全 文 ：第2 6卷第 6期
2 0 08年 1 1月
佛山科学技术学院学报 (自然科学版)
J o u r n a l o f Fo s ha n U n i v e r s i ty (N a t u r a l S e i e n e e Ed i ti o n)
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2 0 08
文章编号 :l () 08一 。 1 1 7(2 0 08) 0 6一 () ) (1 3一 03
高效液相色谱法测定凉粉草中熊果酸的含量
刘碧容
(佛山科学技术学院 党委组织部. 广东 佛山5 2 8 0) 0
摘要 :试验建立了高效液相色谱法测定凉粉草熊果酸含量的方法 。 采用 C1 8柱 , 流动相为甲醉 . 流速为 1 m L ·
m in
一 ` . 检测波长为 21 0 n m 。 进样浓度在 。 . 003 2~ 0 . 032 m g · m L 一 ’范围内线性关系良好 . 平均回收率为 91 .
9 叭 。 试验结果显示 . 凉粉草中含有熊果酸 . 并测得不同样品的熊果酸含量 3 . 9 1 1~ 3 . 9 15 m g · g 一 ’之间 .
关键词 :凉粉草 ;熊果酸 ; 高效液相色谱法
中圈分类号 : 5 5 67 . 2 19 文献标识码 : A
凉粉草 (胁 s (,n “ 。 h i。 , .vi , B e, 材 h) 为唇形科凉粉草属植物 , 属一年生草本宿根植物 ,一年种植可多年
受益 , 是一种重要的药食两用的东方植物资源匡 。 熊果酸 (盯 so h 。 a ic d , U A ) ,又名乌索酸 ,乌苏酸 , 熊
果酸具有镇静 、 抗炎 、 增强机体免疫力 、 抗菌 、 美白 、抗癌 、 抗糖尿病 、抗溃疡 、 降低血搪等多种生物学效
应川 。 现今熊果酸提取的来源主要有白花蛇舌草 、 车前草 、苦丁茶老叶 、 山茱英等等 。 凉粉草熊果酸的提
取与测定是一个崭新的课题 .至今还没有相关课题的文献记录 。 我国凉粉草资源非常丰富 , 如果凉粉草
中的熊果酸 含量较高 , 则可以 成为一种新的提取原料 , 减低生产成本 . 为熊果酸的开发提供了丰富的药
材资源 . 有广泛的应用前景 。 本试验的 目的主要是用高效液相色谱法鉴定凉粉草中是否含有熊果酸 ,并
测定其含量 。
材料和方法
1
.
1 材料
主要仪器 , B F R I , H PI .C P u m p S Y 一 8 2 0 0 型液相色谱仪 (北京分析仪器检测瑞利集团生产 ) ; 主要药
品 , 甲醇 、 乙睛 (均为色谱纯 ) ,样品提取液 、 陈凉粉草为产 自广东大埔大东存放 1 年 。
L Z 实验方法
1
.
2
.
1 高效液相色谱法
色谱柱 : D I K M 八 钻石 一C 18 ;流动相 : 甲醇 ; 流速 : 1 m I J · m in 一 ` ;检测波长 : 21 0 n m ; 柱温 : 25 OC ; 进样
量 : 20 川沙 。
1
.
2
.
2 凉粉草熊果酸的提取
精密称取陈凉粉草全草样品 1 0 , 0 9 , 置索氏提取器中 . 加 60 m I J 氯仿提取 s h , 样品挥干溶剂 , 加
6 0 m I
J 甲醇提取 10 h , 浓缩至小体积 , 置 2 5 m I J 容量瓶中 , 甲醇稀释至刻度 。
1
.
2
.
3 凉粉草熊果酸的定性分析
在相同的色谱条件下对标准品及样品进行检测 , 得到标准品与样品的图谱 , 进行分析 。
1
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2
.
4 高效液相色谱法测定凉粉草中熊果酸的含量
在相同的色谱条件下对标准品及样品进行检测 . 测定峰面积 , 绘制标准曲线 ,计算 回归方程 。 从而计
收稿 日期 : 2 ( ) ( )8 一 1 0一 1 2
作者简介 :刘碧容 ( 19 7-2 ) . 女 . 广东梅州人 , 佛山科学技术学院助理研究 员 。
1 佛山科学技术学院学报 (自然科学版 ) 第 26 卷
算出样品的含量 。
2 结果与分析
2
.
1 定性分析结果
从图 1、 2可见 ,样品凉粉草水提液乙酸乙酷萃取物的出峰位置与对照品相当吻合 , 表明样品中含有
与标准品相同的物质一熊果酸 。
2 () ( )
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( a )对照品
2
.
7 4
.
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.
3
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n l g
·
n , L
’
)
( b )样品
3
.
7 8
.
0
图 l 对照品与样品的 H L P C 图谱
2
.
2 定盆分析结果
2
.
2
.
1 线性关系考察
精密称取熊果酸标准品 生. o m g , 置 2 5 m I J 容
量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 即配成储备液 。
精密吸取上述储备液各 0 . 2 、 0 . 4 、 〕 . 8 、 1 . 2 、 1 . 6 、
2
.
0 m I
J , 分别置于 10 m I J 量瓶中 , 加甲醇至刻度 ,
混匀 。 分别进样 l() 可 J , 测定峰面积 . 绘制标准曲
线 . 进样在 0 . 0 0 3 2 ~ 0 . O3 2 n 、 g · n l l , `之间线性关
系良好 , 如 图 2 所示 。 计算回 归方程 如下 : Y -
8 0 6
.
6 l X 一 () . 5 1 7 3 . R 2一 0 . 9 9 8 。 式 中 . Y 为峰面积 ,
X 为样品体积比浓度 。
2
.
2
.
2 稳定性试验
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7 () 0 (〕0 0
6 0 ( ) 0 0 0
5 0 ( ) () 0 0
4 0 ( ) ( )0 0
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进样浓度 p厂( n 、 g · n 、 L : )
圈 2 熊果酸标准曲线图
精密吸取熊果酸权;准品储备液及凉粉草全草提取液各 1 份 . 分别在放置 。 、 1 、 2 、 4 、 6 h 时 , 依法操
作 , 取 1。 :lI 进样 ,测定熊果酸标准品和凉粉草全草提取液的峰面积 , 计算得 R S D = 。 . 3终以 内 , 结果 见
表 1 。 结果表明进样量在 0 . 32 一 3 . 2 “ g 仪器情密度良好 。
表 1 稳定性试验数据表
样品 (l h l h Z h 4 h 6 h 平均值 R S D 值 「
对照品 毛1 3 8 7 5 2 9 4 1 2苏7 9 3 6 7 8 5 9 10 五4 3 9 3 8 7 4 9
9 3 9 了5 8 9 4 〔、 9 8 1 9 3 9 污了8 9 3 6 5 姜平 9 4 3 9 8 丁 9 3 , 3 6 3 . 5 ( }. 3
9 3 2 6 7 9 9 3 9 s l
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9 3凡 9 8 7 9 4 4 6 3 5 g L( ) 3 9 8
提取液 8 4 1 5 6 3
8 4 3 7 7 1
8 4 ( ) 3 5 6
8 11 6卜 5
8 4 2 4 3 5
8 4 (、 三丁8
8 4 0
8 3 9
8 3 8
8 4 1 7 8 4
8 3 8 8 4了
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8 3 9 3 5 6
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8 4 1 3 5 2
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2
.
2
.
3 回收率试验
精密称取 1() g 已知熊果酸含量的凉粉草全草样品共 5 份 . 分别置索氏提取器中 , 加 6 0 m l 矛 氯仿提
取 8 h .祥品挥干溶剂 , 分别加人适量熊果酸对照品储备液 . 加 的 m I J 甲醇提取 l o h , 浓缩至小 体积 . 置
2 5 m l
矛量瓶 中 , 甲醇稀 释至刻度 。 分别进样 功 川 J ,测定峰面积 , 结果 平均 回收率 为 91 . ,`少, , R S D 为
第 6期 刘碧容 :高效液相色谱法测 定凉粉草中熊果酸的含量
4
.
2%
。 结果见表 2。 结果表明熊果酸能得到 良好的回收 , 上述分析条件能满足试验要求 , 方法稳定 , 试验
结果可靠 。
表 2 回收率试验数据表
编号 取样量 / g 原有量 /拜 g 加入量 /拜g 测得量 l/堪 回收率 / 9石 平均回收率 / % R S D / %
0éOC门0On八曰夕目9-]9曰9一1 . 0 9 4
1
.
1 3 6
1
.
23 4
1
.
0 7 7
1
.
23 6
2 2 9
.
6
2 2 8
.
1
2 4 0
.
9
2 2 1
.
3
2 3 7
.
8
3 9 9
.
7
4 1 5
.
6
4 28
.
2
4 0 9
.
9
4 2 2
.
9
8 5
.
1
9 3
.
8
9 3
.
7
9 4
.
3
9 2
.
6
9 1
.
9
2
.
2
.
4 凉粉草全草样品制备和测定
精密称取产 自广东大埔县大东存放 l 年的陈凉粉草全草样品 10 9 , 置索氏提取器中 , 加 60 m I J 氯
仿提取 s h ,样品挥干溶剂 ,加 60 m l , 甲醇提取 10 h , 浓缩至小体积 , 置 10 o m I J 容量瓶中 , 甲醇稀释至刻
度 。 按上述色谱条件测定 ,进样 10 川 , , 测定每个组分峰面积 , 计算凉粉草全草样品中熊果酸的含量 ,通
过 回归方程计算结果 , 提取液中熊果酸 含量为 0 . 0 39 1 m g · m I J 一 ’ , 凉粉草 全草样品中熊果酸含量为
3
.
9 14 m g
·
g
一 ` 。 以同样的方法测定产 自广东大埔县大东和百侯两地当年的新鲜干草样品中熊果酸 含
量分别为 3 . 9 1 5 m g · g 一 ’ 和 3 . 9 1 1 m g / g ’ 。
3 讨论
( l) 本试验使用了高效液相色谱法进行熊果酸的定性分析 ,结果表明 , 凉粉草含有熊果酸 。并测定凉
粉草全草不同样品中熊果酸含量 为 3 . g n 一 3 . 91 5 m g · g 一 ’之 间 , 熊果酸与样品的含量分数为 0 . 0 39
n % ~ 0
.
03 9 15 %
。 高于山茱英熊果酸的含量分数 0 . 01 4 3% 一 。 . 0 27 生% 比 , 白花蛇舌草的熊果酸的含
量分数 0 . 03 5 4%民 ,可见 ,凉粉草可以 成为熊果酸新的提取原料 。
( 2) 本试验采用 H L P C 法作为熊果酸定量分析的检测手段 ,具有快速 、 高效和操作方便 , 并有较高
的准确度与精确度等优点 ,可以推广应用 。
参考文献 :
[ 1 ] 赵建华 . 仙人草栽培前景好 [ J口. 科学种养 , 2 0 0 8 ( 5) : 2 .
[ 2二 赵玉丛 , 李建军 . 刘国际 . 等 . 山茱英中熊果酸的提取 及含量测定 [ J〕. 郑州大学学报 : 理学版 . 2。。 5 ( 3 ) : 了8 一 81 .
[ 3」 任秀莲 . 苦丁茶中熊果酸的提取工艺〔J ] . 中南大学学报 : 自然科学版 , 2。。 4 ( 2 ) : 7() 一汉 .
〔4 」 谢艳 . 林圣云 . 任其龙 . 白花蛇舌草中齐墩果酸 和熊果酸的 H L P C 测定 [ J ] . 中国医药工业杂志 . 2 0() 6 . 3 7 ( 8 ) : 5 5 9 -
5 6 0
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【责任编辑 : 邓军文】
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