全 文 ：四方蒿片剂的 °≤指纹图谱研究
麻佳蕾 o徐亚萍 o洪燕君 o姚彤炜 3
k浙江大学 药学院 药物分析与药物代谢研究室 o浙江 杭州 vtssvtl
≈收稿日期 ussx2tu2tx
≈基金项目 浙江省自然科学基金 kvsuy{ul~浙江省科技厅科
研基金 kussw≤vvss|oussx≤tvsuyl~浙江省中药现代化专项基金 ≈浙
财建字 kussultxx号
≈通讯作者 3 姚彤炜 o ר¯ r ƒ¤¬}ksxztl{zutzusvo ∞2°¤¬¯}
¼¤²·º ½∏1 §¨∏1¦±
四方蒿 Ελσηολτζια βλανδα
±¨·«1又名鸡肝散 !滇
香薷 !四棱蒿等 o为哈尼族民族药 o其叶 !花或全草均
可入药 o用于治疗感冒 !痢疾 !肝炎等病症 ≈t ~主要
产于云南南部和东南部 !贵州和广西等地 o资源丰
富 ∀四方蒿的主要成分为黄酮 o尤以花序中黄酮含
量最高 ≈uov ∀研究证明四方蒿总黄酮有保护心肌细
胞的作用 o对心肌缺血 !急性心肌梗死等有明显的疗
效 ≈w2z ∀四方蒿片剂由四方蒿花序提取物制得 o为控
制其质量 o作者采用 °≤建立了四方蒿片剂的指
纹鉴别方法 o并应用该法分析比较了不同批次四方
蒿药材 !提取物和片剂的色谱图 o结果表明四方蒿片
剂与提取物的色谱图具有良好的相似度 o建立的方
法可以用于四方蒿制剂的质量控制 ∀
1 仪器与试药
ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱仪系列 k四元梯度
泵 o自动进样器 o恒温进样器 o柱温箱 o二极管阵列检
测器 l~° ≤«¨ °≥·¤·¬²±¶数据处理软件 ∀
木犀草素苷 k浙江大学药学院中药与天然药物
研究室提供 o纯度 |y1sh l~木犀草素对照品 k批号
tttxus2ussusto中国药品生物制品检定所 o供含量
测定用 l~四方蒿花序 !四方蒿提取物 k浙大药学院
中药与天然药物化研究室提供 o由浙江大学药学院
徐娟华副教授鉴定 l~四方蒿片 k浙大药学院药物制
剂研究所提供 l~芦丁 kss{s2|zsxo中国药品与生物
制品检定所 o供含量测定用 o含量 |t1zh l∀
2 方法
211 色谱条件 ⁄¬¤°²±¦¬¯× ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅
uss °°ox Λ°l~柱温 us ε ~检测波长 uxu ±°~流动
相乙腈 2s1st °²¯ # pt磷酸二氢钾缓冲液 k³
u1slo流动相梯度见表 t~进样量 us Λ∀
表 t 流动相梯度
时间 r°¬± 乙腈 rh 时间 r°¬± 乙腈 rh
s t xs uw
ts v xx u{
t{ tx yx vv
ux tx zv xx
vx t| |s zv
ws us
212 样品溶液配制 药材溶液 }取四方蒿花序捣成
粉末 o称取粉末 s1v ªo于 xs °具塞锥形瓶中 o加入
ts °甲醇 2水 ktΒtl溶液 o称重后置 xs ε 水浴中超
声 vs °¬±o放冷 o补足失去的重量 o取上清液 o用
s1wx Λ°滤膜滤过 ∀
提取物溶液 }取四方蒿提取物 ux °ªo于 ux °
量瓶中 o加入 tx °甲醇 2水 ktΒtl混合溶液 o超声
tx °¬±使溶解 o并稀释至刻度 o溶液经 s1wx Λ°滤
膜滤过 ∀
片剂溶液 }取数片 o研成粉末 o称取约 ys °ª细
粉 k相当于 trts片粉量 lo置于 ux °量瓶中 o以下
按 /提取物测定溶液 0项下方法操作 o得片剂测定溶
液 ∀另取相应量片剂的辅料粉末 o按 /片剂测定溶
液 0项下方法处理 o得空白辅料溶液 ∀
对照品溶液 }取木犀草素苷和木犀草素对照品 o
分别加甲醇适量使溶解 o制成约 s1t °ª# °pt的溶
液 ∀
213 °≤指纹图谱方法学考察 系统适用性试
验 }取四方蒿提取物测定溶液 o注入高效液相色谱
仪 o记录色谱图 o以木犀草素苷峰 kw号 l为基准 o计
算共有峰相对于基准峰的相对保留时间 kτΡ χ)和相
对峰面积 (Αχ) ,并计算 y次重复进样的 τΡ χ和 Αχ的相
对标准差 k ≥⁄l来考察系统的重复性 ~以最难分离
的基准峰与 v号共有峰之间的分离度 kΡl和各共有
峰的理论板数来考察系统的分离效能 ∀结果测得各
共有峰的柱效大于 ux sssoτΡ χ和 Αχ的 ≥⁄均小于
th o基准峰与 v号共有峰之间的 Ρ大于 t1x∀观察
药材 !提取物和制剂指纹图中 o基准峰保留时间的
#zu{t#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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u1u倍后 k约 |s °¬±l不再有色谱峰出现 o故记录时
间定为主峰保留时间的 u1u倍 ∀
精密度试验 }同一批号的四方蒿提取物 x份 o配
成测定溶液后测得的指纹图谱各共有峰相对于基准
峰的相对保留时间与相对峰面积的 ≥⁄均小于
th o表明方法的重复性良好 ∀
稳定性试验 }取四方蒿提取物测定溶液 o于室温
下放置 souowo{ottouw «和 w ε 下冷藏 v §后测定 o
测得各共有峰相对保留时间的 ≥⁄均 th o相对
峰面积的 ≥⁄均 vh o表明在上述试验条件下测
定溶液稳定 ∀
214 测定方法 取上述各测定溶液 us Λo分别注
入高效液相色谱仪 o记录色谱图 o找出共有峰 o以木
犀草素苷为基准 k与木犀草素苷对照品比较 o根据
色谱图和光谱图 o发现四方蒿提取物色谱图上的 w
号峰为木犀草素苷 lo其相对保留时间和相对峰面
积分别定为 t1sso计算各共有峰的相对保留时间和
相对峰面积 o见图 t∀应用中药指纹图谱相似度计
算软件 kussw 版 o国家药典委员会 l计算相似度数
值 ∀
图 t 四方蒿 °≤图谱
1药材 ~
1提取物 ~ ≤1片剂 ~ w1木犀草素苷 ~{1木犀草素
3 结果
311 指纹图色谱峰确证 通过比较木犀草素苷和
木犀草素对照品与样品的色谱图 o对样品图中该 u
个特征峰进行确证 ∀样品图中保留时间为 wt1{ °¬±
处的色谱峰确证为木犀草素苷 o保留时间为 yv1w
°¬±处的色谱峰为木犀草素 k{号峰 l∀木犀草素苷
和其水解物木犀草素是四方蒿的主要有效成分 o因
此以这两组分峰为 ¤µ®¨ µ峰 o设定时间窗宽度为
s1to进行保留时间校正及谱峰自动匹配 ∀得到 us
个峰是四方蒿药材 !提取物 !片剂测定溶液的 °≤
图谱中所共有的色谱峰 ∀舍去溶剂峰 o选取峰面积
归一化法含量大于 th的 {个共有峰进行色谱方法
学考察 ∀
312 相似度计算 采用均值法产生药材 !提取物 !
片剂各自的对照图谱 o分别计算不同批号药材或提
取物或片剂图谱的相似度 o结果 u批药材 k花序 l的
相似度分别为 s1|yx和 s1|w|~v批四方蒿提取物的
相似度分别为 s1|||os1|{v及 s1||w~ts批四方蒿
片剂的相似度分别为 s1|{vos1||zos1|{uos1||{o
s1|||os1|||os1||xos1||xos1||xos1||x∀另以其
中一批药材 k花序 tl或提取物 k提取物 vl或片剂
k片剂 tsl的指纹图谱为参照图谱 o计算其他批次的
药材 !提取物或片剂的相似度 o分别大于 s1|vo
s1|xos1||∀
不同批号的四方蒿药材 !提取物和片剂的指纹
图谱 o采用中位数法产生 v者的对照图谱 o计算各待
测样品的相似度 o结果如下 }花序 t相似度为
s1zzx~花序 u为 s1yyu~提取物 t为 s1|{|~提取物 u
为 s1|z{~提取物 v为 s1||y~ts批片剂相似度分别
为 s1|{xos1||{os1|{xos1|||os1||vos1|||os1|||o
s1||uos1||uos1||u∀
以上实验结果显示 o四方蒿药材与其提取物及
制剂的指纹图之间有很大差别 o相似度 s1y ∗ s1z∀
在提取物及制剂的指纹图谱中 ow号峰面积归一化
法含量在 ysh以上 o且在 {号峰后没有再出现大的
色谱峰 o但在药材指纹图谱中 ow号指纹峰面积归一
化法含量仅为 uuh oy号峰的含量明显高于其在提
取物及制剂中的量 o峰面积归一化法含量接近于 w
号峰 o并且在 {号峰后还出现了一组含量较高的色
谱峰 o表明这些成分在四方蒿提取物的制备过程中
丢失了 ∀
4 讨论
411 色谱条件选择 检测波长选择 经二极管阵
列检测器 uss ∗ wss ±°扫描 o综合考虑四方蒿提取
物中各个成分的吸收光谱 o选择 uxu ±°为检测波
长 ∀
流动相选择 采用乙腈 2s1st °²¯ # pt磷酸二
氢钾缓冲液 k³ u1sl时 o基线波动小 o色谱峰峰形
#{u{t#
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∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
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较好 ∀考察乙腈在流动相中比例从 sh ∗ tssh线
性变化时 o当含量大于 xxh时 o没有再出现大的色
谱峰 o故选择乙腈比例 th ∗ xxh非线性缓慢变化 ∀
为使各色谱峰间的分离度尽可能达到最大 o对洗脱
梯度进行了优化 o结果在表 t条件下 o各成分峰达到
最佳分离 ∀同时考察辅料对片剂指纹图谱的影响 o
结果辅料溶液除溶剂峰外无明显的杂质峰 ∀
412 样品处理条件选择 药材提取条件选择 o取四
方蒿花序粉末约 s1v ª数份 o分别置于 xs °具塞
锥形瓶中 o加入 ts °不同提取溶剂 o采用不同的提
取方法 o记录色谱图 ∀比较 xs ε 温浸 ys °¬±!vs
°¬±oxs ε 超声 vs °¬± v种提取条件和以甲醇 2水
ktΒtl!纯甲醇为溶剂时的主峰 k木犀草素苷 l及各
成分峰的峰面积大小 o结果表明在甲醇 2水 ktΒtl溶
液中 xs ε 超声 vs °¬±提取条件下 o各色谱峰面积
达到最大 o出现的色谱峰最多 ∀
片剂和提取物的提取条件选择 比较了不同提
取溶剂 k水 !甲醇 !甲醇 2水 l!不同测定液质量浓度
ks1xot1sou1s °ª# °pt l条件下的色谱图 o结果表
明以甲醇 2水 ktΒtl为溶剂 o提取物浓度 t °ª# °pt
条件下 o出现的色谱峰多且分离度良好 o增加测定液
浓度至 u °ª# °pt时 o虽然峰面积增大了 t倍 o但
受到提取物溶解度的制约 o且色谱峰个数并未增加 o
故选择 t °ª# °pt为测定液质量浓度 ∀
413 v批提取物分别由不同批次药材提取制得 ots
批片剂分别由 v批提取物制得 o不同批号提取物或
片剂之间指纹图谱相似 o提取物与片剂的图谱也非
常相似 k相似度大于 s1|xlo说明提取与制片工艺稳
定 o片剂较好地保留了提取物指纹图谱中的各种成
分 ∀图谱中 {号峰为木犀草素色谱峰 o在片剂指纹
图谱中相对含量较提取物中大 o推测是由于四方蒿
提取物在制片过程 o部分木犀草素苷发生水解所致 ∀
≈参考文献
≈t 全国中草药汇编编写组 1全国中草药汇编 ≈ 1上册 1北京 }
人民卫生出版社 ot|zx}uyy1
≈u 吕金顺 o沈 彤 o郭 珍 o等 1四方蒿的化学成分 ≈ 1植物
学报 o ussto wvkxl}xwx1
≈v 陈海永 o周长新 o楼宜嘉 o等 1四方蒿化学成分的研究 ≈ 1
中国中药杂志 o ussxo vskusl}tx{|1
≈w ¬±ª ≠ o ²∏≠ 1 °µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·²©·²·¤¯ ©¯¤√²± ¶¨©µ²° Ελσηολτ2
ζια βλανδαk׃∞
l²± °¼²¦¤µ§¬¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤¬±§∏¦¨§¥¼ ¦²µ²±¤µ¼ ²¦2
¦¯∏¶¬²± ¬± ¦¤±¬± ¶¨≈ 1 ∞·«±²³«¤µ°¤¦²¯o usswo |wktl}tst1
≈x ¬±ª o ²∏ ≠ 1 ײ·¤¯ ©¯¤√²± ¶¨©µ²° Ελσηολτζια βλανδα µ¨§∏¦¨ ¬±2
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¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¬± µ¤·¶≈ 1 ∞·«±²³«¤µ°¤¦²¯o ussxotstkt2vl}ty|1
≈y ¬±ª o ²∏≠ o • ∏ o ·¨¤¯1 ײ·¤¯ ©¯¤√²± ¶¨©µ²° Ελσηολτζια βλαν2
δα µ¨§∏¦¨ ¬±©¤µ¦·¶¬½¨ ¤±§¬°³µ²√¨«¨ ¤µ·©∏±¦·¬²± §∏µ¬±ª¤¦∏·¨°¼²2
¦¤µ§¬¤¯ ¬±©¤µ¦·¬²± ¥¼ ¬±«¬¥¬·¬±ª°¼²¦¤µ§¬¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¬± ¦¤±¬± ¶¨≈
1 ¦·¤≤¤µ§¬²¯o ussxoys kvl}u|x1
≈z 楼洪刚 o何俏军 o吴洪海 o等 1鸡肝散总黄酮抗胸痹证的实验
研究 ≈ 1中药材 o ussvo uyktul} {z{1
≈责任编辑 鲍 雷
≈收稿日期 ussx2st2su
≈通讯作者 3 傅欣彤 oר¯}kstslyytuwwuuo∞2°¤¬¯}©∏¬¬±·²±ªy{
¶²«∏1¦²°
穿心莲注射液质量标准研究
傅欣彤 tou3 o李 琰 t o祁 进 t o张小茜 t o石任兵 u
kt1北京市药品检验所 o北京 tsssvx~u1北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsul
穿心莲注射液为 5中华人民共和国卫生部药品
标准 #中药成方制剂 6第 t|册收载的品种 o原标准
中仅有理化鉴别及比色法测定总内酯的含量 o方法
专属性差 ~作者增订了薄层色谱鉴别 !高效液相色谱
法测定穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的总量 o增强
了专属性 o提高了质量标准 o并对收集到的 v个厂家
tu批样品 !y批药材进行了薄层色谱鉴别及穿心莲
内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定 o为该制剂及药
材的质量控制提供依据 ∀
1 仪器 !试剂与样品
岛津 ts p ¦¯¤¶¶√³高效液相色谱仪 ~硅胶 预
制薄层板 k青岛海洋化工厂分厂 l~甲醇为色谱纯 o
其他试剂均为分析纯 ~穿心莲内酯 !脱水穿心莲内酯
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第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
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