
(万分之一，上海梅特勒托利多仪器有限公司)，
OHAUS Corporation DV SEＲIES 型电子天平(十万分
之一，奥豪斯仪器有限责任公司)，KD－2500B型高频
数控超声波清洗器(昆仑山超声仪器有限公司)。
1．2 药物
本试验所用 8 批样品分别采自西藏 3 个地区
(1～4号采自拉萨、5～6 号采自林芝、7 ～ 8 号采自昌
都)，经甘肃省白银市景泰县人民医院药剂科张好
科主管中药师鉴定为秦艽组药用植物长梗秦艽(G．
waltonii Burk．)的干燥根。
1．3 试剂
甲醇(色谱纯，飞世尔科技公司，批号 155176)，
乙腈(色谱纯，飞世尔科技公司，批号 148407)，水为
屈臣氏蒸馏水，磷酸(色谱纯，天津市大茂化学试剂
厂，批号 20150103)，其他试剂均为分析纯;龙胆苦
苷对照品(批号 110770－201308，纯度≥98%，购于
中国食品药品检定研究院)，马钱苷酸对照品(批号
140914，纯度＞98%，购于北京世纪奥科生物技术有
限公司)。
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2 方法与结果
2．1 色谱条件
Kromasil C18(4．6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，
柱温 35 ℃，流动相为甲醇－0．1%磷酸水溶液(A ∶
B)，梯度洗脱(0 ～ 11 min，95%→ 88% B;11 ～ 1
4 min，87%→85% B;14～20 min，84%→82% B)，流
速 1 mL /min;检测波长 245 nm，进样量 10 μL。
2．2 混合对照品溶液的制备
分别精密称取龙胆苦苷对照品 9．77 mg、马钱苷
酸对照品 1．85 mg，置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇适
量使其溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度
分别为 0．977，0．185 mg /mL 的混合对照品溶液，冷
藏，备用。色谱图见图 1。
1，马钱苷酸;2，龙胆苦苷
图 1 混合对照品高效液相色谱图
2．3 供试品溶液的制备
分别将 1～8号样品的干燥根粉碎，过 65 目筛，
混匀，精密称取 4号粉末 0．5 g，置于具塞锥形瓶中，
加入甲醇 20 mL，称定质量。超声(30 ℃，80 kHz)
处理 30 min，放冷，补足减失的质量，摇匀，用 0
．45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。色谱图见
图 2。
1，马钱苷酸;2，龙胆苦苷
图 2 4号秦艽样品高效液相色谱图
2．4 线性关系考察
分别精密吸取混合对照品溶液，将其制成 5 个
系列质量浓度的混合对照品溶液，其中龙胆苦苷的
质量浓度依次为 61．063，122．125，224．250，488．500，
977．000 μg /mL，马钱苷酸质量浓度依次为 1 1．563，
23．125，46．250，92．500，185．000 μg /mL，进样量 10 μL，依
次测定。以进样量(X)为横坐标、峰面积积分值
(Y)为纵坐标绘制标准曲线，得龙胆苦苷回归方程
为 Y= 1 050X+34．6，r = 0．999 7，结果表明龙胆苦苷
在 61．063～977．000 μg /mL范围内线性关系良好;马
钱苷酸回归方程为 Y = 898．7X+47．9，r = 0．999 9，结果
表明马钱苷酸在 11．563 ～ 185．000 μg /mL 范围内线
性关系良好。
2．5 精密度试验
精密吸取对照品溶液 10 μL，按“2．1”项下色谱
条件重复进样 6 次，测定峰面积。结果龙胆苦苷与
马钱苷酸峰面积的 ＲSD值分别为 1．08%和 0 ．74%，
表明仪器精密度良好。
2．6 稳定性试验
精密吸取 4 号供试品溶液 10 μL，于配制后 0，
2，4，8，12，24 h分别进样，测定峰面积。结果龙胆苦
苷与马钱苷酸峰面积的 ＲSD 值分别为 1．98%和 2
．32%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2．7 重复性试验
精密称取 4号样品粉末 6份，按“2．3”项下供试
品溶液的制备方法制备，进样，测定峰面积，计算龙
胆苦苷与马钱苷酸的含量。结果龙胆苦苷与马钱苷
酸峰面积的 ＲSD值分别为 1．24%和 2．59%，表明该
样品重复性良好。
2．8 加样回收率试验
精密称取已知龙胆苦苷和马钱苷酸含量的 4 号
样品粉末 9份，每份 0．5 g，精密加入一定量的龙胆
苦苷与马钱苷酸对照品，加入量分别为该样品中相
应成分含量的 80%(10．03，2．85 mg)，100%(12．61，
3．59 mg) ，120%(15．11，4．31 mg) ，按“2．3”项下方
法制备供试品溶液，按“2．1”项下色谱条件测定。
计算加样回收率，结果见表 1和表 2。
2．9 样品含量测定结果
8批长梗秦艽药材样品的供试品溶液均按“2．3”
项下方法制备，按“2．1”项下色谱条件进行测定，以
外标两点法方程分别计算龙胆苦苷和马钱苷酸的含
量。结果见表 3。可以看出，龙胆苦苷含量均值依
次为拉萨＞林芝＞昌都，马钱苷酸含量均值依次为拉
萨＞昌都＞林芝。将龙胆苦苷与马钱苷酸的含量做
加和，发现西藏 8 个产地中只有西藏昌都地区其中
一个样地的长梗秦艽中龙胆苦苷与马钱苷酸含量总
和未达到 2015 版《中华人民共和国药典》标准
(2．5%)。对表 3数据进行统计分析，结果见表 4。
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表 1 长梗秦艽中龙胆苦苷加样回收率试验结果
组别 含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
1 12．595 10．03 22．596 99．87
2 12．595 10．03 22．921 101．31
3 12．595 10．03 22．201 98．13
4 12．595 12．61 25．001 99．19
5 12．595 12．61 24．323 96．50 99．19 1．64
6 12．595 12．61 25．292 100．35
7 12．595 15．11 28．013 101．11
8 12．595 15．11 27．332 98．65
9 12．595 15．11 27．031 97．57
表 2 长梗秦艽中马钱苷酸加样回收率试验结果
组别 含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
1 3．605 2．85 6．128 94．93
2 3．605 2．85 6．222 96．39
3 3．605 2．85 6．392 99．02
4 3．605 3．59 7．213 100．25
5 3．605 3．59 7．189 99．92 98．61 2．44
6 3．605 3．59 7．179 99．78
7 3．605 4．31 8．120 102．59
8 3．605 4．31 7．612 96．17
9 3．605 4．31 7．792 98．45
表 3 长梗秦艽中龙胆苦苷与马钱苷酸含量测定结果(n=3)
序号 来源 龙胆苦苷 /% 马钱苷酸 /% 龙胆苦苷+马钱苷酸 /%
1 拉萨 2．731 0．632 3．363
2 拉萨 3．746 0．671 4．417
3 拉萨 3．498 0．527 4．025
4 拉萨 2．519 0．721 3．240
5 林芝 2．367 0．372 2．739
6 林芝 2．992 0．501 3．493
7 昌都 2．309 0．724 3．033
8 昌都 1．902 0．561 2．463
表 4 长梗秦艽中龙胆苦苷与马钱苷酸的含量方差分析结果
项目 关系 平方和 df 均方 F值 P值
龙胆苦苷 组间 1．398 2 0．699 2．637 0．165
组内 1．325 5 0．265
总数 2．724 7
马钱苷酸 组间 0．062 2 0．031 3．680 0．104
组内 0．042 5 0．008
总数 0．104 7
龙胆苦苷+马钱苷酸 组间 1．511 2 0．755 2．744 0．157
组内 1．377 5 0．275
总数 2．887 7
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3 讨论
3．1 提取方法和色谱条件筛选
贾娜等［7］对麻花秦艽中龙胆苦苷与马钱苷酸
的提取方法做了研究，结果表明采用 20 mL 100%甲
醇超声提取较其他溶剂提取效率更高，且提取 3
0 min后马钱苷酸和龙胆苦苷含量趋于稳定。笔者
以其为参考，筛选了多种提取方法和提取溶剂，结果
与其相符。其次，筛选了流动相和流动相洗脱梯度，
选用参数有甲醇－水、乙腈－水、甲醇－0．1%乙酸、乙
腈－0．1%乙酸、甲醇－0．1%磷酸水溶液、乙腈－0 ．1%磷
酸水溶液、甲醇－0．4%甲酸、乙腈－0．4%甲酸等，最
终确定了最佳流动相为甲醇－0．1%磷酸水溶液。
3．2 长梗秦艽两药典成分含量分析
秦艽中龙胆苦苷和马钱苷酸是 2015版《中华人
民共和国药典》规定的 2 个法定指标成分。笔者收
集了西藏地产长梗秦艽样品 8 份，采用 HPLC 法测
定了龙胆苦苷与马钱苷酸的含量。结果显示:长梗
秦艽龙胆苦苷含量最高可达 3 ．746%，马钱苷酸最
高可达 0．724%，二者含量总和最高可达 4．417%。8
个产地中只有昌都地区的一个样品没有达到药典标
准，其他都达标，且含量较高。这一实验为长梗秦艽
的进一步研究提供了实验依据。
参考文献:
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京:中国医药科技出版社，2015:253．
［2］周秀佳，徐宏发，顺庆生．中药资源学［M］．上海:上海科
学技术文献出版社，2007:368．
［3］赵志礼，嘎务，丹珍卓嘎，等．西藏秦艽类与解吉类药用植
物资源及品种鉴定［J］．中国民族医药杂志，2010(5):30
－31．
［4］顾成玉，赵志礼，吴靳荣，等．全萼秦艽与长梗秦艽的生药
学研究［J］．中国中医药信息杂志，2010，17(11):41－43．
［5］吴立宏，叶燕，李兴尚，等．反相高效液相色谱法测定道地
产区秦艽药材中龙胆苦苷的含量［J］．药物分析杂志，
2009，29(2):184－187．
［6］吴靳荣，吴立宏，赵志礼，等．中药秦艽和习用品中 5种环
烯醚萜类成分的 HPLC 含量测定［J］．中国中药杂志，
2014，39(4):715－720．
［7］贾娜，张雅惠，王斌，等．麻花秦艽中落干酸和龙胆苦苷的
含量测定及麻花秦艽药材 HPLC 特征图谱的研究［J］．药
物分析杂志，2009，29(9):1585－1589．
［编辑:陈正君］
Study on contents of gentiopicroside and loganin acid in Gentiana waltonii
from different producing areas in Tibet
ZHANG Haoke1，FU Zhaoyuan2
(1．Pharmacy Department，People’s Hospital of Jingtai County in Baiyin City，Jingtai，Gansu，730400，China;
2．Oncology Department，Affiliated Hospital of Gansu University of Chinese Medicine，Lanzhou，Gansu，730020，China)
Abstract:Objective To compare the difference of component contents of Gentiana waltonii from different a
reas in Tibet． Methods Eight samples of Gentiana waltonii were collected from 3 regions in Tibet． The contents of
gentiopicroside and loganin acid were determined by HPLC． The samples were separated on the column of Kromasil
C18(4．6 mm×250 mm，5 μm)，which moving phase was methanol-0．1% phosphoric acid solution as well as gradient
elution was used． The flow rate was 1 mL /min． The detected wave－length was at 245 nm． The column temperature
was at 35 ℃ and the sample size was 10 μL． Ｒesults The regression equation of gentiopicroside was Y= 1 050X +
34．6，r= 0．999 7，showing a good linearity in the range of 61．063－977．000 μg /mL;the regression e quation of lo-
ganic acid was Y= 898．7X +47．9，r= 0．999 9，showing a good linearity in the range of 11．563－1 85．000 μg /mL．The
contents of gentiopicroside in three regions showed as Lhasa＞Nyingchi＞Chamdo and that of loganic acid showed as
Lhasa＞Chamdo＞Nyingchi． Among the 8 producing areas in Tibet，the total content of g entiopicroside and loganin
acid in Gentiana waltonii only from Chamdo was under 2．5% (specified standard in C hinese Pharmacopoeia)．
Conclusion This method is simple and accurate，which can be used to determine the g entiopicroside and loganic
acid in Gentiana waltonii．
Key words:Gentiana waltonii;gentiopicroside;loganic acid;HPLC;content determination
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