全 文 ：·实验研究·
傣药肾茶中熊果酸的含量测定
康绍建1 , 侯安国2 , 沈　妍2
(1.云南省食品药品检验所 , 云南 昆明 650011;2.云南中医学院 , 云南 昆明 650500)
　　摘　要:目的:建立高效液相色谱法测定肾茶中主要有效
成分之一熊果酸含量的方法 , 对提取条件和测定条件进行筛
选 ,找出肾茶中熊果酸的含量测定的合适方法。方法:采用反
相高效液相色谱法测定肾茶中熊果酸的含量。色谱条件为:
流动相为乙腈-0.1%磷酸(78:22);色谱柱为 Eclipse XDB-
C18柱(150 mm×4.6 mm , 5 μm);紫外检测波长 210 nm;流速
1.0 mL/ min;柱温 35 ℃。结果:经测定熊果酸在 1 ～ 6 μg 的
范围内与峰面积呈现良好的线性关系 , 其回归方程为 y=
469.001676X + 0.0690635 , r = 0.99999;平均 回收 率为
98.76%, RSD=1.18 %。结论:本方法简便 、快速 , 结果准确 、
可靠 ,可作为肾茶药材中熊果酸的含量测定方法。
关键词:肾茶;熊果酸;含量测定
文献标识码 A 中图分类号:R284.1
文章编号:1007-2349(2010)07-0054-03
肾茶[ Cle rodendranthus spicatus(Thunb.)C.Y.Wu] 为唇
形科肾茶属植物 ,又名猫须草 , 全世界约 5 种 , 我国仅有 1 种 ,
主产于广东 、海南 、广西南部 、云南南部 、台湾及福建等地。在
云南以思茅和西双版纳地区种植最多[1] 。 肾茶傣名“雅糯
秒” , 全草入药 ,味苦 , 气清香 ,性凉 , 有清火解毒 , 利尿排石 , 凉
血止血之功[ 2] 。临床用于治疗急慢性肾炎 、膀胱炎及尿路结
石 ,胆结石 , 慢性肾功能不全 , 慢性肾炎及肾病综合征等。傣
医书“档哈雅”记载傣医用于治疗泌尿系统疾病已有 2000 多
年历史 ,疗效确实。
肾茶主要的化学成分有:黄酮类化合物 、酚酸类 、蒽醌类
及苷类 、氨基酸 、多肽 、蛋白质 、有机酸 、糖类 、多酚类化合物
等。其主要活性成分有迷迭香酸 、熊果酸 、黄酮类及肌醇等。
肾茶的药理作用有抗炎 、免疫调节 、抗氧化 、抗血小板聚集及
抗血栓 、抗菌 、利尿等。其抗炎作用主要与迷迭香酸及熊果酸
成分有关。熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合
物 ,分子式 C30H 48O 3 , 其抗炎机制目前认为主要是抑制脂质过
氧化物酶及环氧化酶 , 阻断花生四烯酸的代谢和抑制 PGE2
合成[ 3] 。
目前 ,张继华等[ 4]采用 RH-HPLC 测定了肾茶中迷迭香
酸的含量;高增平等[ 5] 采用薄层色谱扫描法测定了不同产地
猫须草中熊果酸的含量。为更好地控制肾茶药材质量 , 本文
采用 H PLC 法对肾茶药材中的熊果酸含量进行测定。该法与
薄层色谱扫描法比较具有简便 、快速 、准确 、可靠等优点 , 可作
为肾茶中熊果酸的含量测定方法。
1　仪器 、试药与材料
1.1　仪器　Ag ilent 1100 型组合式全自动高效液相色谱仪
(二极管阵列检测器 、含在线真空脱气机 、四元梯度泵 、柱温
箱 、色谱数据的采集与处理由 Agilent 化学工作站完成);
P recisa-XS125A 电子天平(瑞士);SK250H P 超声波震荡提
取器(上海科导超声仪有限公司)。
1.2　试药　熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号
110742-200313 , 供含量测定用);所用提取试剂均为分析纯 ,
乙腈为色谱纯 ,磷酸为分析纯 ,水为去离子水。
1.3　材料　肾茶:由思茅市药品食品检验所提供并鉴定。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性试验[ 6] 　Eclipse XDB-C18柱
(4.6 mm×150 mm , 5 μm);动流相乙腈-0.1%磷酸(78:22);
紫外检测波长 210 nm;流速 1.0 mL/ min;柱温 35 ℃。理论塔
板数不低于 5000。色谱图见图 1 、图 2。
图 1　对照品色谱图
图 2　样品色谱图
2.2　对照品溶液的制备　精确称取一定量的熊果酸对照品 ,
加甲醇制成 0.5 mg/m L的溶液作为对照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备
2.3.1　不同提取溶剂的考察　精密称取肾茶细粉 2 g , 置于
具塞瓶中 ,分别精密加入提取溶剂氯仿 、甲醇 、乙醚 50 m L , 称
定重量 ,超声 30 min , 取出放冷 , 再称定重量 ,用提取溶剂补足
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减失的重量 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤液 40 mL ,将续滤液置于水浴
上蒸干 ,残余物用甲醇溶解并定容至 10 mL 容量瓶 , 摇匀 , 用
0.45 μm 微孔滤膜过滤 ,作为供试品溶液。
分别用氯仿 、甲醇 、乙醚为提取溶剂制备供试品 , 比较各
提取溶剂提取肾茶中熊果酸的含量。用高效液相色谱法测
定 ,样品及对照品进样量均为 5 μL 。数据见表 1。
表 1　不同提取溶剂提取熊果酸的含量
提取
溶剂
肾茶药材量
(g)
样品峰
面积
对照品峰
面积
含量
(%)
平均含量
(%)
氯仿 2.0050 851.5880 0.2216 0.2169
2.0030 754.3000 0.2122
甲醇 2.0030 581.4000 0.1514 0.1513
2.0038 580.7526 1198.1000 0.1514
乙醚 2.0033 831.0495 0.2164 0.2138
2.0041 811.2000 0.2112
　　由表比较可知 ,用氯仿 、甲醇 、乙醚为提取溶剂提取肾茶
时 ,氯仿的提取效率较高 , 故选用氯仿为提取溶剂。
2.3.2　不同提取时间的考察　将肾茶用氯仿为提取溶剂 , 按
上述制备方法制备供试品 ,超声提取不同时间 , 比较各提取时
间提取肾茶中熊果酸的含量。用高效液相色谱法测定 , 样品
及对照品进样量均为 5 μL。数据见表 2。
表 2　不同超声时间提取熊果酸的含量
提取时间
(min)
肾茶药材量
(g)
样品峰
面积
对照品峰
面积
含量
(%)
平均含量
(%)
20
2.0022 685.6227 0.1930 0.1969
2.0050 714.6298 0.2009
30
2.0050 851.5880 0.2394 0.2258
2.0030 754.3000 1108.8923 0.2122
40
2.0043 748.1332 0.2104 0.2133
2.0033 768.9720 0.2163
　　由表比较可知 , 20 、30 、40 min 超声提取肾茶时 , 20 min
提取含量低 ,还不能充分提取 , 故不可采用。 而 40 min 的提
取效率与 30 min 的相差不大 , 所以将提取时间定为 30 min。
2.3.3　不同提取方法的考察　将肾茶用氯仿为提取溶剂 , 按
上述制备方法制备供试品 ,采用超声提取法和回流提取法 , 并
比较各提取方法提取肾茶中熊果酸的含量。用高效液相色谱
法测定 ,样品及对照品进样量均为 5 μL 。数据见表 3。
表 3　不同提取方法提取熊果酸的含量
提取
方法
肾茶药材量
(g)
样品峰
面积
对照品峰
面积
含量
(%)
平均含量
(%)
超声 2.0050 851.5880 0.2216 0.2156
30min 2.0030 804.2716 0.2095
回流 2.0013 356.0000 0.0928 0.0992
2h 2.0046 405.2880 1198.1000 0.1055
回流 2.0061 451.2000 0.1173 0.1219
5h 2.0053 486.3884 0.1265
　　由表比较可知 , 回流提取 2 h 和 5 h 所得熊果酸的含量均
较低 ,所以采用超声提取法提取肾茶中的熊果酸。此方法既
快速又可提取充分。
2.3.4　供试品溶液制备方法的确定　精密称取肾茶细粉
2 g ,置于具塞瓶中 ,精密加入提取溶剂氯仿 50 mL ,称定重量 ,
超声 30 min ,取出放冷 ,再称定重量 , 用氯仿补足减失的重量 ,
摇匀 ,滤过 , 取续滤液 40 m L ,将续滤液置于水浴上蒸干 ,残余
物用甲醇溶解并定容至 10 mL 容量瓶中 ,摇匀 , 用 0.45 μm 微
孔滤膜过滤 ,作为供试品溶液。
2.4　标准曲线的制备　分别精确吸取熊果酸对照品溶液 2、
4、6、8、10 、12 μL , 按照上述色谱条件测定。 以峰面积为纵坐
标(Y), 以进样量为横坐标(X), 进行线性回归 , 得回归方程为
y=469.001676x+0.0690635(r=0.99999),结果表明 , 熊果酸
在 1～ 6μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5　精密度考察　精密吸取对照品溶液 6 μL , 重复进样 5
次 ,依法测定峰面积 , 并计算其相对标准偏差(RSD%)为
0.5%, 表明仪器具有良好的精密度。
2.6　稳定性试验　精确吸取供试品溶液 6μL , 依上述色谱条
件 ,分别于 0 、1 、2、3 、4h 测定峰面积 ,并计算其相对标准偏差
(RSD%)为 0.54%, 表明供试品溶液在 4 h 内基本稳定。
2.7　样品含量测定　供试品用氯仿为提取溶剂 ,超声提取 30
min ,按上述方法制备。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶
液各 5 μL ,进样 ,记录熊果酸色谱峰面积 , 按照外标法以峰面
积计算含量。结果见表 4。
表 4　样品含量测定
肾茶药材量
(g)
样品峰
面积
对照品峰
面积
含量
(%)
平均含量
(%)
2.0050 851.5880 0.22
2.0030 754.3000 1198.1000 0.20 0.21
2.0043 843.4762 0.22
2.8　加样回收率试验　精确称取熊果酸已知含量的同一批
药材 5 份 , 分别加入 4 mL 的熊果酸对照品溶液(0.5 mg/
mL), 按照供试品溶液的制备方法制备并测定 ,结果见表 5。
表 5　熊果酸加样回收率试验结果
样品含量
(mg)
加入量
(m g)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
2.1322 2.000 4.1272 99.75
2.1352 2.000 4.1016 98.32
2.1930 2.000 4.1550 98.10 98.76 1.18
2.1331 2.000 4.0815 97.42
2.0842 2.000 4.0882 100.20
3　小结与讨论
本课题采用高效液相色谱法测定肾茶中主要药效成分熊
果酸的含量 ,具有操作简便 ,结果准确可靠 , 重现性好的优点。
目前以肾茶开发的中药制剂已有肾茶袋泡茶 , 肾衰宁等。
552010 年第 31 卷第 7 期　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂志
　　　　
该课题为完善肾茶的质量标准奠定了基础 , 并为进一步研究
肾茶的其他制剂提供了含量测定的依据。
本研究选择了 3 种流动相:(1)甲醇-水(80∶20),(2)甲
醇-水-磷酸(85∶15∶0.2),(3)乙腈-0.1%磷酸(78∶22)。
结果表明 , 用前两种流动相基线易漂移 ,峰出现拖尾现象 , 且
分离度不好 ,故采用第 3 种流动相。
参考文献:
[ 1]赵爱华.肾茶的化学成分[ J] .云南植物研究 , 2004 , 26(5):563.
[ 2]林艳芳.中国傣医药彩色图谱[ M ] .昆明:云南民族出版社 ,
2003:408.
[ 3] 李月婷.肾茶的研究进展[ J] .中国中西医结合杂志 , 2002 ,
22(6):470.
[ 4] 张继华.RP-HP LC法测定肾茶药材中迷迭香酸的含量[ J] .中药
新药与临床药理 , 2006 , 17(1):43.
[ 5] 高增平.不同产地猫须草化学成分预试及熊果酸含量对比[ J] .北
京中医药大学学报 , 1999 , 22(5):78.
[ 6] 麻秀萍.HPLC 测定马鞭草中熊果酸的含量[ J] .中成药 , 2005 ,
27(1):88.
(收稿日期:2010-03-03)
羊藿三七片质量标准研究
李　娟 , 郭英球
(湖南医药工业研究所 , 湖南 长沙 410014)
　　摘　要:目的:建立羊藿三七片的质量标准。方法:采用
TLC 法对羊藿三七片中三七药材进行定性鉴别;采用 HPLC
法对方中淫羊藿中主要成分淫羊藿苷进行了定量分析。色谱
柱为 C18柱(200 mm×4.6 mm , 5 um), 流动相为乙腈-0.1%
磷酸溶液(27:73),流速 1.0 mL/ min , 检测波长为 270 nm , 柱
温为室温。结果:定性鉴别明显清晰 , 阴性对照无干扰;淫羊
藿苷对照品在 0.2002 ～ 1.8018 μg 范围内 , 进样量(μg)与峰
面积积分值呈良好线性关系 , 平均加样回收率为 98.97%,
RSD=0.51%(n=6)。 结论:该方法简便可行 , 结果准确可
靠 ,重现性好 , 可作为本产品的质量控制方法。
关键词:羊藿三七片;质量标准;TLC;HPLC;淫羊藿苷
文献标识码 A 中图分类号:R284.1
文章编号:1007-2349(2010)07-0056-03
羊藿三七片由淫羊藿 、三七等药材组成 , 具有温阳通脉 ,
化瘀止痛的功效。主要用于阳虚血瘀所致的胸痹 , 症见胸痛 ,
胸闷 ,心悸 , 乏力 ,气短等;冠心病 , 心绞痛属上述证候者。淫
羊藿 系小 檗科 植 物心 叶淫 羊藿 , 淫羊 藿(Epimedium
brevico rnum Max im.)、箭叶淫羊藿(Epimedium sag ittatum
(Sieb.et Zucc.)Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pube scens
Maxim.)、巫山淫羊藿(Epimedium w ushanense T.S.Ying)、
或朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥地上部分。
夏 、秋季茎叶茂盛时采割 , 除去粗梗及杂质 , 晒干或阴干;辛 、
甘 ,温。归肝 、肾经;主要功效为补肾阳 , 强筋骨 , 祛风湿。用
于阳痿遗精 ,筋骨痿软 , 风湿痹痛 , 麻木拘挛;更年期高血压。
三七系五加科植物三七 Panax no tog inseng(Burk.)F.H.Chen
的根[ 1] ;性温 , 味甘 、微苦;归肝 、胃经 , 主要功效为散瘀止血 ,
消肿定痛。用于各种内 、外出血 ,胸腹刺痛 , 跌扑肿痛 。为了
能更加有效控制羊藿三七片的质量 , 笔者对三七进行了薄层
定性研究[ 1 ～ 3] , 采用 HPLC 法对方中淫羊藿的主要成分淫羊
藿苷进行了含量测定[ 4～ 6] 。
1　仪器与试药
1.1　仪器　仪器 LC-1OA 高效液相色谱仪(日本岛津公
司);SPD-10A紫外检测器(日本岛津公司), HW-2000 色谱
工作站(上海千谱软件有限公司), AE240 型电子分析天平
(M ETTLER)。
1.2　试药　淫羊藿苷对照品(110737 -200414)、人参皂苷
Rg 1 对照品(110703 -200424)、三七对照药材(120941 -
200506)均购自中国药品生物制品检定所;薄层层析用硅胶 G
(青岛海洋化工厂);乙腈(色谱纯);水为重蒸馏水;其余化学
试剂均为分析纯;羊藿三七片(自制 , 批号 20070901)。
2　三七的薄层鉴别
取本品 5 片 , 除去薄膜衣 , 研细 , 加甲醇 30 m L , 加热回
流 2 h ,放冷 , 滤过 , 滤液蒸干 , 残渣加水 20 mL 使溶解 , 用
乙醚30 mL , 振摇提取 , 弃去乙醚液 , 水液用水饱和的正丁
醇振摇提取 3 次 , 每次 20 mL , 合并正丁醇液 , 用氨试液洗
涤 2 次 , 每次20 mL , 弃去氨液 , 再用正丁醇饱和的水 15 mL
洗涤 , 取正丁醇液蒸干 ,残渣加甲醇 1 mL 使溶解 ,作为供试
品溶液。另取三七对照药材 1 g , 同法制成对照药材溶液。
再取人参皂苷 Rg1 对照品 , 加甲醇制成每 1 mL 含 1 mg 的
混合溶液 ,作为对照品溶液。 再取除三七外的其他处方量
药材 , 按制备工艺制成缺三七的阴性样品 , 同法制成阴性样
品溶液。照薄层色谱法(中国药典 2005 年版一部附录 Ⅵ
B)试验 , 吸取供试品溶液 、三七阴性样品溶液 、对照药材溶
液及对照品溶液各 5 μL , 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 ,
以氯仿—甲醇—正丁醇—水(2∶1∶4∶2)的下层溶液为展开
56 云 南 中 医 中 药 杂 志　　　　　　　　　　2010 年第 31 卷第 7 期
Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica
Vol.31.N o.7 (General No.205) July , 2010
Main Content
Clinical Effect of Prescription for Invigorating Spleen to Reduce Sugar on the Insulin Resistance of Type 2 Diabetes Patients
　　 LUO Yu-yun , DING Ping , WU Xiao-qiu , et al⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Clinical Effect on the Treatment of 80 Nephritic Syndrome Patients with the Integration of Traditional Chinese andWesternMedicine
　　 ZHANG Qin-hai , HUANG Jin-feng⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Determination of Acid Content in Clerodendranthus Spicatus(Thunb.)C.Y.Wu　　 KANG Shao-jian , HO U An-guo , SHENG Yan⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Study on the Quality Standard of Yanghuo Sanqi Tablets
　　 LI Juan , G UO Ying-qiu⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Clinical Effect of Prescription for Invigorating Spleen to Reduce Sugar on the Insulin Resistance of Type 2 Diabetes Patients
LUO Yu-yun , DING Ping , WU Xiao-qiu , et al
(Department of Endocrinology , Zhuhai H ospi tal of T radit ional Ch inese Medicine , Zhuhai , Guangdong 519015)
Abstract:Objective:To observe the clinical ef fect of prescript ion for invigo rat ing spleen to reduce sugar on the insu lin resis tance of type 2
diabetes patients.Methods:80 patients w ere random ly divided in to a treatment group and a control group , 40 patients per group.The pat ients in
the treatmen t group were treated w ith metformin hcl and the prescript ion for invigorat ing sp leen to reduce sugar while the patien ts in the control
group were sim ply treated w ith metformin hcl.Three mon th s was a cou rse of t reatmen t.FPG , 2hBG , FINS , HbAlc , lipid and HOMA-I R were
determined befo re and after the treatmen t.Results:The comparison of the indicato rs before and af ter the treatment showed a signi ficance dif ference
(P<0.01).T he indicato rs of the treatment group were m ore ideal(P<0.05).Conclusion:The prescrip tion for invigo rat ing sp leen to reduce sugar
has a definitely clinical ef fect on the treatment of the type 2 diabetes patients and can improve their HOMA-IR and lower the insulin resis tance.
Key words:type 2 diabetes;in sulin resistance;t radi tional Chinese m edicine;prescript ion fo r invigorating spleen to reduce sugar
Clinical Effect on the Treatment of 80 Nephritic Syndrome Patients with the Integration of Traditional Chinese andWesternMedicine
ZHANG Qin-hai , HUANG Jin-feng
(Department of In ternal M edicine , T radit ional Chinese H ospital of Deqing County , Deqing , Guangdong , 526600)
Abstract:Object ive:To observe the clinical effect on the treatment of nephrit ic sy ndrome pat ients w ith the integrat ion of t radit ional Chinese and
Western medicine.Methods:80 pat ien ts in the treatm en t group were treated w ith the decoction of reinforcing kidney besides conventional Western
medicine and in travenous dripping injection of ligu strazine hydroch loride while 80 pat ien ts in the control group were on ly given the treatment of the
conven tional Western medicine and intravenous d ripping inject ion of ligus trazine hyd rochloride.Three months was a cou rse.Results:28 cases in the
treatm ent showed comp lete remission(CR), 30 essent ial remission , 18 effective , 4 no effective , with 95% of total ef fect ive rate while 14 cases in
the control group showed complete remission(CR), 22 essential remission , 24 ef fect ive , 20 no ef fective , w ith 75% of total ef fective rate.The
comparison of the tw o groups showed a signif icance dif ference(P<0.05).Conclusion:The in tegration of traditional Chinese and Western medicine
can delay the p rog ress of the kidney disease synd rome and improve the clinic symptom of the pat ients.
Key words:in tegration of t radi tional Chinese and Western medicine;k idney disease synd rome;decoction of reinforcing kidney;ligu strazine
Determination of Acid Content in Clerodendranthus Spicatus(Thunb.)C.Y.Wu
K ANG Shao-jian , HOU A n-guo , SHENG Yan
(Yunnan Ins ti tu te of Food and Drug In spection , Kunming , Yunnan , 650011)
Abstract:Objective:To es tablish an effective method for the determination of the acid con tent in C lerodendranthus spicatus by HPLC and
select the extraction and determinat ion condit ions for the most app rop riate method.Methods:RP-HPLC was used to determine the acid content in
C lerodendranthus spicatus , w ith the mobile phase acetonit rile-0.1%phosphoric acid(78∶22), Eclipse XDB-C18 column (150mm×4.6 mm ,
5μm), the UV detect ion wavelength at 210 nm , th e flow rate 1.0 m l/min and the column temperature 35.Results:The determined acid showed a
good linear relation ship with the peak area at the range of 1-6μg , w ith the regression equation , y=469.001676X+0.0690635 , r=0.99999, and
98.7% of average recovery , RSD=1.18 %.Conclusion:The method is simple , quick , accurate and reliable and can be used to determine the acid
conten t in Clerodendranthus spicatu s.Key words:Clerodendranthus spicatus;acid;content determination
Study on the Quality Standard of Yanghuo Sanqi Tablets
LI Juan , GUO Ying-qiu
(Hunan Inst itute of Pharmaceu tical Industry , Changsha , Hunan , 410014)
Abstract:Objective:To establish a quality s tandard to control the quali ty of Yanghuo Sanqi T ablets.Method:Radix Notoginseng were
ident if ied by T LC.Icrai in content w as determined by HPLC.The column was C18(200 mm×4.6 mm , 5 um), with the mobile phase , acetonit rile
-0.1% phosphoric acid solu tion (27:73), the f low rate , 1.0 mL/min , the detect ion wavelength 270nm and room temperature.Resul ts:The
quali tat ive iden tif ication was dist inct and clear , positive with no interference.The control Icraiin content showed a good liner relation ship with the
sample size and the peak area at the range of 0.2002μg-1.8018μg , and 98.97% of average recovery , RSD = 0.51%(n=6).Conclu sion:The
method is simp le , reliable , accurate and can be used as the quant ity control method for Yanghuo Sanqi T ablets.
Key words:Yanghuo Sanqi Tab lets;quality standard;TLC;HP LC;icraiin