全 文 ：第 2卷 第 2期
18 96年 6月
病 毒 学 报
CHI E NE S JU O RN A LF O VI RO LO G Y
Vol
.
2 N o
.
2
J
u乞 e 1 986
长叶车前花叶病毒 ( H R V:h )外壳蛋白
赖氮酸残基的修饰
朱葱葱’ 巫爱珍 2王鸣歧 ’ 孙玉 昆么
祖要 我们曾报道长叶车前花叶病毒上海分离株 (简称 H R Vs h )的外壳蛋白有二个赖氮酸残基 .
在 p HS .5无变性剂存在的条件下 , 完整病毒颗拉表面的赖氨酸残基可与三硝基苯碘酸 ( T N P S ) 起
反应 , 反应后的 T N P - H R V , h病毒颗粒的感染力丧失达 90 肠以上 。
本文又进行了甲基乙亚胺甲醋( M E I )对 H R V hs 赖氨酸残基的修饰反应 ,修饰后的M E I一 R V北
病毒颗粒的感染力也同样丧失90 肠以上 .
从三硝基苯磺酸修饰的病毒颗粒 ( T N P一 H R V : h ) 中分离得到的 R N A 能与天然的H R v hs 的外
壳蛋白重建病毒颗拉 , 并共有感染力 , 说明修饰过程中核酸并不受影响 。
进一步用同位素`唱 , ” P双标 记病毒 , 再以 T N P S修饰标记的病 毒 ,得到 〔. 5 , ’ 名 P 〕 一H R V : h
及 T N P 一 ( ` . 5 , ’ I P 〕 一H R V : h . 将两者分别接种于系统寄 主青菜 介B , a s s i e a c h i . e ” s `s ) 的一片
叶片 , 一天后在非接种叶片上都可测得 , . 5 , ’ 吕P的放射计数 . 其中 , 〔’ ` S , ’毕〕一 R V油的 ’ .s /’ . P
比值降低了 , 而 T N P 一 〔” S , ’ I P 〕 一H R V s h的 ” S / ` , P比值保持不变 . 说明 H R V 。h外壳蛋白赖氮酸
残基的修饰并不影响病毒颖粒进入寄主细胞 , 以及在寄主细胞间的转移 . 同位素双标记的结果表明 ,
其感染力丧失的原因可能是由于上述修饰作用阻止了病毒在感染中所必须的脱壳过程 。
关健词 长叶车前花叶病毒 赖氨酸残基的修饰 脱壳机制
病 毒外壳蛋白侧链的选择性修饰是研究病毒感染机制的 一种方法 。
关于烟草花叶病毒 ( T M V ) 外壳蛋 白赖氨酸残基的特性曾进行过许多研究 。 F r ae o k e 卜
C o n r a t等〔 1〕曾研究了 T M V外壳蛋 白与硝基氟苯的反应 , R a m a e h a n d r a n 〔幻则 尝 试 T T M V
外壳蛋 白与O 一 甲基异尿 素的反应 , 而 S “ h “ e l e 和 L a u “ e r (3 〕研究了不 同蛋白与三 硝 基苯磺酸
的反应速度。 这些研究只有在尿 素变性条件下才能 进行 , 表 明了 T M V外壳蛋 白 亚基 中的赖
氨酸残基不在病毒颗粒 丧面。 由于尿素变性的不可逆性 , 使这些研究结果都难 以在病毒感 染
机 制方面作 出有意义的判断。
长叶车前花叶病毒上海分离株系从上海郊区青菜中分离所得 。 它的外 壳 蛋 白 分子最为
1 6
,
50 。 , 其中含有 l 个组氨酸残基及 4 个甲硫氨酸残基〔 4〕。 在无变性剂存在的缓和条 件下 ,
H RV
。 h表面的一个赖氨酸残基可被三硝基苯磺 酸所修饰 , 修饰后的 H R V比虽保持了完整为
病毒颖拉 , 但丧失感染力达 9 。帕以上〔 5〕。 对修饰后的 H R V s h的空间结构的变化及 与 生物活
力的关系进行了初步的研究〔 6 〕。 为了进一步 阐明赖氨酸残基修饰后病毒颖拉感 染 力 丧失的
原因 , 探讨 H R V hs 的感染机制 , 本文报道了用 , ` S , . 2 P同位素双标记的 H RV 比经 过 三硝羞
苯磺酸修 饰后对病毒颖粒感染中脱外壳过程的影响。
1
。上海复且大学生物系
2
. 中国科学院上海生物化学研究所
收楠日 期 : 1 9 8 5年 10 月7 口 , 同年 1 2月 2 8 日修回 ,
DOI : 10. 13242 /j . cnki . bi ngduxuebao . 000230
1 0 6病 毒 学 报 2卷
材料与方法
( 一 )试荆 三硝基苯磺酸是上海生物化学研究所东风生物化学 试 剂 厂 产 品 ;甲 基 乙 亚 胺 甲 醋按
H un te r方法〔7〕合成 ;二 S一甲硫氨酸为中国医学科学院放射医学研究所出品 ;. , P磷践盐为中 国 科 学院北京
原子能研究所出品 . 其它试剂均为国产 G . R . 及A . R . 试剂 .
( 二 ) H RV s h的分离及纯化 从人 I 接种感染的青菜 ( B r a s : i e a e h ”` e ” 5 1: ) 中分 离 纯化 H R V , h 的方
法按前文所述〔魂〕。
( 三 ) H RV hs 宪益获较与三硝荟笨确吸的修饰反应 按前文方法〔幻 , 取 5毫克H R V , h制剂与 3毫克三硝基
苯磺酸溶于 一毫升0 . I M , p H s . 5的 N a * C O 一N a H C O ,缓冲液中 , 3 5 ’ C 保温 9 0分钟 . 反应液经 S e p五a d e x G嗯 5
柱 ( 。 . s x 6 o c m ) 层析 , 用。 . I M , p H S . 5的N a : C O 一N a H C O ,缓冲液洗脱 , 收集首先流出的浅黄 色 病毒溶
液 , 即是被三硝基苯磺酸修饰的H R V : h病毒颗粒 .
( 四 ) 三峭荟笨 . 吐修饰的 H RV hs 的核酸与正常 H RV hs 蛋白的 , 吐 H R V比外壳蛋白用 67 务醋酞法 〔 . 〕
制备 , T N P 一H R V s h一 R N A 用酚法抽提〔 9 〕 , : 毫克/ 毫升的H R V 止蛋自与 1 0 5微克/ 毫升的 T N P一H R V , h 一
R N A或 H R V , h一 R N A在o . o ZM , p H 7 . 2的焦磷酞缓冲液中 3 0 ’ C 保温 2 小时 , 反应 液 经 3 o . 0 0 0 r p m ( M S E
5 x l ` m l T i t a n i u m A n g l e R o t e r ) 离心 , 沉淀用少量蒸馏水再悬浮后作电镜观察 .
( 五 ) H RV hs 完益报位的甲基乙亚胺甲苗 的修饰 取 2 毫升 H R V hs 制剂 ( 2 毫克/ 毫 升 ) 加 人 2 毫克
甲基乙亚胺甲醋 , 用。 . 05 M N为 C O . 调 冷保持 p H S . 5 , 在 20 ’ C放置 lJ/ 、时 , 然后再加入 2 毫克甲基 乙亚胺甲
酣 , Z o . C放置 l,J 、时后 , 经 S e p h a de x G一 5柱层析 , 除去反应中多余的试剂 . 对照样品不加 甲基 乙亚胺甲
醋在同样条件下进行 . H R v hs 赖氨酸残基被甲基乙亚胺甲醋修饰的程度用三硝基苯磺酸进行鉴定 .
( 六 ) 同位素 ’ . 5 , ” P标记 H RV , h的制备 将毒源 H R V s h摩擦接种 于 5 ~ 6 片 叶 的 青菜 ( B r 。 。 s `c a
hc “` 肋`曰 叶上 , 五天后将感染的青菜连根拔起 , 洗 净 根 部 , 使 之 萎蔫 . 将 同 位 素二 ( 1口 ic ) , ` , P
( 3ut C i ) 加入 10 毫升水中 , 分装于 10 个小瓶 ( 1毫升 / 瓶 ) , 把感染的青莱插入 其 中 , 使 根浸入溶液中 .
小 瓶放在搪瓷盘内 , 在盘内倒入适量水 , 以保持一定湿度 , 在光照下维持温度20 ’ C左 右 , 培 养 3 天 , 然后
将感染的青菜叶片川液氮冷冻后 , 按常规方法 c4 〕抽提 , .s 、 ” P双标记的病毒即 ( ’巧 、 ` , P〕 一 R V : h .
( 七 ) t’ .s 、 .甲 〕 一 HRV hs 的三鹅荟笨二修饰 同位素双标记的病毒按上述 方 法 ( 三 ) 进 行三硝基苯磺酸修饰 , 即得 T N P一 〔” S 、 ’ ` P 〕 书 R v s h .
( 八 ) T N P一 ( . ` S 、 . I P〕 一 HRV s h和 〔. , S 、 . ` P ) 一HRV s h进入寄主及在每主体内特移的研究 选取 4 ~
5 片叶的青莱 ( B , a s : i e a c h i . e , 5 1; ) 6裸 , 分成两组 , 分 别 接 种 T N P 一 ( , , S 、 ” P〕 一 R V s h 和 〔’ . 5 、
二 P 〕 一H R V hs , 每株青莱接种 1片叶片 . 一天后将其余叶片剪下 , 用水冲洗后用滤纸吸干水分 . 按 中间叶脉
将叶片剪成两部份 , 分别称重 . 然后将其中一半叶片直接用液体闪烁计 数 仪 ( B a o k m a n L S一 9 80 , Y S J -
80 ) 测定 ” S 、 ” P的放射计数 . 另一半叶片用。 . I M , p H 7 . 5的磷酸缓冲液匀浆 , 3 , 5。。 r p m离心 , 在含有病
毒的上清液中加 6 肠 P EG ( 6。。。 ) , 放置过夜 , 离心 , 然后将沉淀悬浮于少量磷酸缓冲液中 , 全 部点样于
健纸上 , 烘干后放人闪烁瓶内用液体闪烁计数仪测定放射计数 .
( 九 ) 盛染力洲定 将病毒制剂适当稀释后 , 摩擦接种于心叶烟 ( N `co t`。 。 。 砂。 t 。` 。 。 。 ) 上作半叶试
验 , 3 ~ 5 天后观察叶片上的枯斑数 。
结 果
一 、 H R V hs 抽盆酸残` 的三硝签笨成酸修饰 H R V s h制剂在 p H S . 5与三硝基 苯 磺酸反
应 , 经 S e p h a d e x G一 25 柱层析后测定其吸收光谱 , 结果如图 1 。 其中 除 了在 2 6 o n m 处显 示
病毒特 有的吸收峰外 , 在 34 o n m 和 4 2 o n m 处 分别显示出两个吸收峰。 这表 明 H R V s h病 毒颗
粒 表 面的赖氨酸残基 巳被三硝丛苯磺酸荃所修饰 。
2期 长叶车前花叶病毒 (H R V sh )外壳蛋白赖氨酸残基的修饰
0 - - - -一 0T .卜皿 kv .峪
二 、 甲谷乙亚胺甲 .修饰H R V:h的鉴定
甲基乙亚胺甲醋修饰的病毒与对照样 品分别 在
pH S
.
5条件下与三硝基苯磺酸反应 , 经柱层析
除去过量试剂后 测 定 其 吸 收 光 谱 , 并 按照
4 2 0 n m克分子消光 系数等于 1 . 32 x 1 0’ ,计算病
毒颗粒中每克分子外壳蛋 白亚 基 所结 合 的三
硝基苯磺酸克分子数〔 10 〕 , 以鉴定病 毒颗 粒赖
氨 酸残基被甲纂乙亚胺 甲醋修饰的程度 。 结 果
见表 1 , 表明 H R V : h外壳蛋 白表面 的 赖氨酸
残基巳完全被 甲基 乙亚胺甲醋所修饰 , 因而不
能再 与三硝基苯磺 酸反应 。
衰 1
T a b
,
1
M E I一 HR V s 白拍橄
,
1
. 、l、O,1.`
O!·-!
,`|
破残谷结
T r i n i t r
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r e s i d u e o f t五e e o a t p r o t e i n
~ 气
o f M E I一 H R V s h
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、 o 、。 。
乍 幻 (价 . )
反应条件
R
e a e t i o n e o n d i t i
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翔长彼枷
图 1 三硝基苯磺酸修饰跳 H RV : h的吸收光谱
F i g
.
z A b s o r Pt i o n S Pe e t r u口 o f H R V s h v i r u s
, i t h l y s i n e r e s i d u e o f t h e e o a t p r o t e i n
m o d i f i e d b y t r i n i t r i P五e n y l s u l f o n i e a e i d
T N PS + H R V s h
( p H二 5 )
T N P S + M E I
一
H RV s h
( p H .
。
s )
H RV s h外亮蛋白每一亚基所含
T N P S克分子数
M o l e s o f T N P S p e r p r o t e玉n
s u b u n i t o f H R V s h
0
。
9 3口 0 Ie八 6 5 0 0
三 、 HRV hs 较抓酸残签被修饰后的感染力测定 用三硝基苯磺酸或甲基 乙 亚 胺甲酪修
饰的 H R V八病毒颗粒稀释至适当浓度摩擦接种于心叶烟上 , 3 ~ 5 天 后 观察枯斑数 。 结果
见表 2 。 从表中可见 , H R V s h颗粒表面的赖氨酸残基被三硝基苯磺酸 或 甲基 乙亚胺 甲醋修
饰后 , 其感染力都丧失 9。肠以上 。
四 、 三硝签笨确砍修饰的 HR V : h的核酸与 HR V , h蛋白的孟建 川 67 呱醋酸法及冷酚法分
别制备得到 H R V s h外壳蛋 白及 T N -P H R V : u一 R N A , 两者按 2 0 / l (W /W )的比例在 o . o ZM ,
p H 7
.
2的焦磷酸缓冲液中能重建病毒颗粒 。 重建的病毒颗粒在心叶烟上的 感 染 力如 表 3 所
示 , 说 明外壳蛋白被修饰过的 H R V北病毒颗粒的 R N A 仍能 与正常 外壳蛋 白重建 , 并具有感
染力 , 表明上述修饰只限于外壳蛋 .白部份 。
五 、 三硝签笨成酸修饰的 (杯 S 、 ” 即 一 HRV劝 的制备 按上述方 法 ( 六 ) 制 得 ( “ S 、
” P〕 标记的 H R V s h病毒颗粒后 , 即对其进行三硝基苯磺酸修饰 , 在 p H S . 5的碳酸 钠缓冲液
中保温后 , 反应液进行 S e p h a d o x G 一 25 柱层析 , 流出液用小塑料管 ( 。 . 5毫升 ) 收 集 , 每管
取 30 微升滴在滤纸上 , 烘干后用液体 闪烁计数仪测定幼 S 、 . 2 P的放射计数 . 结果见 图 2 。 流出
的第一个峰即是 T N -P 〔8 ` S 、 吕恶P 〕 一H R V s h , 图中所示 它同时具有3巧及 .2 P的放射性 。
六 、 . 〔, ` S 、 , , p 〕 一 HR V : h及 T N P一 〔, ` S 、 ” p 〕 一 HR V : h的感染力测定 将两 者稀 释至 3 0
微克 / 毫升用半叶法摩擦接种于心叶烟上 , 3 一 5 天后观察叶片上的枯斑数 , 结果见图 3 属
16 2病 毒 学 报 2卷
衰 2N TP S修 .的H RV sh与 ME I.饰
的H V R, h的感维力
T a b
.
2 I n f e e t i v i t y o f T N P一 m o d i f i e d
H R V
s
h a o d M E I一 m o d i f i e d
H R V
s
h
裹 3
T a b
病 .
V王ur s
接种滚度
C o n e e o t r a t i o n
o f i n o e u l a t e
( 卜g /m l )
枯斑数 /半叶
L o c a l l e s i o o s /
h
a lf l e a f
T N P一 HRV s h的RN A与夭然
H R V s h蛋白 , 组的 H RV s h
的感染力
I n f e e t i v i t y o f t h e r e e o n s一
t r u e t e d H R V
s
h w i t h R N A
f r o口 T N P一 m o d i f i e d H R V s h
a n d e o a t P r o t e王n f r o m
n a t u r a l H R V
s
h
HRV s卜
TN P
·
H RV止
2 40
2毛 0
2 5 0 0
1 0 0
。
1 4 5
0一 2
0一 2
核 酸
R N人
蛋 白
P
r o t e i n
H RV比
M E I
·
HRV施
1 60
1 60
1 1 0 0
8 0一 1 8一 63 , 2 3
o e Z
o e Z
核酸参人 , 组
%
P
e r e e n t o f
二 D c o
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ti
o n o f R N A
%
枯斑狱 /半叶
L o e a l l e
·
5
1
0厄 s /b a l f
l e a f
接种浓度
( i
n o e u la t e
二0 0卜g /m l )
二 . J之 P0 3, s
T N P
·
H R V s h H R V s h
( 1 0 5卜g /m l ) ( Zm g /口 l )
H R V s卜 H R V s h
( 1 0 5卜g /m l ) ( Zm g /m l )
4 8
,
3 4
.
3 1
-
2 3
5 3
.
2 8
,
3 6
,
1 7
一 . ~ 一 . .
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. ` _ , _ 、 一一 1一) 2 今 ` . 1 .
, , 加 ` . … 七. r
图 2 T N P一 〔二 S 、 二 P〕 - H R V s h 的分离
F i压 . 2 I s o l a t i o n o f T N P一 m o d i f i e d 〔二 S ,
, ,
P〕 ~ H R V s五
图 3 〔二 S 、 ’ I P 〕 ~ H R V s h (左图 A和右图 B )和
T N P一 〔” S 、 ” P〕 一H R V s h (左图 B和右图 A )半叶感
染照片
F 19
.
3 L o e a l l e s i o n s o f h a l f l e a f i n f e e t e d
, i t卜 〔” S , ” P 〕 一H R V s五 ( l e f t A a n d r i g h t B )
a n d T N P吸 o d i f i e d 〔二S , . , P 〕 一 H R V s h
( L e f t B a n d r i g h t A )
表 4 。 结果表 明 H R V s五经同位素标 记仍 保持
其感染力 , 再经三硝基苯磺酸修饰后 其感染力
大大丧失 , 此结果 与前述一致 。
七 、 三硝签笨破酸修饰的 HR V , h感染力丧
失机制的初步估价 用 〔, B S 、 吕 Z P〕 一 H R V s u
及 T N P一 〔明 S 、 ” P〕 一 H R V劝分别接种青菜的一片叶片 , 一天后在两者的 植 株上除接种叶
长叶车前花叶病毒 (HR V巧 )外壳蛋白赖氨酸残基的修饰 13 6期 42衰
Ta b
.
4
病 毒
V i
r us
双标记 HR V比及 TN卜双标记
HR Vs卜的感染力
Inf e e t i甲 it了 of (二 S, . I P 〕
~ H R V s h a n d T N P一m o d i f i e d
〔二 S , 二 P 〕 一 H R V s h
枯斑数 /半叶
L o e a l le s i o n s / h
a l f
Ie a f
H R V s卜 ` 0 , 1 0 , 2 6 , 2 3 , 1 0 1 8
( 5 0林g /m l )
T N P
一
H R V s五 3 , 1 , 2 , z , 0 , 2
( 5 0卜g /m l )
〔二 S 二 P〕 · H R V s卜 1 1 , 10 , 12 , 9 , 7 , 6
( 3 0卜g / . 1 )
T N P
一 〔二 S , . s P〕一 H R V s h o , 1 , 2 , 0 , 0 , 0
( 3 0卜g /m l )
外的其余茎叶都能从液体闪烁计数仪 测得 其
中“ S 、 “ P的放 射 计 数 。 结 果 见表 5 , 表明
T N -P 〔二 S 、 8 , P〕 一 I硕R V s h 和 〔二 S 、 ` Z P〕 一
H R V
s h一样 , 经摩擦接种后 , 不但能进入寄主
体内 , 并且也能在寄主细胞间转移 。 当分别测
定叶片及 P E G沉淀物中的 吕 . 5对 . 名P的比值 时 ,
发现在 T N P一 〔二 S 、 . 2 P〕 一H R V s h 接 种 的 实
验中 , 病毒 P E G沉淀物和叶片中两 者 的 .唱 /
. I P 比值基本一致 , 而在 〔, . 5 、 ` Z P〕 一 H R V s h接
种的实验中 , 两者的 . 5 /“ P比值 下 降 , 见表 6
从结果可以推测 , 当病毒被三硝基苯磺酸修饰
后 , 虽然不妨碍它进入寄主体内 , 但可能阻止
了它正常的脱壳过程 , 从而使它不表现出感染
力 。
衰 6
T a b
.
6
二 S / s . P
班 5 〔二 S、 . , P〕一 H RV s h 和 T N P一
〔二 S 、 . , P〕 一 H RV s h 在 , 集中的转移
T a b
.
5 T r a o s nr i s s i o n o f (
, .
5
, ` .
P 〕-
H R V s h a n d T N P一 m o d i f i e d
〔. ` S , 二 P 〕一 H RV s h i n t h e
C h i n e s e e a b b a g e
病 毒 放射性 ( cP m l/ 克叶 )
v l r u s R a d i o a e t i节 i t了 ( e p m g/
o f le a f )
二 S 二 P
( 二 S二 , P 〕一 H RV s h 4 3 7 4 0 1 1 1 8 3
T N P
一 〔 . ’ S , 二 P〕 一 H R V s h 5 2 2 2 7 2 18 1 1
浪中的
的比例在叶子成 P E G沉
比旅
t 10 o f t h e r a d i o a e t i v i t y
o f
’ .
5 /
. t
P
R a
0
病 毒
V i r u s
样 品
S a口 P l e
比 例
R a t i o o f
二 S /二 P
二 S , 二 P 〕一 叶
H RV s h L e a f
沉
T N P
一
( 二 S , .
.
H R V s b
P P
I
P 〕 叶
淀
b y P EG 6 0 0 0
子
1
。
5 9
2
。
45
L e a f
沉 淀
P P t b y P E G 6 0 0 0
2
。
6 9
讨 论
烟草花叶病毒 ( T M V ) 是病毒研究中最早结晶 、 研究最广泛的病毒之一 , 但 由 J二植物
病毒对整体植物的感 染复制不同步 , 并且对 T M V外壳蛋 白的许多修饰研究 都 必须在尿素存
在下进行 , 这就使这些研究结果的判断受到局限 , 因此对于烟草花叶病毒的感染机制至今还
很 少了解 。
长叶车前花叶病毒上海分离株 ( H R V hs ) 属烟草花叶病毒群 , 和烟草花 叶 病 毒普通株
有血清学的亲缘关系 , 但 两者不仅在外壳蛋白分子量及氨基酸组成方 面有很大的差异 , 而且
H R V hs 含有的 两个赖氨酸残基中 , 有一个在病毒颗粒 表面 , 这就使 H R V s h能在 无 尿素的缓
和条件下进行修饰 , 为进一步对它的感 染机制的研究提供了有利条件 。
本文分别用三硝基苯磺 酸及甲基 乙亚胺 甲酣对 H R V : h病毒 颗 粒 表面的赖氨酸残丛进行
选择性修饰 , 结果表明 , 当 H R V北完整颗粒进行修饰后 其感染力丧失达90 肠 )I 仁。 三硝基苯
le 4病 毒 学 报 2 卷
徽 酸修饰赖氨酸使之丧失了。一氨基的正 电荷 , 而甲基乙亚胺 甲酮修饰却仍保留了 赖 氨 酸 的
卜氮基的正 电荷 。 这说 明病毒感染细胞可能与。一氨基正 电荷的存在与否关 系不大 , 但 可以认
为 , H R V : h病毒 顺粒表面的赖氨酸残基是感染所必需的 。
当 H R V s五病毒顺粒被三硝基苯磺酸修饰后 , 其 R N A仍能与正常外壳蛋 白 重 组 , 并具有
感染力 , 表明修饰仅限于病毒的外壳蛋白部分 , 而对其中核酸则无影 响。
至于病毒颖粒表面的赖氨酸残基被修饰后 , 其感染力的丧失究竟是感染过程中哪一步受
阻 ? 是 进入 ? 脱壳 ? 还是复制 、 增殖 ? 当用二 、 3 2 P分 别 标记病毒的蛋白和核酸 后 , 采用同
位素示踪的方法发现同位素双标记的病毒接种寄主后 , .唱和 . 2 P都能进入寄主 细胞 , 并在寄
主体内运输 , 将此标记病毒用三硝基苯磺酸修饰后 接种 , 也显示同样 的结果 。 表明病毒感染
可能是 以完整颖粒 的形式进入寄主细胞的 , 即使对病毒颗粒进行三硝基苯磺酸修饰也不妨碍
它的进入过程 。
为何经三硝基苯磺酸修饰后的病毒颖粒能进入寄主细胞而 不表现出感染力 ? 从 二 /“ P
比值的测定可知 , 正常病毒感染寄 主一天后 , 从叶片 和病毒沉 淀物 中分别 测得 . 5/ 二 P比值
有明显下降 , 表 明当病毒进入寄主细胞后即能进行正常的脱壳 , 释放出核酸 , 并利用寄主细
胞内的物质进行复制 、 增殖 , 故表现为那 S / “ P比值的变化 。 同时可以推 测 , 正 常 病 毒的脱
壳过程可能在病毒进入寄主细胞的短时间内即进行的 , 它在寄主体内并不 以完整颗粒的形 式
进行运输 。 而修饰后的病毒接种寄主一天后 , 从叶片和病毒沉淀物中所得的吕“ S / . 名 P比值 基本
不变 , 从 1ljr 可以初步认 为 , 修饰后 的病毒虽能进入寄主细胞 , 但紧接着的脱壳过程却受阻 ,
故不能释放出正常的核酸 , 导致复制和增殖的停止 。 这可能是修饰后的病毒之所以丧失感染
力的原 因之一 。 它在寄主体内的运输可能是 以完整颗粒的形 式进行的 。
有关病毒感染的机制 , 病毒脱壳的机理 , 以及本文提出的推测都有待进一步的研究 。
参 考 文 献
〔 1 〕 F r a e o k e l一 C o n r a t H , S i n g e r B l J A m e r C h e m S o e , 7 6 : 1 8 0 , 1 95 4
〔 2 〕 R a口 a e h a n d r a . L K 一 B io c h e m B i o p h了5 A e t a , 3 2 : 5 5 7 , 2 9 5 9
〔 3 〕 S e h e e l e R B , L a u f f e r M A . B i o e卜e m i s t r y , 8 . 3 5 9 7 , 1 9 6 9
〔 ` 〕郁操由等 . 病毒学集刊 , 1 · 1 2 9 , 1 9 80
〔 5 〕郁操国等 . 实脸生物学报 , 1 4 · 3 3 1 , 1 9. 1
〔 6 〕郁操国等 . 实验生物学报 , 15 · 1 , 1 9 8 2
c 份〕 H u n t e r M J . 1 A m e r e b e m so e , . 4 : s 一 , i , l o e Z
〔 s ) F r a e . k e l · oC n r a t H . B益o e h e m B i o Ph y s A c t a , 2` : 5 4 0 , 1 0 5 7
〔 O ) G i e r e r A , S e h r a . m G . N a tu er , 1 7 7 . 7 0 2 , 19 6 5
〔 10 〕 H o l. e s F 0 . B i o e h e口 i s t r y , 5 . 2 5 7 0 , 19 6 6
长叶车前花叶病毒 ( H R V s h ) 外壳蛋白赖氨酸残基的修饰 1 6 5
MOD IF IC AT IO N O F L Y S IN E R ES !D U E
P RO T E IN O F H O L M E S , R ! B G R A书
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