全 文 ：北方药学 2014年第 11卷第 12期
蒙药肋柱花化学成分的研究△
叶日贵 白梅荣 包明兰 拉喜那木吉拉 巴根那 *（内蒙古民族大学蒙医药学院 通辽 028000）
摘要：目的：通过采用液质联用技术，对蒙药肋柱花的化学成分进行分析，为其药理作用更深一步的研究及临床用药提供科学依
据。方法：色谱分离采用 Venusil MP C18（4.6mm×300mm，5μm），流动相为 0.1%甲酸水溶液和甲醇，梯度洗脱，流速为 1.0ml/min；质
谱定性采用多级离子阱质谱，负离子模式扫描；紫外检测范围为 210～400nm。结果：在经过整理的液质联用条件下，经液相色谱/离
子阱质谱（LC/MSD Trap）检测出肋柱花中的 12个成分。经文献查阅，化合物 3、7、9、10、12为已知成分，其余均为首次从蒙药肋柱
花中检测到的成分。结论：通过液相色谱/离子阱质谱（LC/MSD Trap）联用技术，为分离和鉴定蒙药肋柱花中化学成分确立一种快
速、科学的分析方法。
关键词：肋柱花 LC/ MSD Trap 化学成分
中图分类号：R291.2 文献标识码：A 文章编号：1672-8351（2014）12-0020-02
肋柱花是蒙药中一味蒙医传统药材，蒙药名哈比日跟-地
格达，为龙胆科植物肋柱花 Lo-matogonium rotatum（L.）Fries ex
Nym.的干燥全草[1]，味苦，性寒、钝、糙、轻、燥，具有平息“协日”、
健胃、清热、愈伤的功效，用于治疗“协日”热、伤寒、流感、瘟疫、
中暑发热、肝胆热、黄疸、伤热、胃“协日”等[1]。
据报道，肋柱花中含有环烯醚萜类、口山酮类、呫吨酮类、黄酮
类及其苷类、三萜类及苷类、内酯类、有机酸及酚类化合物[2～5]。其
中环烯醚萜类具有抗氧化、保肝利胆、解痉、抗焦虑、抗脑缺血损
伤等生物活性[6]；口山酮类具有保肝利胆、强心利尿等生物活性[7]；
呫吨酮类具有保肝利胆、抗氧化、抗疟、抗结核、抗抑郁、抗心肌
缺血等药理活性[8]；黄酮类具有抗氧化、抗癌、抗肿瘤等活性 [9]；
三萜类具有抗氧化、保肝、抗肿瘤、抗癌等生理活性[10]；有机酸类
具有抗氧化、抗炎、抗血栓、抑制血小板聚集等药理作用[11]。虽然
关于肋柱花的报道少之又少，但其临床应用价值可见一斑。
本实验采用液相色谱/离子阱质谱（LC/MSD Trap）联用技
术，分离鉴定肋柱花化学成分，为肋柱花进一步研究及临床应用
提供一种快速、科学的分析方法。
1 仪器和材料
Agilent 1100 series LC-MSD 液质联用仪，包括：Agilent SL
型多级离子阱质谱仪，低压四元梯度泵，二级管阵列检测器
（DAD），自动进样，柱温箱，chemistation化学工作站等。肋柱花
自采。HPLC级甲醇（Tedia，USA）；HPLC级甲酸（Tedia，USA）；水
（娃哈哈纯净水）。
2 实验方法
2.1分析条件
2.1.1色谱条件：Venusil MP C18色谱柱（4.6mm×300mm，5μm），
流动相 A为 0.1%甲酸水溶液，流动相 B为甲醇；梯度洗脱（0～
10min，10% ～20% B；10 ～20min，20% ～40% B；20 ～40min，40% ～
60% B；40 ～60min，60% ～75% B；60 ～80min，75% ～85% B；80 ～
90min，85%～10%B）；柱温为 35℃，进样量为 30μl，流速 1.0ml/
min，检测波长为 237nm。
2.1.2质谱条件：ESI电离源；负离子模式检测；扫描范围 50～
800m/z；干燥气温度为 350℃；干燥气流量为 9.0L/min；雾化气压
强 35.0psi（1psi=6.895kpa）；毛细管电压：4kv。实验数据采用
Data Analysis软件处理。
2.2供试品溶液的制备：称取肋柱花药材 1kg之后粗略粉碎，逐
次加入 10、8、6倍量的水，加热提取，加热时间顺序为 1.5h、1h、
1h，合并 3份药液之后加热浓缩并烘干，即得浸膏。精密称取
0.25g肋柱花浸膏，置于 50ml锥形瓶中，吸取 25ml色谱甲醇加
入其中并密塞称定质量，超声提取 30min，待放冷之后称定质
量，再用色谱甲醇补足质量，摇匀，静放 1h。精密吸取上清液
2ml，倒入 10ml量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀。用 0.45μm微孔
滤膜滤过，即得供试品溶液。进行分析（条件：“2.1”项）。
2.3制作蒙药肋柱花的化学成分表格：查阅肋柱花的化学成分文
献，搜集了肋柱花化学成分 27个，包括环烯醚萜类、有机酸类、
黄酮类、三萜类、口山酮类、呫吨酮类化学成分，制作肋柱花已知化
学成分的表格，提供化合物的分子量、分子式、结构等信息。
3 结果与讨论
3.1提取溶剂择优：因主要针对临床应用，所以选择用水回流提
取肋柱花药材。
3.2试验条件整理：通过考察乙腈∶水和甲醇∶水两种体系，发现甲
醇和乙腈的效果几近相同，故选取甲醇作为有机相。通过对比
质谱检测方式，负离子模式下质谱响应更强、峰容量更大，故选
择 ESI（-）。
3.3所得结果分析：经液相分析，共检测得到 12个化学成分，其
中包括獐牙菜苦苷，木犀草素-7-0-葡萄糖苷 luteo lin-7-0-
glucoside、6′′-O-[（E）-cinnamoyl]gentiobiosylg enipin、斛皮素、
（1S，4As，6S，7As）-1，4a，5，6，7，7a -hexahydro -6 -hydroxy -7 -
methylene-1-（O-β-D-glucopylanosyl）-cyclopen ta[c]pyran-4-
carbaldehyde，其余均为未知化合物（见表 1、图 1）。
表 1 肋柱花化学成分的液质分析结果
4 结 论
经液相色谱/离子阱质谱（LC/MSD Trap）联用分析，通过数
据库匹配和二级质谱分析，对其中化学成分进行了分析，共分析
12个化合物，其中包括环烯醚萜类、黄酮类。本研究为蒙药肋柱
峰
号
RT
ESI-MS
MW 化合物名称
[M-H]- [M+HCOO]-
1 19.924 - 443 398 398
2 20.481 - 519 474 未知
3 21.659 - 419 374 獐牙菜苦苷
4 22.511 - 389 344 未知
5 24.040 - 483 438 未知
6 26.072 607 - 608 未知
7 27.548 447 493 448 木犀草素-7-0-葡萄糖苷 luteo lin-7-0-glucoside
8 32.799 445 431 446 未知
9 37.242 677 723 678 6′′-O-[（E）-cinnamoyl]gentiobiosylgenipin
10 60.195 301 - 302 槲皮素
11 64.070 - 349 304 未知
12 64.870 - 403 358
（1S，4As，6S，7As）-1，4a，5，6，7，7a -
hexahydro-6-hydroxy-7-methylene-
1-（O-β-D-glucopylanosyl）-cyclopen
ta[c]pyran-4-carbaldehyde
图 1 肋柱花总离子流图
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北方药学 2014年第 11卷第 12期
胆固醇（Cholesterol，CHS）是脂质体的成膜材料之一，由于
CHS结构中含仲醇结构和亲油性质，可与磷脂亲油部位相互镶
嵌发挥稳膜作用，修饰脂质体可防止泄露而起稳定作用 [1]从而
控制药物在组织内的释放。本实验合成路线是 CHS的 C-3 位
羟基活性基团与癸二酸乙烯酯（vinyl sebacate，VS）的酯基发生
酯交换反应，生成一种脂质体修饰物胆固醇-癸二酸单烯
（Cholesterol-vinyl sebacate，CHS-VS）。脂质体修饰物的甾醇类
酯化的传统合成方法是化学法[2]，但化学法合成存在选择性低、
步骤烦琐、副产物多、产物单一性差等弊端；如杨莉[3]等选用聚乙
二醇 2000 和胆固醇衍生物为起始原料经过成醚、酰化反应，最
后与胰岛素缩合得到目标产物，需要经多步反应。与其相比，酶
法具有区域选择性高、反应条件温和、简单可控、产物单一、环境
友好等优点 [4]。本实验过程发现两底物 CHS和 VS的投料比不
同，会影响到产物 CHS-VS的产率。为了提高 CHS转化率，有必
要优化酶促合成条件，通过 HPLC法测定 CHS含量变化，计算
CHS转化率，从而确定最佳的酶促合成条件。
1 仪器和材料
1.1仪器：Dionex高效液相色谱仪（美国戴安公司）；THZ－D台式
恒温振荡器（太仓市实验设备厂）；XW-80A微型漩涡混合仪（上
海沪西分析仪器厂）；BS110s型电子分析天平（德国 Sartorious
公司）。
1.2材料：乙酸乙烯酯（CP，阿拉丁公司），癸二酸（99%，阿拉丁公
司），VS（实验室自制，纯度＞95%），胆固醇（阿拉丁公司，质量分
数＞95%），Candida rugosa Lipase CRL（Sigma R），4 型分子筛（阿
拉丁 R）。甲醇为色谱纯，水为重蒸水，吡啶、丙酮、正己烷等试剂
均为分析纯（均已用分子筛脱水处理）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱为 Diamonsil C18色谱柱（4.6mm×250mm，
5μm），流动相为甲醇∶环己烷（90∶10，V/V），检测波长 215nm，流
速 1.0μl·min-1，进样量 10μl，柱温 35℃，理论板数按胆固醇色谱
峰计算不小于 3000。
2.2 酶促反应：称取 CHS 0.6g、VS 3.5g、异辛烷 60μl、CRL 酶粉
231mg，置于 250μl锥形瓶，气浴摇床，35℃，220rpm，定时取样，
检测 CHS的转化率。
2.3产物的定性分析及纯化：薄层色谱（TLC）定性分析：取 CHS
对照品溶液、反应产物 CHS-VS溶液及 VS溶液分别点于硅胶
花化学成分及进一步研究、临床应用及质量控制提供了依据。
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*通讯作者
△基金项目：国家自然科学基金项目（81360673）。
A
。
高效液相色谱法检测酶促反应中底物胆固醇△
陈 静 程 怡 * 郑品劲 罗利华 陈宇潮 仝一丹（广州中医药大学中药学院 广州 510006）
摘要：目的：建立酶促反应中底物胆固醇的高效液相色谱（HPLC）检测方法。方法：HPLC检测胆固醇含量的最佳色谱条件：Dia－
monsil C18（250mm×4.6mm，5μm）为固定相，甲醇∶环己烷（90∶10）为流动相，检测波长为 215nm，流速为 1.0μl·min-1，柱温为 35°C。结
果：胆固醇峰呈尖峰，分离较好，理论塔板数为 12545；在 0.5～10mg·L-1范围内线性关系良好（A=19.136C-1.2707，r=0.9990）；平均加
样回收率为 104%，RSD为 1.5%（n=6）。结论：该方法专属性强，重复性良好，适合初步用于酶促反应体系中底物胆固醇的含量测
定，以胆固醇减少量反映转化率。
关键词：高效液相色谱法 酶促反应 胆固醇
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1672-8351（2014）12-0021-02
Determination of Cholesterol as a substrate in enzymatic reaction by HPLC
Chen Jing Cheng Yi* Zheng Pinjing Luo Lihua Chen Yuchao Tong Yidan（College of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou
University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）
Abstract：Objective：To establish a method for the determination of Cholesterol（CHS）as a substrate in the enzymatic reaction by High
Performance Liquid Chromatography（HPLC）. Methods：HPLC method was used to determine the content of CHS，the optimal HPLC
conditions were as follows：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）column as the stationary phase，Methanol-Cyclohexane（90：10）as the
mobile phase，1.0μl·min-1 of flow-rate，35°C of column temperature，the wavelength of UV detector（215nm）. Results：CHS was well
resolved（the number of theoretical plates was 12545）. The calibration curve was in good linearity over the rang of 0.5～10mg·L-1 for
CHS. The equation was （A=19.136C-1.2707，（r=0.9990））. The average recovery of CHS was 104%（RSD=1.5%，n=6）. Conclusion：The
method is sensitive and good repeatability，and it could be used for the determination of CHS which depends on its decrement to reflex
the conversion rate.
Keywords:HPLC Enzymic reaction Cholesterol
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