全 文 ：上 海 农 业 学 报 8 9 1 5, 1 ( 4 ) : 87一 88
A e t a A g r f e ,、 It :之 r。 己 S h a 九 g h a f
蟾蛛长叶车前花叶病毒抗血清的制备
朱培冲 陆妙康 阎栋材 王鸣歧
(复旦大学生物系 )
T O ADS F O R P RO D U C T10 N O F AN T ISE RUM T O R IB G RASS MO SA IC V!RUS
Zh u P e i一 k u n L u M i a o 一k a n g Y a n D o n g一。 a i W a n g M i n g闷 i
(D印 a r t o e n t o f B f o l o洲 , F “ d a , nU i o e r s落yt )
关键词 蟾蛤 ;长叶车前花叶病毒 ;抗血清
K e y w o r d s T
o a d ; R ib g r a s s M o s a i o V i .l u s ; A n t i s e r u m
T iol
n , S
.
A 等 1 9 7 2 年发表用青蛙制备植物病毒抗血清的文章川 以来 , 至今未见有关研
究的再度报道 。 本工作用蟾蛛制备长叶车前花叶病毒抗血清 , 所获抗血清效价为琼脂糖凝胶
双一向扩散 1 : 64 。
将成年健壮的蟾赊放养在长有青草的纱网里 , 纱网应留有适当的空隙 , 既不使之逃逸又能
使昆虫飞入纱网 , 必要时应当在纱网里装悬诱虫灯 , 以便蟾蛤有虫可以捕食 , 也可饲之以活蛆
躬!。 制备抗血清时 , 将浓度为 Zm g / m l 的长叶车前花叶病毒 (R i bg : a s s M o s a i o V i r u s , RM V )与
等量福氏非完全佐剂一起充分乳化 lz[ , 然后注射入蟾赊 的腹部 。每只蟾螃注射 0 . 2一 o . 3m l (即
0
.
2一 0 . 3m g 病毒 ) , 每周一次 , 连续注射 3 次 。 停止注射二周后 , 对免疫蟾蛤颈动脉放血 , 血
液在室 温 ( 25 ℃左右 )下放置 2一 3 小时后 ,置入 4 ℃ r冰箱 。 隔 日 , 将血液离心 (4 , Oo o r p m , 1 5 ’ ) ,
吸取上层淡黄色液体 , 即得蟾蛛抗血清 。 每只蟾螃可得抗血清 1一 2m l 。 进行琼脂糖凝胶双向
扩散 , 测得抗血清效价为 1/ 8 (胶浓度为 0 . 8 % , 配胶缓冲液是 0 . 01 M p H 7 . 2 P B s) 。 另有 5
只蟾赊在停止往射四周后采血 , 以 同样的方法测得抗血清效价为 1 / 3 2一 1 / 6 4。 测定效价时所
用 R M V 浓度为 l m g / m l 。 RM V 与其蟾蛛抗血清的反应沉淀线相当清晰 , 而蟾蛤健血清则无
反应 。 免疫双向扩散需 12 小时以上 ( 37 ℃ )才始见沉淀线 。 配制凝胶板时 , 配胶液用蒸馏水或
0
.
I M p H 8
.
6 巴比妥钠盐酸缓冲液或 0 . 04 M p H 7 . 6 T ir s一 H CI 缓冲液时 ,反应效果均不佳 ;
生理盐水或 o . I M p H 7 . 2 P B 或 0 . IM p H 7 . 4 B B 则次之 , 用 0 . 0 1M p H 7 . 2 P B S , 沉淀线
最为清晰 ; 实验表明 , 蟾赊停止免疫 RM V 二周后就能测出抗体活性 , 比 T ol in , S . A 等报
道的青蛙 P S V 和 B M V 抗血清需 25 天或 35 天才能测出抗体活性要来得早 。
蟾赊在我 国分布范围十分广泛 , 饲养管理非常方便 。 它不象兔 、 鼠和鸡那样需要粮食喂养 ,
本文于 1日84年 12月 28 日收到 。
8上 海 农 业 学 报 1卷
也不象青蛙那样要放养在水池里 , 并且每只蟾螃需要注射的抗原量甚少 , 尤其对于那些在温
度稍高时就不稳定的抗原 , 用蟾蛤制备抗血清更值得探讨试用 。
参 考 文 献
仁1 〕 T o l in , 5 . A . e t a l . , 1马了2 , F o r g s f o r p r o d u e t io n o f a n t i b o d i e s t o i e o s a h e d r a l p l a n t e a u s e s . P h y t o p a t h o lo g y ,
6 2
:
(6 ) 6 7 3
.
〔 2 〕 朱培坤 , 19 83 : 免疫酶技术 , 山东科技出版社 , p . 均一2 。
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