全 文 ：第 19卷　第 3期
2003年 9月
福建师范大学学报 (自然科学版 )
Journal of Fujian No rmal Univ ersity ( Natural Science)
Vo l. 19　 No. 3
Sept. 2003
文章编号: 1000-5277( 2003) 03-0118-03
小鱼仙草总黄酮提取工艺的初步研究
刘小芬 , 林文群 , 刘剑秋 , 陈炳华
(福建师范大学生物工程学院 , 福建 福州　 350007)
　　摘要: 利用聚酰胺—硝酸铝显色法测定不同产地小鱼仙草 (茎、 叶 )总黄酮含量 . 对不同酒精体积分数、
提取倍量、 提取温度及提取时间等条件进行了初步分析 .结果表明 , 40倍量、 75%乙醇于 80℃恒温中提取 3h
为最佳条件 . 在此条件下 , 1号小鱼仙草总黄酮含量为 8. 67% , 2号小鱼仙草总黄酮含量为 12. 46% , 3号小
鱼仙草总黄酮含量为 3. 16% .
关键词: 总黄酮 ; 小鱼仙草 ; 提取工艺
中图分类号: Q946　　　文献标识码: A
　
小鱼仙草为唇形科石荠苎属植物 [1 ] . 长江以南各省多有分布 , 省内各地常见 , 生于山坡、路旁、 灌
丛中或水边 . 民间用全草入药 , 可治感冒发热、 中暑头痛、 肾炎、 肺积水、 扁桃体炎等症 . 有关小鱼
仙草黄酮化学成分及含量分析 , 国内尚未见报道 , 作者据化学成分预试 , 得知小鱼仙草 (茎、 叶 ) 中
含有黄酮类化合物而对其提取工艺进行了初步分析并测定 , 旨在确定真正的药效成分 , 为野生资源开
发与综合利用提供科学依据 .
1　仪器与材料
1. 1　仪器
索式提取器、 752紫外光栅分光光度计、 粉碎机、 恒温水浴锅、 砂芯漏斗 .
1. 2　材料
干燥粉碎的小鱼仙草茎叶粉末 ( 1、 2、 3号小鱼仙草分别采自福州建新、 永泰方广岩和福清灵石
寺 )、 聚酰胺粉 (经 70%酒精预处理 )、 0. 1 mg /m L芦丁标准液 .
2　实验方法
2. 1　小鱼仙草 (茎、 叶 ) 化学成分预实验
取 1号、 2号、 3号小鱼仙草粉末各 1. 0 g , 分置磨口圆底烧瓶中 , 加 20 mL 85%乙醇水浴加热回
流 1 h, 过滤得滤液 , 并用石油醚萃取以去除叶绿素 , 取滤液做为预实验供试液 , 主要检识总黄酮、 香
豆素、 酚类化合物 [2 ] .
2. 2　提取工艺的确定
2. 2. 1　样品处理: 称取粉末 1. 0 g , 加乙醇于水浴中恒温回流提取 . 冷却至室温 , 补充溶剂至原体积 ,
过滤 , 准确吸取滤液 5. 0 mL, 加入 0. 3 g聚酰胺粉末 , 搅匀 , 转移至装有 0. 3 g聚酰胺粉末的砂芯漏
中 , 同体积分数乙醇数次洗脱 (少于 50 mL) , 收集洗脱液转移至 100 mL容量瓶中 , 加同体积分数乙


作者简介: 刘小芬 ( 1977—　 ) , 女 , 福建东山人 , 硕士研究生 .
基金项目: 福建省科技厅基金资助项目 ( K20096)
收稿日期: 2002- 09- 20
醇至刻度 , 备测 [3 ] .
2. 2. 2　标准曲线的制备: 精确吸取 0. 1 mg /mL的芦丁标准液 0、 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0 mL于 6
只具塞试管中 , 各加 30%乙醇成 5 mL, 加 5% NaNO2溶液 0. 3 mL, 摇匀 , 放置 6 min, 加 10% Al
( NO3 ) 3溶液 0. 3 mL, 摇匀 , 放置 6 min, 加 1 mo l /L NaOH溶液 4 mL, 加水 0. 4 mL, 摇匀 , 放置 15
min, 于 510 nm波长下测定消光值 [3 ] , 以消光值对标样含量 mg数作图 (图 1) .
2. 2. 3　样液测定: 精确量取于各种不同条件下制备的备测液 5 mL于具塞试管中 , 按制备芦丁标样的
方法 [3 ]依次进行测定 , 由回归方程计算样品中总黄酮含量 . ( 1)提取液体积分数的确定: 分别用 60% 、
70%、 75%、 80%、 85%乙醇提取 3 h, 提取倍量为 30 mL, 温度为 70℃ . ( 2) 提取倍量的确定: 分别
用 30、 40、 50 m L倍量 75%乙醇提取 3 h, 温度为 70℃ . ( 3) 提取温度的确定: 原料加 40倍量 75%
乙醇分别于 60、 70、 80、 90℃恒温水浴中回流提取 3 h. ( 4) 提取时间的确定: 原料加 40倍量 75%乙
醇于 80℃恒温水浴中分别加热 1、 2、 3、 5 h. ( 5) 不同产地小鱼仙草总黄酮含量比较: 据上述测定所
得出的最佳条件 , 分别测定 1、 2、 3号小鱼仙草总黄酮的含量 [4～ 6 ] . 所有实验重复两次 .
2. 2. 4　计算公式: 样品中总黄酮含量 (以芦丁计 ) (% ) = CV1V3 /WV2V4× 1 /10,
式中 C——样液含总黄酮量 ( mg ) ; V1—— 抽提倍量体积 ( mL) , V2—— 聚酰胺处理时取样体积
( mL) ; V 3—— 聚酰胺处理后定容体积 ( mL) , V4——显色反应测定取用样液体积 ( mL) ; W——称样
量 ( g ) .
3　结果与讨论
3. 1　小鱼仙草 (茎、 叶 ) 预实验结果
小鱼仙草 (茎、 叶 ) 预实验结果见表 1.
表 1　小鱼仙草 (茎、 叶 ) 中黄酮 、 蒽醌、 香豆素预实验
检查项目 试剂名称 实验现象
黄酮 Δ1. 1% Alcl3试剂 自然光下黄绿色 , UV下有黄绿荧光
　 * 2. 盐酸 -镁粉反应 颜色加深
　 Δ3. 氨蒸气处理 UV下有黄色荧光
蒽醌 * 1. NaO H介质中 棕红色
　 Δ2. 醋酸镁反应 呈现橙色
香豆素 Δ1. 荧光现象 UV下有淡蓝色荧光
　 Δ2. 羟胺反应 从黄绿色变黄色直至黑褐色
　　　　　　注: * 在试管进行 , Δ在滤纸进行
由预实验结果可知 , 小鱼仙草茎叶中含有黄酮类化合物 , 本实验对其提取工艺及不同产地的总黄
图 1　芦丁标准品体积
分数与吸光度的关系
酮含量进行初步分析 .
3. 2　实验标准曲线
实验测得标准曲线的如图 1.
利用一元线性回归分析得标准曲线为 Y= 1. 1517A+ 7. 9
× 10- 3 , 其线性范围为 0～ 0. 5 mg , 相关系数 r= 0. 9989.
3. 3　提取工艺的确定
表 2　提取液体积分数对黄酮提取量的影响 %
提取体积分数 60 70 75 80 85
1号含量 3. 72 6. 96 6. 54 4. 28 4. 79
2号含量 9. 20 9. 53 9. 66 9. 82 9. 55
　　由表 2可知 ,以 70%～ 80%乙醇提取总黄酮能得到较高的
119　第 3期　　　　　　　　　　　刘小芬等: 小鱼仙草总黄酮提取工艺的初步研究
提取率 .
表 3　提取倍量对提取率的影响
提取倍量 /m L 30 40 50
1号含量 /% 6. 54 7. 60 3. 32
2号含量 /% 9. 66 11. 89 10. 92
　　 表 4　温度对提取率的影响
提取温度 /℃ 60 70 80 90
1号含量 /% 6. 98 7. 60 8. 67 4. 35
2号含量 /% 11. 42 11. 89 12. 46 10. 10
　　由表 3可知 , 40倍原料重的乙醇提取率最高 . 由表 4可知 , 提取温度为 80℃时提取率最高 .
表 5　时间对提取率的影响
提取时间 /h 1 2 3 5
1号含量 /% 6. 32 7. 73 8. 67 8. 64
　　由表 5可知 , 提取时间为 3h最好 , 再延长提取时间也不会提高提取率 .
不同产地小鱼仙草总黄酮含量比较: 分别测得 1号小鱼仙草总黄酮含量为 8. 67% , 2号小鱼仙草
为 12. 46% , 3号小鱼仙草为 3. 16% . 即产于永泰方广岩的小鱼仙草总黄酮含量最大 , 福州建新产的
小鱼仙草总黄酮含量次之 , 福清灵石寺产的小鱼仙草总黄酮含量最低 .
3. 4　讨论
实验测得小鱼仙草总黄酮的最佳提取条件为于 40倍量 75%乙醇中 80℃恒温提取 3 h.实验结果表
明 , 3种不同产地的小鱼仙草总黄酮含量有明显不同 . 分析其原因 , 可能与不同产地的生态条件、土壤
条件、 气候条件等有关 . 与文献中报道的其它植物总黄酮含量相比 , 小鱼仙草的总黄酮含量是较高的 ,
有着较好的利用前景 . 本文作者主要研究小鱼仙草总黄酮的提取工艺与含量 , 有关其黄酮类化合物的
类型与结构等有待进一步深入探讨 .
参考文献:
[ 1 ]福建省科学技术委员会 , 福建植物志编写组 . 福建植物志: 第 4卷 [M ]. 福州: 福建科学技术出版社 , 1989. 558
- 559.
[ 2]肖崇厚 . 中药化学 [ M ]. 上海: 上海科学技术出版社 , 2000. 595- 601.
[ 3]元晓梅 , 蒋明蔚 , 胡正芝 . 聚酰胺吸附—硝酸铝显色法测定山楂及山楂制品中的总黄酮含量 [ J]. 食品与发酵工业 ,
1996, 4: 27- 32.
[ 4]王敦清 , 李先春 . 草珊瑚根茎叶中总黄酮成分的研究 [ J]. 中草药 , 1996, 27 ( 6): 337- 338.
[ 5]贾冬英 , 乔玉兰 , 谭敏 . 用正交法探讨苦荞麦及籽壳中总黄酮 (芦丁 ) 的乙醇提取工艺 [ J]. 食品科学 , 1997, 18
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[ 6]梁红 , 潘伟明 , 张伟锋 . 银杏叶黄酮提取方法比较 [ J]. 植物自然资源与环境 , 1999, 8 ( 3): 12- 17.
A Preliminary Study on Total Flavonoids fromMosla dianthera
LIU Xiao-fen, LIN Wen-qun , LIU Jian-qiu, CHEN Bin-hua
(Bioengineering College , Fujian Normal University , Fuzhou 350007, China )
Abstract: This paper reports the studying on to tal flavonoids f rom stem and leaf o f Mosla di-
anthera Maxim which g row in di fferent circumstance, ex t racted wi th dif ferent ex t raction condi tions,
puri fied by polycapro lactan and determined. Results show ed that the best w ay is ex t racted by 75%
ethanol in 80℃ fo r at least 3 hours. The max im content of the total f lav onoids is 8. 67% in No1,
12. 46% in No2 and 3. 16% in No3 respectiv ely.
Key words: to tal flav onoids; Mosla dianthera Max im; ex traction condition
(责任编辑　余　望 )
120 福 建 师 范 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 　　　　　　　　　　　 2003年