全 文 ：收稿日期:2011 － 06 － 10
狗肝菜多糖对肝纤维化大鼠肝
组织 VEGF表达的影响
李志超1，曹庆生2
(1. 唐山市玉田县中医医院风湿科，河北玉田 064100;2. 唐山市玉田县医院病理科，河北玉田 064100)
摘要:目的:研究中药狗肝菜多糖对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠肝组织中 VEGF 蛋白表达的影响。方法:用二
甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型，不同浓度狗肝菜多糖干预后，取肝脏常规制片并 HE染色，观察各组大鼠肝组织病理
学改变，免疫组织化学方法检测各组大鼠肝组织 VEGF 蛋白表达的情况。结果:狗肝菜多糖高、中剂量组中大鼠肝组织
VEGF蛋白表达较模型组明显降低(P ＜ 0. 05)。结论:狗肝菜多糖具有显著的抗肝纤维化作用，其机制可能通过降低
VEGF蛋白的表达而调控细胞外基质的代谢有关。
关键词:狗肝菜;肝纤维化;免疫组织化学;VEGF
Doi:10. 3969 / j. issn. 1002 － 1108. 2012. 04. 110
中图分类号:R965. 1 文献标识码:B 文章编号:1002 － 1108(2012)04 － 0192 － 02
狗肝菜是爵床科华九头狮子草属，全草味甘、微苦、性
寒，归心、肝、肺经，具有清热、凉血、利湿、解毒、生津、利尿
等功效，临床常用于治疗感冒发热、热病发斑、暑热烦渴、
吐衄血、便血、尿血、崩漏、肺热咳嗽、咽喉肿痛、肝热目赤、
眼结膜炎、小儿惊风、小便淋沥、带下、带状疱疹、痈肿疔
疖、蛇犬咬伤等证，主要含有多糖、有机酸、氨基酸等物
质［1，2］。多糖类中药作为具有抗氧化及免疫调节作用，有
抗肝炎及肝损伤作用［3］。肝纤维化中，一般有血管内皮生
长因子(vascular endothelia growth factor，VEGF)的增加，狗
肝菜多糖在肝纤维化的治疗中对 VEGF 蛋白表达的影响，
国内外未见文献报道。本文利用二甲基亚硝胺诱导大鼠
肝纤维化模型，不同浓度狗肝菜多糖干预后，常规取材、脱
水、包埋，运用免疫组织化学方法检测肝纤维化大鼠肝组
织 VEGF蛋白表达情况，来评价狗肝菜多糖在肝纤维化的
治疗中对 VEGF蛋白表达的影响。
1 材料
1. 1 动物与试剂 SPF级 SD大鼠 72 只，体重 180 ～ 220g，
雄性，由桂林医学院 SPF 实验动物中心提供(许可证号
SCXK2007 － 0001)。并于实验中心内饲养，饲料由桂林医
学院 SPF实验动物中心提供。狗肝菜多糖由桂林医学院
药学院天然药化室张可锋老师提供;兔抗鼠 VEGF 多克隆
抗体(1:100 稀释) ，兔 SPkit 及 DAB 均购于武汉博士德有
限公司;二甲基亚硝胺(DMN，纯度 99%) ，购于天津市化学
试剂研究所;秋水仙碱粉剂，serva公司产品。
1. 2 方法
1. 2. 1 二甲基亚硝胺致大鼠肝纤维化模型的建立及药物
处理 选取 72 只健康雄性 SD大鼠，体重 180 ～ 220g，适应
性喂养 2d，每组 12 只，随机分为正常对照组、模型组(阳性
对照组)、秋水仙碱组，狗肝菜多糖高剂量组、狗肝菜中剂
量组、狗肝菜低剂量组。模型复制:每只动物按 2ml. kg －1
剂量，腹腔注射 0. 5%二甲基亚硝胺，连续注射三天，停药
四天，造模时间为四周，共注射 12 次。第一周剂量为常规
剂量的 2 /3。正常对照组注射等量生理盐水。各组均为普
通饮食并自由进水。药物处理:秋水仙碱组剂量为
0. 1mg. kg －1，狗 肝 菜 多 糖 高、中、低 剂 量 组 分 别 为
300mg. kg －1、200mg. kg －1、100mg. kg －1，除空白对照组和模
型组给予等体积生理盐水外，各组均灌胃给药，1 次 /d，连
续 4 周。
1. 2. 2 标本采集及免疫组织化学方法 采用颈椎脱臼
法处死大鼠后，快速取出肝脏，取肝左叶相同部位组织于
10%中性缓冲福尔马林溶液中固定 16 h，常规取材、脱水、
包埋，免疫组化按试剂说明书进行操作，采用 Sp 法、DAB
显色、苏木精复染，中性树胶封固。每次实验均以已知免
疫组化染色的阳性切片作阳性对照，以 PBS 代替一抗作阴
性对照。
1. 2. 3 结果判定 VEGF 以胞质出现棕黄色颗粒为阳性
细胞。先按染色强度打分:0 分为无色，1 分为浅黄色，2 分
为棕黄色，3 分为棕褐色;再按阳性细胞所占百分比打分:0
分为阴性，1 分为 ＜ 10%，2 分为 11% ～ 50%，3 分为 51%
～75%，4 分为 ＞ 75%。总分 0 ～ 1 分(－) ，2 ～ 3 分(+) ，4
～ 5 分(+ +) ，6 ～ 7 分(+ + +)。
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第 34 卷 第 4 期
2012 年 7 月
贵阳中医学院学报
JGCTCM
No. 4 Vol. 34
July 2012
2 统计学分析
用 SPSS17. 0 统计软件，参照刘军祥，苏红卫的方法，用
SPSS对等级资料进行 Ridit分析［4］。检验水准 α = 0. 05。
3 结果
2. 1 VEGF 在正常组中表达着色浅，范围窄;模型组细胞棕
褐颗粒状，范围较广;狗肝菜多糖高、中剂量组、秋水仙碱
组 VEGF表达着色浅，范围窄;与正常组比较，模型组
VEGF蛋白表达明显升高(P ＜ 0. 05) ;与模型组比较，狗肝
菜多糖高、中剂量组、秋水仙碱组 VEGF蛋白表达明显降低
(P ＜ 0. 05) ;狗肝菜多糖高、中剂量组与秋水仙碱组比较，
无统计学意义(P ＞ 0. 05) ，见(表 1)。
表 1 狗肝菜多糖对肝纤维化大鼠肝组织 VEGF表达的影响
分组 大鼠数
VEGF
－ + + + + + +
正常组 12 11 1 0 0
模型组a 10 0 2 6 2
秋水仙碱组a b 11 2 7 2 0
狗肝菜多糖高剂量组a b 11 3 6 2 0
狗肝菜多糖中剂量组a b 10 2 6 2 0
狗肝菜多糖低剂量组a 10 0 4 5 1
注:与正常组比较，a P ＜ 0. 05，各用药组与模型组比较，b P ＜ 0. 05.
4 讨论
肝纤维化时，在肝组织缺氧、细胞因子等因素的刺激
下，引起缺氧诱导因子 α 表达上调，后者又促进了下游基
因 VEGF的转录，VEGF表达增加使血管生成增加，而血管
生成是纤维间隔形成的重要病理过程，同时，大量纤维组
织增生需要新生血管提供营养支持，因此，VEGF 表达增
加，促进了肝纤维化的发展［5］。
新近，张可锋等［6］研究发现:狗肝菜水部位和正丁醇
部位组的不同剂量组均可明显抑制小鼠血清中 ALT，AST
的升高，且其作用与阳性对照药相比差异无显著性，因此，
初步判断狗肝菜水部位和正丁醇部位组具有保肝降酶的
作用。狗肝菜水部位和正丁醇部位组均能显著降低 MDA
含量、提高 SOD活性，说明狗肝菜保肝作用可能与提高肝
细胞抗氧化能力、抗膜脂质过氧化有关。张小玲等［7］研究
发现，狗肝菜多糖可使 D － GalN 所致大鼠肝损伤模型
ALT、AST水平下降;大鼠肝脏病变明显减轻，用高、中、低
剂量的狗肝菜多糖处理后，大鼠肝组织细胞水肿及脂肪变
性均较模型组明显减少，其中以狗肝菜多糖高剂量组的作
用最明显，效果与联苯双酯治疗组相当，说明狗肝菜多糖
对 D － GalN所致肝损害有一定的保护作用，且其作用效应
与应用剂量有关。因此，此研究旨在观察狗肝菜多糖对肝
纤维化大鼠肝组织 VEGF 蛋白表达的影响，探讨狗肝菜抗
肝纤维化的机制。
研究用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型，此模型
与人类肝病病理改变相似，可作为筛选抗肝纤维化药物的
方便模型，适用于进行性研究、不同细胞外基质产生部位
的研究和肝纤维化血清标志物的可靠性的评价［8］。此次
实验病理形态学证实了狗肝菜多糖具有抗二甲基亚硝胺
诱导的大鼠肝纤维化的作用，免疫组织化学检测显示，狗
肝菜多糖高、中剂量中 VEGF表达与模型组比较，染色强度
和范围明显降低，提示狗肝菜多糖可能通过降低 VEGF 蛋
白表达，使血管生成减少，进而影响纤维组织细胞的血液
供应，从而起到抗纤维化的作用，但具体机制还有待于进
一步研究。
参考文献
［1］ 中国药典委员会 . 中国药典［S］. 北京:化学工业出版社，
2005:369.
［2］ 郑宏钧，詹亚华 . 现代中药材鉴别手册［M］. 北京:中国医
药科技出版社，2001:837.
［3］ 黄皓，干信 . 天然多糖类活性物质抗乙肝病毒的研究进展
［J］. 中草药，2006，37(10) :1594.
［4］ 刘军祥，苏红卫 . 用 SPSS 对有序分类资料进行 Ridit 分析
［J］. 泸州医学院学报，2005，8(5) :471 － 472.
［5］ 倪琦，曾思恩，谭宁 . 缺氧诱导因子 1 在肝炎到肝癌演进过
程中的意义［J］. 医学综述，2009，15(5) :641 － 644.
［6］ 张可锋，朱华，高雅 . 狗肝菜保肝作用有效部位筛选研
究［J］. 中国中药杂志 2010，35(4) :497 － 498.
［7］ 张小玲，肖胜军，高雅，等 . 狗肝菜多糖对 D －半乳糖胺所致
大鼠急性肝损伤的保护作用［J］. 时珍国医国药，2010，21
(2) :278 － 279.
［8］ 王晓坤，唐瑛 . 肝纤维化动物模型研究进展［J］. 动物医学进
展，2007，28(3) :95 － 98.
·391·第 4 期 李志超，曹庆生．狗肝菜多糖对肝纤维化大鼠肝组织 VEGF表达的影响