全 文 ：第 25卷 ,第 6期 光　谱　实　验　室 Vo l . 2 5 , No . 6
2 0 0 8年 1 1月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory November , 2008
蒙药材肋柱花中盐酸小檗碱的
反相高效液相色谱法分析①
① 内蒙古自然科学基金 ( 200308020620)和内蒙古民族大科学研究基金 ( YB0712)
② 联系人:手机: ( 0) 13947521310; E-mai l: nmgx l66@ 163. com
作者简介:席海山 ( 1970— ) ,男 ,内蒙古通辽市人 ,讲师 ,从事分析化学教学与科研工作。
收稿日期: 2008-08-14;接受日期: 2008-08-25
席海山　许 良② a　王志民　娜仁花
(内蒙古民族大学分析测试中心　内蒙古通辽市霍林河大街 22号　 028042)
a (内蒙古民族大学化学学院　内蒙古通辽市霍林河大街 22号　 028042)
摘　要　用高效液相色谱法测定蒙药材肋柱花中小檗碱的含量。 色谱流动相为乙腈∶水 (V∶ V=
30∶ 70,每 1000m L水中加入 KH2 PO4 3. 4g ) ,流速为 0. 8m L /min,紫外检测波长为 345nm。结果表明 ,盐酸小
檗 碱在 6. 25— 50μg /m L范围内具有良好的线性关系 ,相关系数为 0. 9992,实验测得平均回收率为 97. 7% ,
RSD= 0. 94% (n= 6)。 方法操作简便 ,灵敏度高 ,结果准确可靠。
关键词　肋柱花 ,小檗碱 ,反相高效液相色谱法。
中图分类号: O657. 7+ 2　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2008) 06-1281-03
1　前言
肋柱花 (蒙名为哈比日根 -地格达 )是蒙医常用药材 ,是龙胆科肋柱花属植物肋柱花
Lomatogonium rotatum (L . ) Fries ex Nyrn.的干燥全草。具有平息“协日’ ,清热 ,健胃 ,愈伤功能 ,
用于“协日”热 ,瘟疫 ,流感 ,伤寒 ,中暑头痛 ,肝胆热 ,黄疽 ,胃协日 ,伤热等病症。是蒙医治疗肝胆疾
病的主要传统药物 ,临床疗效显著 ,收载于《中华人民共和国卫生部药品标准· 蒙药分册》 [ 1] ( 1998
年版 )和《内蒙古蒙药材标准》 [2 ]。 近年来 ,对该药材的鉴别方法 [ 3, 4]、化学成分 [ 5]、含量测定方法
[6, 7 ]、近期研究进展 [8 ]已有报道 ,本文首次建立了测定肋柱花中盐酸小檗碱的反相高效液相色谱
方法 ,结果令人满意。
2　实验部分
2. 1　仪器与材料
LC-10A型高效液相色谱仪:附带 SPD-10A紫外可见检测器 , LC-10AD色谱工作站 (日本岛津
公司 ) ; MilliQ Academic型超纯水系统 (美国 Millipo re公司 ) ; FA1604型电子天平 (上海天平仪器
厂 ) ; 2200LH型超声波提取仪 (上海科导超声仪器有限公司 ) ; 80-2型离心沉淀器 (上海手术器械
厂 ) ; 100— 1000μL微量取样器 (上海求精生化试剂仪器厂 ) ;盐酸小檗碱对照品 (中国药品生物制品
捡定所 ) ;乙腈 ,色谱纯 (美国 Fisher公司 ) ;实验用水为超纯水 ;肋柱花 ,课题组从内蒙古阿鲁科尔沁
旗北部采集。
2. 2　色谱条件
分析柱: Wa ters公司 Xterra( 150mm× 3. 9mm, 4μm)柱 ,流动相∶乙腈 -水 ( V∶ V= 30∶ 70,每
1000m L水中加入 KH2 PO4 3. 4g ) ,流速: 0. 8m L /min;检测波长: 紫外 345nm,柱温 25℃。
3　结果与讨论
3. 1　色谱图
在上述色谱条件下 ,有关色谱图分别如图 1、图 2所示。
图 1　盐酸小檗碱对照品色谱图
1——盐酸小檗碱。
图 2　肋柱花样品色谱图
1—— 盐酸小檗碱。
3. 2　校准曲线
准确称取 5mg的盐酸小檗碱对照品 ,置于 10mL的容量瓶中 ,用甲醇溶解 ,配制成 0. 5mg /m L
的标准溶液。吸取上述对照品溶液共 5份 ,每份 5μL, 分别加不同体积甲醇 ,得到浓度为 6. 25、 12. 5、
25、 50、 100μg /mL的系列标准液 ,注入液相色谱仪 10μL,测定峰面积 ,以进样量 (μg )为横坐标 ,峰面
积积分值为纵坐标 ,绘制校准曲线回归方程 C= 9. 176× 10- 8A+ 1. 256× 10- 3 , r= 0. 9992,结果表
明盐酸小檗碱在 6. 25— 100μg /mL范围内 ,浓度与峰面积值呈良好的线性关系。
3. 3　供试品溶液的制备
取本品研磨 ,称取 0. 2g置具塞三角烧瓶内 ,加甲醇 10mL,超声处理 40min,静置 ,离心 10min(转
速 3500r /min) ,取上清液 ,转移到 10mL容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,过微孔滤膜 ,以备测试。
3. 4　稳定性试验
取同一样品溶液 ,每隔 1h进样 5μL测试 ,结果表明样品溶液中的被测组分在 8h内基本稳定。
3. 5　重现性试验
准确取 10份肋柱花样品各 0. 2g ,在 3. 3项下方法制备后 ,在上述色谱条件下进行分析 ,计算盐
酸小檗碱的含量 ,考察方法重现性 ,结果其 RSD为 3. 61% ,表明方法重复性良好。
3. 6　回收率试验
按实验方法测定样品溶液 ,并进行加样回收试验 ,计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　回收率试验结果 (n= 6)
序号 取样量
( g)
盐酸小檗碱含量
( mg)
加标量
( mg )
测得总量
( mg)
回收率
(% )
平均值
(% )
RSD
(% )
1 0. 2000 0. 1188 0. 25 0. 3655 99. 1
2 0. 2000 0. 1127 0. 25 0. 3525 97. 2
3 0. 2000 0. 1180 0. 25 0. 3558 96. 7 97. 7 0. 94
4 0. 2000 0. 1162 0. 25 0. 3581 97. 8
5 0. 2000 0. 1149 0. 25 0. 3536 96. 9
6 0. 2000 0. 1150 0. 25 0. 3588 98. 3
1282 光谱实验室 第 25卷
3. 7　样品分析
在上述色谱条件下 ,进供试品溶液 10μL,测峰面积 .用回归方程计算浓度 ,计算含量 ,其测定结
果见表 2。
4　结论
( 1)提取溶剂与超声时间的选择: 在供试品溶液制备中 ,对提取溶剂 (乙醇、甲醇 , 50%甲醇 ) ,
超声时间 ( 20、 30、 40、 50min )进行了考察。结果表明 ,用纯甲醇作超声提取 40min,样品中的盐酸小
檗碱能够被充分提取。
( 2) 流动相的选择: 实验曾以甲醇: 0. 02moL /L磷酸∶水∶乙腈 = 10∶ 30∶ 30∶ 30,
乙腈∶水∶乙酸 = 15∶ 80∶ 5,为流动相 ,考察了色谱分离情况 ,结果以乙腈∶水 = 30∶ 70, (每
1000m L溶液中含有磷酸二氢钾 3. 4g )为流动相时 ,样品中盐酸小檗碱保留时间适宜、峰形对称 ,分
离度符合分析要求。
表 2　样品测定结果 (n= 3)
样品号 测定值 ( mg /g ) 平均值 (mg /g )
1 0. 5937 0. 5921 0. 5946 0. 5935
2 0. 5762 0. 5873 0. 5790 0. 5808
3 0. 5861 0. 5885 0. 5871 0. 5872
参考文献
[1 ]内蒙古自治区卫生厅编著 .内蒙古蒙药材标准 [M ].赤峰:内蒙古科学技术出版社 , 1986. 411.
[2 ]中华人民共和国卫生部编著 .中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册 [M ] .北京:人民卫生出版社 , 1998. 15.
[3 ]白翠兰 ,巴根那 ,王秀兰 .蒙药肋柱花的鉴别研究 [ J ].中国民族民间医药杂志 , 2002, 57: 236— 237.
[4 ]白长明 ,巴根那 ,自玉霞 ,吴龙堂 .蒙药肋柱花紫外谱线组法鉴别的初步研究 [ J] . 中国民族医药杂志 , 2003, 9( 4): 29— 30.
[5 ]李玉林 ,丁晨旭 ,王洪伦 ,索有瑞 .辐状肋柱花的苷类成分 [ J ].西北植物学报 , 2006, 26( 1): 0197— 0200.
[6 ]丁文雅 ,张婷婷 ,王强 . 7种龙胆科蒙药药材中龙胆苦苷的含量测定 [ J] .中国药科大学学报 , 2008, 39( 1): 52— 54.
[7 ]王秀梅 ,巴根那 ,白明纲 . 高效液相色谱法测定肋柱花中獐牙菜苦苷的含量 [ J] . 内蒙古民族人学学报 (自然科学版 ) , 2007, 22
( 3): 320— 322.
[8 ]吴柒柱 ,包巴特尔 ,白海花 .蒙药肋柱花的研究进展 [ J ].时珍国医国药 , 2004, 15( 6): 366— 367.
Determination of Content of Berberine Hydrochloride
in the Mongolian Medicine Leizhuhua by RP-HPLC
X I Hai-Shan　XU Lianga　 SUN Wu-Rin　 NA Ren-Hua
( Ana lysis an d Test ing Center , Innermongol ia University for N ationali ties , Tong liao , Innermongol ia 028042, P . R. China )
a (Chem istry Col lege, Innermongol ia Un iversity for Na tiona li ties , Tong liao , Innermongol ia 028042, P. R.Ch ina )
Abstract　 The RP-HPLC fo r determination o f berberine hydrochlo ride in mongolian herbal
drug Leizhuhua w as established. Xterra ( Sum× 150mm× 3. 9mm. Waters ) w as used as
chroma tog raphic column, acetoni triLe-wa ter ( 3∶ 7 ) as a mobile phase. The f low rate w as
0. 8mL /min and detection w aveleng th w as at 345nm. The linea r range of Berberine Hydrochlo ride
w as 6. 25— 50μg /m L, r= 0. 9992. The average recovery rate w as 97. 7% , RSD= 0. 94% (n= 6) .
The method is simple accurate and rapid wi th good reproducibi li ty.
Key words　 Leizhuhua , Berberine Hydrochlo ride, RP-HPLC .
1283第 6期 席海山等:蒙药材肋柱花中盐酸小檗碱的反相高效液相色谱法分析