全 文 ：小驳骨总黄酮含量测定及其提取工艺研究
江秀娟1，梁华伦2，陈燕霞3，陈 康3
(1．广州市海珠区食品药品检验所，广东 广州 510250;2．广东省中医院，广东 广州 510006;
3．广州中医药大学，广东 广州 510515)
摘要:目的 研究小驳骨中总黄酮的含量测定方法及其提取工艺。方法 采用芦丁显色法，紫外可见分光光度建立小驳骨中总黄酮的含
量;采用正交试验法优选总黄酮提取工艺。结果 芦丁显色法可以准确测定小驳骨中总黄酮含量，其平均含量为 4． 67 mg /g;正交试验
法筛选的最优提取工艺为:15 倍量 60%乙醇，超声提取 40 min。结论 紫外可见分光光度法测定小驳骨中总黄酮的含量精确科学，能
很好地检测和控制小驳骨总黄酮的质量;正交验证试验结果显示次提取工艺稳定、可行。
关键词:小驳骨;总黄酮;含量测定
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1673 － 4610(2014)04 － 0258 － 04
作者简介:江秀娟，主管中药师，Tel:020 － 34038672，E-mail:jiangxiujuan0768@ 126． com
通讯作者:陈 康，硕士生导师，教授，主要从事中药饮片炮制规范化及质量标准研究
Content Determination of Total Flavonoids in Herba Gendrussae
JIANG Xiu-juan1，LIANG Hua-lun2，CHEN Yan-xia3，CHEN Kang3
(1． Haizhu District Institute for Food and Drug Control，Guangzhou，Guangdong 510250，China;2． Traditional Chinese
Medical Hospital of Guangdong，Guangzhou，Guangdong 510515，China;3． Guangzhou University of Chinese Medicine，
Guangzhou，Guangdong 510006，China)
Abstract:Objective To research the content determination method and the extraction process of total flavonoids in Herba
Gendrussae． Methods The chromogenic method with ultraviolet visible spectrophotometer was used to detect the content of
total flavonoids in Herba Gendrussae． And the orthogonal experiment method was used to optimize the extraction process of
total flavonoids． Ｒesults Ｒutin chromogenic method could accurately detect the content of total flavonoids，and the average
content was 4． 67 mg /g，the orthogonal experiment method to screen the optimal extraction process was 15 times of 60%
ethanol，ultrasonic extraction for 40 min． Conclusion The chromogenic method with ultraviolet visible spectrophotometer
can detect the content of total flavonoids accurately，and can be used to control the quality of Herba Gendrussae，the
results of orthogonal experiment showed that the extraction technology was stable and feasible．
Key words:Herba Gendrussae;total flavonoids;content determination
小驳骨为双子叶植物爵床科小驳骨属植物小驳骨
Gendarussa vulgaris Nees．的干燥地上部分，全年均可采
收，又称裹篱樵、接骨草、小驳骨(《南宁市药物志》)、驳
骨消、小接骨(《广西药用植物名录》)等，广泛分布我国
广东、广西、海南等省［1］。具有祛瘀止痛，续筋接骨等
功效。用于跌打损伤，筋伤骨折，风湿骨痛，血瘀经闭，
产后腹痛［2］。小驳骨主要含有黄酮类化合物、挥发
油［3］、无机元素［4］以及其他成分［5］。目前小驳骨的总
黄酮含量测定尚未有相关报道，本研究对小驳骨的总
黄酮含量进行测定方法和提取工艺研究，为小驳骨的
质量控制提供依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
十万分之一电子分析天平(Precisa XS225A 型，瑞
士普瑞赛斯) ;紫外可见分光光度计(8453E，美国 Agi-
lent科技公司) ;超声波清洗器(KQ-300，东莞市科桥超
声波设备有限公司) ;鼓风干燥箱(DHG-9075A，上海一
恒科技有限公司)等。
1． 2 试药
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号:
100080 － 200707) ;无水乙醇(分析纯，天津市百世化工
852
Pharmacy Today ·2014 04 Vol． 24 No． 04·
有限公司，批号:2012 － 11 － 16) ;其它所用试剂均为分
析纯;水为蒸馏水。
1． 3 样品
收集小驳骨 12 批，均符合《中国药典》2010 年版一
部小驳骨项下质量要求。
2 方法学考察
2． 1 对照品溶液的制备
取干燥至恒重的芦丁对照品，精密称定，置于 50
mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，制成每 1 mL
含无水芦丁 0． 207 0 mg的对照品溶液。
2． 2 样品溶液的制备
分别取样品粉末(过 3 号筛)约 2． 0 g，精密称定，
置于 100 mL 锥形瓶中，精密加入 60%乙醇 30 mL，称
定重量，超声处理(功率 250 W，频率 40 kHz)40 min，放
冷，再称定重量，用 60%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤
过，取续滤液，即得。
2． 3 水分测定
照水分测定法(《中国药典》2010 年版一部附录 IX
H第一法)测定。实测样品 12 批，结果见表 1。
表 1 各批小驳骨饮片信息表和水分测定结果(n =2)
序号 批号 产地 取样(g) 水分(%)平均值(%)
1 120601201 广西 2． 503 4 11． 311 5 11． 451 9
2． 515 2 11． 592 3
2 120003781 广西 2． 514 7 11． 736 1 11． 744 7
2． 604 1 11． 753 2
3 20091017 广西 2． 505 3 10． 253 4 10． 352 7
2． 507 3 10． 451 9
4 20110915 广东 2． 601 4 10． 174 3 10． 142 6
2． 512 8 10． 110 9
5 20110913 广西 2． 498 1 10． 449 6 10． 364 2
2． 502 1 10． 278 7
6 20121015
采自广东
广州龙洞
2． 521 8 10． 650 8 10． 643 3
2． 516 2 10． 635 7
7 20080618 广西 2． 501 7 11． 573 7 11． 593 6
2． 525 3 11． 613 5
8 20111003
采自广东
饶平
2． 504 2 10． 608 9 10． 524 2
2． 508 9 10． 439 4
9 20121030
采自广州
大学城
2． 512 5 11． 100 7 11． 103 2
2． 611 0 11． 105 6
10 20120920 广西 2． 550 7 11． 820 7 11． 644 6
2． 513 2 11． 468 5
11 20120928
采自广中
医药王山
2． 497 4 12． 709 6 12． 683 7
2． 601 4 12． 657 8
12 20120919 广西 2． 597 4 9． 952 1 9． 962 7
2． 604 7 9． 973 3
2． 4 波长的选定
样品溶液与对照品溶液按“2． 5”方法显色用紫外 －
可见分光光度计进行扫描，在 200 ～ 800 nm波长范围内
测定吸收光谱。结果对照品溶液在 510 nm处有最大吸
收峰;样品溶液在 510 nm处与对照品溶液有叠加，吸光
度较为理想，因此确定测定波长为 510 nm，见图 1。
图 1 芦丁对照品溶液与样品溶液波长扫描叠加图
注:a:芦丁对照品溶液，b:样品溶液
2． 5 线性关系考察
精密量取芦丁对照品溶液(每 1 mL含芦丁 0． 207 0
mg)1． 0、1． 5、2． 0、2． 5、3． 0 与 4． 0 mL，分别置于 10 mL
量瓶中，加 5% 亚硝酸钠溶液 0． 3 mL，摇匀，放置 6
min，加 10%硝酸铝溶液 0． 3 mL，摇匀，放置 6 min，加
1%氢氧化钠溶液 4 mL，再加 60%乙醇稀释至刻度，摇
匀，放置 15 min，以相应的溶液为空白。照紫外 －可见
分光光度法，在 510 nm 的波长处测定吸收度，以吸收
度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线得回归方程:
A = 12． 197C － 0． 007 3;r = 0． 999 8，结果表明芦丁在
0. 020 7 ～0． 082 8 mg /mL范围内具有良好线性关系。
2． 6 精密性考察
精密吸取对照品溶液 3 mL，按“2． 5”方法显色并
测定其吸光度，连续测定 6 次，计算 ＲSD值。试验结果
表明 ＲSD为 0． 12%，方法精密度良好，符合测定要求。
2． 7 稳定性考察
精密吸取 7 号样品溶液(批号:20080618)1 mL，置
于 10 mL量瓶中，按照“2． 5”方法显色，分别于 0，5，10，
20，30，40，60 min，在 510 nm处测定吸光度。计算出的
ＲSD值为 0． 11%，表明稳定性良好。
2． 8 重复性考察
取 4 号样品粉末(批号:20110915)6 份，每份约
2. 0 g，精密称定，分别按“2 ． 2”方法制备，精密吸取
1 mL，分别置于 10 mL 量瓶中，按“2 ． 5”方法显色，
放置 15 min，测定其吸光度。计算出其 ＲSD 值为
0. 13%，表明实验重复性良好。
2． 9 加样回收率考察
精密称取已知含量的 4 号样品粉末(批号:
20110915)6 份，每份约 1． 0 g，精密称定，分别精密加入
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干燥至恒重的芦丁对照品约 5． 5 mg，按照“2． 2”方法制
备，精密吸取 1 mL，分别置于 10 mL 量瓶中，按“2． 5”
方法显色，放置 15 min，测定其吸光度。计算回收率，
测定结果见表 2。结果显示:本方法平均回收率为
98. 02%，ＲSD为 1． 03%，表明该提取方法可靠有效。
表 2 加样回收率实验结果
序号
取样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测总量
(mg)
回收率
(%)
1 1． 020 0 5． 610 8 5． 560 0 11． 043 4 97． 70
2 1． 019 3 5． 607 0 5． 583 0 11． 010 7 96． 78
3 1． 002 9 5． 516 8 5． 527 3 10． 970 1 98． 66
4 1． 100 7 6． 054 7 5． 994 0 11． 984 1 98． 92
5 1． 085 4 5． 970 6 6． 004 2 11． 790 5 96． 93
6 1． 006 7 5． 537 7 5． 584 7 11． 075 3 99． 15
平均均值 = 98． 02%，ＲSD = 1． 03%
3 提取工艺的考察
3． 1 单因素考察
3． 1． 1 提取溶剂的选择 取小驳骨 1 号样品粉末(批
号:120601201)约 2． 0 g，精密称定，分别置于 5 个 100
mL具塞锥形瓶中，分别加入 50%、60%、70%、80%、
90%的乙醇 30 mL，称定重量，超声处理(功率 250 W，
频率 40 kHz)40 min，放冷，再称定重量，分别用 50%、
60%、70%、80%、90%的乙醇补足减失的重量，摇匀，
滤过，分别取续滤液 1 mL按“2． 5”方法显色，测其吸光
度 A值，根据回归方程计算总黄酮含量，结果见表 3。
表 3 乙醇浓度考察结果(n =3)
乙醇浓度(%) 50 60 70 80 90
黄酮含量(mg /g) 2． 657 7 3． 158 1 2． 978 6 1． 934 8 1． 779 3
结果表明，小驳骨总黄酮含量随乙醇浓度的增加
先增后减，当用 60%乙醇提取时，小驳骨总黄酮含量最
高。随着乙醇浓度升高，乙醇水分含量降低，导致其极
性下降，从而使小驳骨总黄酮含量降低。
3． 1． 2 提取时间的考察 取小驳骨 1 号样品粉末(批
号:120601201)约 2 g，精密称定，分别置于 5 个 100 mL
具塞锥形瓶中，分别加入 60%的乙醇 30 mL，称定重
量，分别超声处理(功率 250 W，频率 40 kHz)20、30、
40、50、60 min，放冷，再称定重量，用 60%乙醇补足减
失的重量，摇匀，滤过，分别取续滤液 1 mL 按“2． 5”方
法显色，测其吸光度 A值，根据回归方程计算总黄酮含
量，结果见表 4。
表 4 提取时间考察结果(n =3)
提取时间(min) 20 30 40 50 60
黄酮含量(mg /g) 2． 890 4 2． 945 1 3． 199 0 3． 048 3 3． 008 1
结果表明，小驳骨总黄酮含量随提取时间的延长而
增加，在 40 min时达到最大值，之后总黄酮含量随时间
的增加略有下降。因此，选择 40 min为最佳提取时间。
3． 1． 3 料液比的考察 取小驳骨 1 号样品粉末(批
号:120601201)约 2 g，精密称定，置于 5 个具塞锥形瓶
中，加入 60%乙醇，1∶ 10、1∶ 15、1∶ 20、1∶ 25、1∶ 30 五个不
同液料比，称定重量，超声处理(功率 250 W，频率 40
kHz)40 min，放冷，再称定重量，用 60%乙醇补足减失
的重量，摇匀，滤过，分别取续滤液 1 mL 按“2． 5”方法
显色，测其吸光度 A 值，根据回归方程计算总黄酮含
量，结果见表 5。
表 5 液料比考察结果(n =3)
料液比(g /mL) 1∶ 10 1∶ 15 1∶ 20 1∶ 25 1∶ 30
黄酮含量(mg /g) 2． 964 0 3． 107 2 3． 219 3 3． 234 3 3． 290 4
结果表明，随着料液比的增大，小驳骨总黄酮含量
略有增加，考虑成本问题，提取时液料比以 1∶ 15(g /mL)
为宜。
3． 2 因素水平表设计
选择了乙醇浓度(A)、提取时间(B)、液料比(C)
为考察因素，根据单因素试验结果选择设计 3 个水平，
以提取物中总黄酮为评价指标，采用 L9(3
4)正交实验
表安排试验。实验结果进行方差分析，筛选出最佳提取
工艺，结果见表 6 ～ 8。
表 6 因素水平设计表
水平 A乙醇浓度(%) B提取时间(min) C料液比(g /mL)
1 50 30 10
2 60 40 15
3 70 50 20
表 7 小驳骨总黄酮提取正交试验结果(n =3)
实验号
〗因素
A B C D
结果
(mg /g)
1 1 1 1 1 2． 568 1
2 1 2 2 2 2． 919 4
3 1 3 3 3 2． 423 4
4 2 3 1 2 3． 045 2
5 2 1 2 3 2． 972 4
6 2 2 3 1 3． 096 8
7 3 2 1 3 2． 589 3
8 3 3 2． 1 2． 332 9
9 3 1 3 2 2． 197 1
K1 7． 910 9 8． 202 6 7． 997 8 7． 737 6
K2 9． 114 4 8． 224 7 8． 161 7 8． 605 5
K3 7． 119 3 7． 717 3 7． 985 1 7． 801 5
Ｒ 1． 995 1 0． 507 4 0． 176 6 0． 867 9
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Pharmacy Today ·2014 04 Vol． 24 No． 04·
表 8 方差分析表
方差来源 平方和 自由度 方差 F 显著水平
A 0． 672 8 2． 000 0 0． 336 4 105． 125 0 P ＜ 0． 05
B 0． 156 0 2． 000 0 0． 078 0 24． 375 0 P ＜ 0． 05
C 0． 054 8 2． 000 0 0． 027 4 8． 562 5 P ＞ 0． 05
D(误差) 0． 006 5 2． 000 0 0． 003 2
注:F(2． 2)= 19
本实验通过正交实验法对小驳骨总黄酮的提取工
艺条件进行了优化。经正交设计的结果分析可以看
出，3 个因素对总黄酮得率影响顺序为乙醇浓度(A)＞
提取时间(B)＞料液比(C) ;方差分析分析结果表明乙
醇浓度和提取时间对结果有显著差异(P ＜ 0． 05) ，液料
比对结果未见有显著性差异(P ＞ 0． 05)。在单因素考
察中，提取时间为 40 min，小驳骨总黄酮含量最高;考
虑生产提取成本，液料比为 1∶ 15 比较合适。综合各种
因素，选定小驳骨总黄酮提取的最佳方案为 A2B2C2，即
用 60%乙醇 15 mL超声提取 40 min。
3． 3 提取工艺的验证
按照上述优化提取工艺条件，分别取样品 3 粉末
(批号:20091017)3 份，每份约 2． 0 g，精密称定，进行验
证实验，测定总黄酮的平均含量为 3． 331 8 mg /g，ＲSD
为 1． 30%，表明该工艺稳定。
4 样品总黄酮含量测定
取各批小驳骨粉末(过 3 号筛)约 2． 0 g，精密称
定，按照最佳提取工艺条件制备样品溶液，精密吸取续
滤液 1 mL，置 10 mL量瓶中，按“2． 5”方法显色，滤过，
取续滤液，测定其吸光度。并按照回归方程计算总黄
酮含量，结果见表 9。结果显示，各批次的小驳骨饮片
总黄酮的含量差异较大。
表 9 各批小驳骨中总黄酮的含量(mg/g)(n =3)
样品 批号 产地 含量(mg /g)ＲSD(%)
1 120601201 广西 3． 119 6 1． 38
2 120003781 广西 2． 724 8 0． 50
3 20091017 广西 3． 316 2 0． 24
4 20110915 广东 6． 118 8 1． 31
5 20110913 广西 7． 471 4 1． 03
6 20121015 采自广东广州龙洞 4． 531 6 1． 19
7 20080618 广西 3． 727 2 1． 10
8 20111003 采自广东饶平 3． 844 9 1． 41
9 20121030 采自广州大学城 6． 815 4 1． 21
10 20120920 广西 3． 535 6 1． 24
11 20120928 采自广中医药王山 3． 231 3 0． 67
12 20120919 广西 7． 595 8 1． 37
5 讨论
小驳骨饮片 12 个测试样品测试样品中总黄酮含
量最高为 7． 60 mg /g，最低为 2． 72 mg /g，平均值为 4． 67
mg /g，最高与最低黄酮含量相差 4． 88 mg /g，按国家药
典委员会的要求初步拟定，按干燥品计算，含总黄酮以
芦丁(C27H30O16)计，不得少于 0． 20%。
在总黄酮提取的过程中，对提取溶剂乙醇的浓度
进行了考察，结果表明小驳骨总黄酮含量随乙醇浓度
的增加先增后减，在单因素考察的 5 个浓度的乙醇中，
用 60%乙醇提取时，小驳骨总黄酮含量最高。总黄酮
的提取率随着乙醇浓度升高，乙醇水分含量降低，导致
其极性下降，从而使小驳骨总黄酮含量降低。在对提
取时间的考察结果表明小驳骨总黄酮含量随提取时间
的延长而增加，在 40 min时达到最大值，之后总黄酮含
量随时间的增加略有下降。在料液比的考察结果表
明，随着料液比的增大，小驳骨总黄酮含量略有增加。
在初步考察上述条件后，通过正交实验对小驳骨提取
工艺进行了优化，并最终确定小驳骨总黄酮的提取工
艺为:小驳骨饮片粉末 2． 0 g用 60%乙醇 30 mL超声提
取 40 min。
从实验测得的各批次小驳骨总黄酮的含量分析发
现，小驳骨总黄酮的含量没有地域上的差异。
参考文献
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(收稿日期:2014 － 01 － 23)
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