全 文 ：第 3卷 第 2期
2 0 8 7 年 6 月
病 毒 学 报
CH IN E SE JO U RN A L O F V IRO L O G Y
3 N o
.
2
1 9 8 7
长叶车前花叶病毒单克隆抗体的制备
及在病毒分型中的应用
张永杯 李 乡。 李德葆 1
扭共 应用细胞杂交技术 , 将长叶车前花叶病毒杭州分离株 ( R M V h a ) 、 烟草花叶 病毒普
通株 ( T M V e ) 和北京番茄株 ( T M V b e 一 t ) 免疫的 B a l b / e小鼠脾细胞与 S p Z / o一 9 1盛小鼠骨做瘤
细胞融合 ,经筛选测定 , 成功地获得了 5 株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株 . 其中 l 株
属于 I g G : ` , 其余 4 株均属于坛G 二 5 株细胞株均制备了腹水抗体 , E L IS A效价最高 达 2 6 6 00 , 琼
脂双扩散效价达 1 28 . 根据与 16 个不同 RM V和 T M V毒株的反应特性 , 可将 5 株单 克隆抗体分为
A
、
B
、
C三组 , 分别针对 a 、 b 、 c三个不同的抗原决定簇 . 根据三组单克隆抗体反应 性的 差异 ,
15 个毒株可分为 6 个血清型 . 本文讨论了所获得的 5 株杂交瘤细胞在植物病毒的诊断 、 病毒病原
的鉴定及病毒分型方面的应用价值 。 `
关扭询 长叶车前花叶病毒 单克隆抗体 抗原决定簇 血清型
单克隆抗体 ( 简称单抗 ) 具有特异性高 、 重复性好 、 建株细胞可长期供应同种抗体等优
点 , 所以自单抗技术间世以来 , 已在医学 、 兽医 、 农业等各个领域中得到日益广泛的应用 。
到目前为止 , 在植物病毒方面 已制成烟草花叶病毒 ( T o b a e e o m o s a i e v i r 二 s , T M V ) 〔1一 3〕 ,
李坏死环斑病毒 ( p r u n u s n e c r o t i c r i n ` s P o t v i r u s , p N R s V ) c 4〕 , 首箱花 叶病毒 ( A l -
f a l f a m o s a i e v i r u s
,
A M V ) 〔5〕 , 香石竹蚀环病毒 ( C a r n a t i o n e t e h e d r i n g v i r u s , C E -
R V ) 〔6 〕, 南方菜豆花叶病毒 ( S o u t h e r n b e a o m o s a i e v i r u s , S B M V ) 〔 7 、 8〕等 2 0多种植物
病毒的单抗 , 并已初步应用于病毒抗原决定簇的分析和病毒血清型 ( 或抗原型 ) 的划分等方
面 。
长叶车前草花叶病毒 ( R i b g r a s s rn o s a i e v i r u s , RM V ) 是侵染十字花科蔬菜的重要 病
毒〔幻 , 该病毒寄主范围广 , 能侵染 10 科 50 多种植物〔 10 〕 , 在许多寄主上引起严重为害 , 在 大
白莱 ( B r a s s f e a p e k i n e ” s言s ) 等十字花科蔬菜上为害尤重〔 1 1〕 。 虽然国外已把 R M V和 T M V
分开 , 并划分株系〔10 〕, 但 R M V和 T M V特性相饥 容易混淆 , 现有的划分株系 方 法不 稳
定 , 在分类上存在一定的混乱 。 国内在 70 年代末才开始区别R M V 和 T M V , 还没有见到有关
划分株系的报道 。 故研制 RM V单执 , 对该病毒的多项研究具有实际意义 , 本文报道长 叶 车
前花叶病毒杭州分离物 ( R M V ha ) 单杭的制备及在病毒分型中的初步应用 。
材料和方法
( 一 ) 杭耳脚毒 R M V h a从田间毒源纯化后 , 经寄主范围 、 电镜观察和紫外吸收等测定都显示出 典
型R M V的特征〔的 , 以此作为免疫原 . R M V上海分离物 ( R M V : h ) 由复旦大学于善谦提供 . T M V 。由本
1
. 浙江农业大学生物技术研究中心 , 杭州
2
. 浙江医学研究院免疫研究室 , 杭州
收稿日期 : 1 9 8 6年9月6 日 , 同年 1 1月1 7 日修回 -
DOI : 10. 13242 /j . cnki . bi ngduxuebao . 000319
报3 卷“6 病 琴 学毒
校保存 .T V M上海农科院。株 (T MV n。 一。 )和 T MV上海1 .2株 (T MV s卜1 .2 )由上海农科院丁辛顺提
供 .油菜 T MV分离物1 号和 2号 (T Mv - I和 T M- y1 )由上海农科院袁贤容提供 .T MV , 广州番茄 株
( T M V g u 一 t )
,
T M V北京番茄株 ( T M V b e一 t ) , T M V上海。株 ( T M V s卜 。 ) , T M V南京 B :株和 L :株 ( T -
M V n a- B
:和 T M V n a- L . ) , T M V西南。株 ( T M y 二 i一。 ) , T M V北京 1株和 1 . 2株 ( T M V b e一 1和 T M V b e
一 1 . 2 )均由农牧渔业部植物检疫实验所张成良提供 .
( 二 ) 小吸 . 细 . 系和实脸劝物 实验采用非分泌型的S p Z0/ 一A g “ 瘤细胞系 ,浙江医学研究院免疫室
提供 . 免疫用的动物采用8 ~ 10 周龄的 B al b / 。小成 , 昆明种小皿用以准备饲养细胞层 , 均购 自浙江实脸动
物中心 。
( 三 ) 健翻和幼养玻 见参考文献〔1幻 。
( 日 ) 小吸兔皮. 序 纯抗原病毒加完全福氏佐剂免疫 5 只 B a 场 / c小吸 , 每 7 天皮下注射一次 , 共
三次 , 第二 、 三 次不 加佐剂 . 作细胞融合之前 3 天 , 从尾静脉加强免疫一次 . 第一次融合实验所用的小
眼是用 RM V h a免疫 . 第二次融合实脸是用 RM V h a , T M V c和 T M V b -e t混合免疫 , 免疫方法相同 .
( 五 ) 纽 . 胜* 和场姆培养 用 R PM I一 1 6 4 。液制备小民脾细胞悬液 . 同时收集处于对数生长期的 S p Z
/ 。瘤细胞 . 将二种细胞以 5 : 1比例混合 , 离心沉淀 , 在 37 ’ C下加“ 劳 P E G I 0 0 进行细胞融合 . 离心收集
融合细胞 , 加H A T培养液悬浮后 ,将细胞液分配到含有大约 1 .0 个腹腔巨噬细胞的培养孔内进行选择培 养 .
每 3天换一半H 人T 培养液 , 10 天左右改用 H T培养液 . 换液2~ 3次后 , 回复到正常 R P M I一 1 6 4。培养液。 当
杂交瘤细胞长至孔底 1/ 6面积时 , 取其培养上清进行抗体检测 。
( 六 ) 筑体滴魔 a 特 . 性位侧 应用 E L IS A间接法检测抗体〔 1 3 〕. 用抗原病毒包被反应板孔 , 辣根过
权化物醉标记的羊抗小砚 I g G ( 卫生部上海生物制品所产品 ) 为第二抗体 , 邻苯二胺为底物液 . 根据 肉眼
观察和分光光度计4她。皿 O D值相结合进行阳性判断。
单抗特异性侧定时 ,所用各毒源在黄苗愉烟 (N i e o * i。 : 。 t o b 。 c。 娜 v a r . H u a n 犷。 i a -o 了u ) 上繁殖 ,
提纯后 , 紫外吸收法测定浓度 . 各毒源包被浓度为 1。卜g / m l . 设健烟提取浓及S p Z / 。培养上清为阴 性对
照 , 设空白加醉液和完全空白为空白对照 . 同时以 1 0 。倍稀释的 RM V h a 的兔抗体坛G作比较实脸 . 结果以
4 次实脸的平均值表示 .
结 果
一 、 杂交必细饱及核型特征
免疫 脾 细 胞 和 S p Z / 。瘤细胞融合后 , 接种 80 个培养孔 。 4天后 , 出现杂交 瘤 细胞集
落 , 12 天时 , 10 %的接种孔有杂交瘤生 长 。 经检测 , 抗体阳性融合孔有38 个 , 阳 性 率为
4 7
.
5%
。
选择数个强阳性孔的细胞 , 分别经几次有限稀释克隆化 , 第一次融合实验 获 得 R m l ,
第二次融合实验获得 R二 2 、 R m 3 、 R m 4和 R m s共 5株杂交瘤细胞株。 体 外连续三个 半 月传
代培养 , 液氮冻存二个月复苏后 , 分泌杭体稳定。 分别制备了该 5株细胞的小鼠腹水杭 体 ,
其滴度以 R o l为最高 , E L sI A法达 2 56 0 0 , 琼脂双扩散法达 1 28 。
观察 30 个 R m l杂交瘤细胞分裂相 , 染色体数目稳定在 89 ~ 107 条 , 平均为 97 条 , 符 合杂
交瘤细胞的核型要求 。 正常B al b / c脾细胞染色体数目为 40 条 , S PZ / 。一 A g 14 瘤 细 胞 为 ”
条 。
二 、 单克隆抗体特性检测
收集各杂交瘤细胞株无血清培养上清液 , 经浓缩后与标准羊抗小鼠 I g G各亚类和 I g M 抗
血清 ( 卫生部上海生物制品所制备 )进行双扩散测定 。结果表明 R m l属于小鼠 I g G : `亚 类 , 其
2期 长叶车前花叶病毒单克隆抗体的制备及在病毒分型中的应用 1 4 7
余 4株均属于 Ig G。亚类 。
应用 E LI SA 间接法检测 5株杂交瘤培养上清液与1 5个毒株的反应 , 结果列于表 1 。 根据
衰 1 草克班杭体与RMV和 T MV . 株反应特异性分析裹
T a b
.
1 R e a e t i o n o f m o n o c l o n a l a n t i b o d i e s w i t h R M V a n d T M V s t r a i n s
杭原病毒
V i r u s
单克隆抗体
M o n o e l o n a l a n t ib o d y
A组 B 组
G r o u P 人 G or u P B
R口 1 R m Z R m 3 R m 4
对 照
C o n t r o l
血清型 毒 株 C 组
G or
u P C
S e or t y p
e S t ar in
R m s
兔坑血清
R a b i t
a n t i s e r u m
S P Z / 0上清
S PZ / 0
S U P e f n胜 t扭 n t
借姗借什份带份份带t
I
份带什t带什廿带什带什带
皿
皿 -I’t 什
册带柑什十
VI
借带什 份廿什t什廿
V
砚
T M V b e
。
t
T M V
n a 一 L :
T M V e
T M V g u
·
t
T M V b e
一
1
T M V b e
一
1
。
2
R M V h a
RM V s h
T M V
· 皿
TM V n a
·
B :
T M V n o
一
0
T M V s h
.
0
T M V x i
·
0
T M V
·
I
T M V s h
·
1
。
2
. 烟提取物
E x s t r a e t o f
卜切 I t卜y t o b a e e o
带
表中 ( + ) 、 ( 一 ) 号表示 4 9 2 n m O D健。
+ a n d 一 i n d i ca t e t卜e O D 4 OZ n m 仆 Iue .
一 0 . 0 0~ 0 . 1 0 , + . 0 。 1 0~ 0。 4 6 , 一 0 . 4 5~ 0一 8 0一 带 : 0一 80 ~ 1 . 15 , 珊 : > 1。 1 5。
反应性的差异可将 5种单抗分为A 、 B 、 C三组 , 分 别 针 对 a 、 b 、 。三个不同的 抗 原 决 定
簇 。
a 抗原决定簇 : RM V h a , R M V s h , T M V 一 I , T M V n a 一 B Z , T M V b e , t和 T M V n a 一 L Z
具有该抗原决定簇 。
b抗原决定簇 . T M V b e 一 t , T M V n a 一 L Z , T M V C , T M V g u 一 t , T M V b e一 , T M V n o -
o , T M V s h 一。 , T M V x i一。和 T M V 一 I共有该抗原决定簇 。
e抗原决定簇 : 是 T M V b e 一 t , T M V n a 一 L Z , T M V c , T M V g u 一 t , T M V b e 一 l和 T M V -
b e 一 1
.
2毒株的共同抗原决定簇。
应用常规琼脂免疫双扩散法测定 , 发现单克隆坑体 R m , 能与RM v ha 和 T M v be 一 t鹅反
库,
病 毒 学 报 3卷
三 、 1 5个弃株的血清型分折
根据各毒株与 A、 B、 C三组单抗的反应不同 , 将 :15 个毒株至少划分为 6个血清型 。
血清型 I : T M V b e · t和 T M V n a 一 L Z属于该型 , 具有 a 、 b 、 c 三个抗原决定簇 。
血清型 I : 包括 T M V 。 , T M V g u 一 t和 T M V b e 一三个毒株 , 具有b 、 c抗原决定簇 。
血清型 l :
血清型 F :
簇。
血清型 V .
决定簇 。
` 血清型 砚:
T M v b
e 一 1 . 2毒株 , 具有 C抗原决定簇。 ’
包括 R M V h a , R N V s h , T M V 一 I 和 T M V n a 一 B Z四个毒株 , 具有 a抗原决定
包括 T M V n o 一。 , T M V s h一 0 , T M V x i一 。和 T M V 一 I 四个毒株 , 具有b 抗 原
仅 T M V s h 一 1 . 2毒株 , 具有 a 、
讨
b
、 c抗原决定簇以外的抗原决定簇。
论
本研究工作初步表明 , 采用几个病毒株混合免疫的方法能产生更多抗原特异的淋巴细胞
克隆 , 增加获得抗体阳性杂交瘤细胞的机率 , 并且有利于得到特异性不同的单抚。
所建立的 5株杂交瘤细胞株 , 经过体外长期传代培养 、 定期检测抗体活性 、 H A T和 8一氮
鸟嗓吟培养液双重检验 、 液笼冷冻后复苏培养、 核型分析等证明 , 这些 细 胞 株 分泌抗体稳
定 , 染色体平均为 97 条 , 符合杂交瘤细胞要求 , 抗体基因和 H G P R T酶基因功能完整。 克隆
化结果经正态分布规律检验以及克隆化初期镜检选择单克隆培养孔 , 确保所建立的细胞株是
单个细胞的后代 , 即单克隆杂交瘤细胞株。
有的作者认明植物病毒与其单克隆抗体极难发生免疫沉淀反应 , 国内也尚无报导 。 在本
研究工作中 , 我们成功地使单克隆抗体 R二 1在琼脂免疫双扩散中 , 与R M v h 。和 T M V b e 一 t
起沉淀反应 , 表明该抗体是由完整的四条肤链所组成 , 具有双价结合抗原的功能 , 同时也提
示 a抗原决定簇在病毒表面多次重复 。
5株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体 , 依其与15 个毒株的反应性 , 可分为A 、 B 、 C三组 。
又根据对 A 、 B 、 C三组单抗的反应性差异 , 将 15 个毒株分为 6个血清型 。 这对病毒诊断 、 鉴
定 、 分类以及血清学分型方面的研究具有一定的实际意义 。 T M V b e 一 t和 T M V an 一 L Z至少 有
3个共同抗原决定簇 。 根据共同抗原决定簇可以分析毒株间的亲缘关系的理论 , 可认为 此 两
株病毒的亲缘关系较近 , 血清型 砚 ( T M V s h一 1 . 2 ) 与其余血清型间尚未发现有共同抗 原 决
定簇 , 所以 T M v s h 一 .1 2与其余毒株的关系可能较远 。 eP l ha m 〔 14 〕根据番茄抗病基因型 将 番
茄 T M V划分为。 、 1 、 1 . 2株系 。 从表 1 可以看出 , 。株 、 1株和 1 . 2株的反应互不相 同 , 分
别属于不 同的血清型 。 另外 , 凡归于。株的不同T M v 分离物 ( T M V s h一。 , T M v ix 一。 , T -
M V on
一。 ) 具有共同抗原性 , 三者均属于血清型 V 。 可见这种抗原性的不同与病毒毒株俊染
性的差异有一定的联系 。 应用 B 、 C组单抗就可 以鉴别这三类株系 。 T M V 一 I 和 T M V 一 I 是
油菜上二个非常相似的分离株 , 用普通抗血清难以区分 , 而单抗 R ln l和 R o Z能区别 两 者 ,
T M V 一 I 属于血清型 V , T M V 一 1属于血清型那 。
利用特异性单抗可 以在分子水平上研究病毒结构蛋 白〔 2〕。 R M V s h和 T M V c 衣壳蛋 白 的
亚基均由 158 个氮基酸残基组成 , 但 T M V s h含有组氨酸和甲硫氨酸 , T M V 。却没有这 二 种
纸基酸 〔 , 5 〕。 从表 1可以看出 , R M V s h和 T M V c在免疫反应方面存在明显不同 , R M V s h所
2期 长叶车前花叶病毒单克隆抗休的制备及在病毒分型中的应用 1 4 9
具有的 a抗原决定簇在 T M V c中不存在 , T M V c所具有的 b 、 c抗原决定簇在 R M V s h 中也 没
有 。 这种差异是由于组氛酸和甲硫氨酸的出现还是 由于其他原因所造成尚不清楚 , 有 待 深
入研究。
本研究确定的 a 、 b 、 。 3个抗原决定簇与张成良等人〔 16 〕报 道 的 T M V S 个 抗 原决定簇
( A ~ H ) 可能有联 系 。 据其特异性 , b抗原决定簇与T M V 的G抗原决定簇相似 。 由于 R M V
和 T M V颗粒表面的抗原决定簇较多 , 仅根据目前所得 5个细胞株的 3个抗原决定簇划分血清
型是有较大的局 限性的 , 需要建立一整套的杂交瘤细胞株 , 才能对病毒顺粒的抗原决定簇进
行 全面测定 , 使 R M V和 T M V的血清型划分更加完善 , 更加合理 。
参 考 文 献
〔 z 〕 张成良等 : 病毒学报 , 1 · 2 5 3 , 2 9 8 5
〔 2 〕 B r玉a n d J P e t a l : J V i r o l M吐卜, 6 . 2 9 3 , 19 8 2
〔 3 〕 D i e t z g e n R G e t a l . A r e h V ir o l , 7` t l , 7 , 1 9 8 2
〔 4 〕 H s u H T e t a l : P五y t o P a t五0 10盯 , 7 4 . 6 0 0 , 1 98 `
〔 6 〕 H a l k E L e t a l : P h y t o p a t bO l o g y , 7 4 . 36 7 , 19 a 4
〔 6 〕 H s u H T e t a l : P h y t o P a t h o l o g了, 7 5 . , 78 , 1 98 5
〔 7 〕 T r e m a i n e J H e t a l . V ir o l o g y , 1 4 ` . 8 0 , 19 8 5
〔 8 〕 T r e m a i n e J H e t a l : P h y t o P a t h o l o g y , 7 5 , 12 0 8 , 19 8 5
〔 9 〕 盛方镜等 : 浙江农业大学学报 , 9 , 3 9 , 1 9 83
〔 20 〕 H a r r i s o n B D 一 D e s e r ip t i o n s o f P la n t V ir . s e s , S e t 。 , N o . z` 2 , 1 0 7 5
〔 1 1〕 徐来升等 . 上海农业科技 , 3 . 28 , 1 9 80
〔 12 〕 E M BO , S K M B , OC u r s e : H y b r i d o m a T ec il o i q u e s , P . 5 , B a s e l , 场 8 0
〔 1 3 〕 朱培坤著 : 免疫酶技术 , 第 1 09 页 , 山东科学技术出版社 , 19 83
〔 1 4 〕 P e l h a m H . A n n A PP I B i o l , 7 1 , 2 19 , 19 7 2
〔 1 5 〕 郁操国等 : 病毒学集刊 , 1 . 1 2 9 , 1 9了2
〔 2 6 〕 张成良等 . 病毒学杂志 , 1 · 2 1 8 , 1 9. 5
P RO D U C T 1ON O F MONO C LONA L AN T IBO D IE S T O R IB G RA S S
MO SA IC V IR US AN D AP P L IC A T 1ON IN S E R O T Y P IN G
Z h a n g Y
o n g p i n g l L i D e b a o l L i G
u a n g 恶
F i
v e s t a b l e h y b
r i d o m a e e l l l i n e s ( R m z
,
R m Z
,
R m 3
,
R m 4 a n d R m s )
w h i。 h s e C r e t e m o n o e l o n a l a n t i b o d i e s o f r i b g r a s s m o s a i e v i r u s ( R M V ) a
n d /
o r
t o b a e e o m o s a i e v i r u s ( T M V ) w
e r e p r o d
u e e d b y f u s i n g s p l e e n e e l l
s o f m i e e
i m m u n i z e d w i t h e i t h e r RM V h a o r a m i x t u r e o f RM V h a
,
T M V e a n b T M V b e
一 t
t o m o u s e m 了e l o m a e e l l l i n e S p刀。 一 A g l 4 . I t w a s f o u n d t h a t t h e f i v e m o n o e l o n a l
a n t i b o d i
e s r e p r e s e n t e d t w o i s o t y p e s o f m u r i n e a n t i b o d i e s
,
Ig G
: ` a n d I g G 一
H i g h
一 t宜t e r e d a s e i t i e f l u i d w a s p r o d u e e d w i t h a l l o f t h e h了b r i d o m a s .
T h r e e a n t i g e n i e d e t e r m i n a n t s (
e p里t o p e s ) , s i x s e r o t y p e s w e r e p r o p o s e d b y
t h
e a u t h
o r s a f t e r t e s t i n g t h e s e m o n o e l o n a l a n t i b o d i e s w i t h 15 i
s o l a t e s o f
R M V a n d T M V
.
S e r o t y p e l ( T M V b
e一 t a n d T M V n a
一 L : ) h a
s a t l e a s t t il
e d e t 。 -
r 。 派n a n t s a , b a n d e , S e r o t了P e l ( T M V e , T M V g u 一 t a n d T M V b e 一 : ) t h e d e t e -
10 6病 毒 学 报 3卷
rm ina nt sb a nd
e, S e r o t y p e s l ( T M V b
e一 1 . : )
, 那 ( R M V h a , RM V s h , T M V 一 I
a n
d T M V n a 一 B Z ) a
n d V ( T M V
n o 一。 , T M V s h 一。 , T M V x i一0 a n d T M V 一 I ) h a v e
t h
e d e t e r m i n a n t s e
, a a n d b
, r e s p e e t i v e l y , S e r o t y p e 砚 ( T M V s h一 1· 2 ) , h o w e -
v e r , d o e s n o t h
a v e a n 了 o f t h e s e d e t e r m i n a n t s , p r o b a b ly h a s d e t e r m i n a n t s o t -
h e r t h a n t h e a
,
b a n d e
.
T h e p o t e n t i a l v a l u e o f t h e m o n o e l o n a l a n t i b o d i e s
i n v i r u s r e s e a r e h 15 d i s e u s s e d
.
Ke y w o r d s : R i b g r a s s m o s a i e v i r 胜 5 M o n o e l o n a l a n t i b o d y A n t i g e n i e
d
e t e r m i n a n t S e r o t y P e
1
。
Z h `了l’ 口 . 口 月 g r i e . l f“ r a l U . `。 ` r s f f y , H a . g z h o u
2
.
2 几` j i o ” 夕 A e a de m y 0 1 材 e d` c i . , , H o . g 苦h o “
在流行性非甲非乙型肝炎病人粪便中检出
疑似非甲非乙型肝炎病毒
刘占娥 , 热西担 , 曹学义 , 庄 辉 . 王光明 . 刘崇柏`
流行性非甲非乙型肝炎首先在印度发现 ( K h u r o , M . S 、 : A m . J . M o d . , “ : 81 8 , 1 . 80 ) , 我国新派
南部地区自 1 984 年开始相继发生流行 (刘玉璋等 : 中华预防医学杂志 , 20 : 2 09 , 1 9 8 6 ) . 1 9 86 年 1 1月~ 1 9 8 7
年 4月 ,在和田地区洛甫县又发生了局部爆发流行 .经排除甲、 乙型肝炎 , 巨细胞病毒 ( CM V )和 E B 病 毒感染
后 ,证明为一次流行性非甲非乙型肝炎。患者主要为青壮年 。 在流行区采集急性斯病人粪便 , 用病人恢复期
血清做免疫电镜 ,在甲 、 乙两名病人粪便中查见有清晰抗体桥的直径盯 ~ so n m的廿面体病毒孩粒集落 .
病人甲为女性 , 26 岁 , 1 9 8 6年 1 1月发病 . 肝区疼痛 , 肝大 ,有昵显的消化道 症状 . S G P T 1 6 7。单位 , 黄
疽指数50 单位 . 诊断为急性黄疽型肝炎 . 1 1月 1 6日采便 。 病人乙 , 女 , 16 岁 . 全家 6人发病 , 本人 1月 6 日发病 ,
黄疽型 . 发病前 6天开始采便 . 两名病人急性期血清 H B认 g ( 一 ), 抗` H B o Ig M ( 一 ) ,抗一 H人 V 坛M (一 ) ,
C M V I g M及 E B V I` M 均 ( 一 ) 。
取病人粪便悬液 , 4 O0 r/ m in 离心 s0 分钟 , 弃沉佳 , 上清 1。 。。。 r/ 二 iu 离心 / 1小时 , 弃沉遭 , 上清再
以 4。 。。。/ 二 in 离心 4 小时 , 沉渣 50 倍浓 缩 . 用甲病人发病前和恢复期血清与甲乙两病人的粪便制作免疫
复合物 , 电镜下可见直径 27 ~ 30 n m 的 廿面体病毒颗粒集落 ( 右图 ) , 抗体桥在恢复期血清清晰可见 , 而
在发病前血清则无 .
将此两例阳性大便悬液和正常人大便悬液分别接种人胚肾原代单层
细胞 、 人胚肺细胞和但河猴肾原代细胞 , 以接种脊盆灰质类病 毒为对照 ,
3 7
.
C培养 14 天 , 冻融后盲传一代 , 观察 1。天 . 对照组 24 小时即出现细胞
病变 , 实验组却无细胞病变 . 用此两例 阳性粪便抗原 , 经脑腹 联合途径
接种一日岭乳小白鼠 , 观寮21 天 , 无异常病理反应 。 用标准抗~ H A V包
被康乙始板孔 ,加入阳性粪便抗原 ,再加抗一H A v- H R P标记物进 行醉联
检测 , 结果阴性 . 以甲型肝炎抗原取代粪便抗原 , 反应为阳性 . 实验提
示粪便中的病毒可能是流行性非甲非 乙型 肝 炎病毒 . 动物试验和血清流行病学研究正在进行中 .
1
. 新. 维晋尔自治区卫生防疫站 2 ,北京医科大学 3 ,中国医学科学院夹验动物中心 4 ,中国预防医学科学院病毒所
收鹅日期 : 1 9. 7年一月 . 5日