全 文 ：第 2 1卷第 2期 复 旦 学 报 (自然科学版 ) 19 52年 6月
长叶车前花叶病毒的免疫电镜观察
朱培冲 蔡同润 张武宁 陆妙康 王鸣咬
长叶车前花叶病毒 (R 仍g忆 s 卫b sa 亿 玖。 s简称 丑万 ) V是危害上海郊区蔬菜较普遍
的病毒之一 本文简要报导关于电子显微镜观察 五卫7 与其相应免疫球蛋白反应后的形
态 .
材 料 和 方 法
1
. 丑月 fF (上海分离物 ,下同 )抗原的纯化 : 将感染 丑盯 F 的青菜病叶捣碎后 , 用正丁
醇净化 ,并用聚乙二醇 ( P E G , 6 0 0 0) 沉淀 ,再经超速离心得部分病毒液川 .
2
.
RM V 抗血清的制备及其免疫球蛋白的纯化 : 经鉴定 丑卫7 已纯化 , 对家兔进行
免疫 , 福氏非完全佐剂法 , 每周注射一次 , 连续六次 , 分别注射于兔后腿肌肉、 脚掌 、 胫脖 、
背肌等部位 . 停止注射后一周采血 , 测血清效价为 1 / 2 0 4 8 . 所得之抗血清用饱和硫酸按
沉淀法提纯免疫球蛋 白[,1 .
.3 RM V 与其相应免疫球蛋 白的反应 : 吸取 0 . 1血 浓 度 为 。 . s m g /m l 的 月城 f V 置
于小试管中 ,加入 。 . 2m l 浓度为 l m g /m l 的 五万厂 相应免疫球蛋 白 , 在室温下反应 1~ 2
小时后 , 置于冰箱过夜 .
4
. 从冰箱取出上述内有 RM犷 与其相应免疫球蛋 白反应液的小试管 , 可见壁底有大
量絮状沉淀 , 上层为清液 . 用手略微晃动 ,但不使溶液浑浊 ,然后用铜网沾取管中溶液 , 用
p H 7
.
2
,
4% P T A 负染 1~ 2 分钟 .
以同样负染方法作 R万V 原液镜样 .
用 H U一 1 1B 型电子显微镜观察 .
结果 和 讨论
R M F 的对照观察 : 电镜下可见 丑万 V 杆状质粒 (图 1 ) . 质粒形态与以往电镜观 察
所见之 丑万 V 完全一致 , 直径在 18 lun 左右
.
R MV 与其相应免疫球蛋白反应后的观察 : 电镜下可见不同于 R M V 对照原液中病
毒质粒形态的变形杆状质粒 (图 Z A 、 B ) . 主要特点如下 : 比 RM V 质粒粗 ,一般而言 , 要
本文 1980 年 12 月 6 日收到 .
第 2 期 朱培坤等: 长叶车前花叶病毒的免疫电镜观察
图 I R卫V 杆状质粒( x10 00 00 )
( A )( B )
图 Z R卫V 与其相应免疫球蛋白反应后的形态 ( x10 0 00 0 )
加粗 1 /4 左右 , 变形杆状质粒的直径大多为 24 mn 左右 , 在变形杆状质粒周围出现具 有
一定电子密度的斑点 ,有的明显 ,有的模糊 ,情况不一 变形杆状质粒大多比较短一些 .
鉴于上述状况 ,我们认为免疫球蛋白与其相应的 丑卫7 抗原的反应 ,使 R M V 吸附了
抗体蛋白质 , 因而变粗 ,又由于抗原决定基位于组成病毒外壳蛋白亚单位的肤链的一定的
氮基故部位 .3[ , 因此免疫球蛋白与 月卫下 的结合反应是有部位选择的 , 故在电镜观察时见
复 旦 学 报 ( 自然 科 学版 ) 第 2 1卷
到变形杆状质粒周围有一定电子密度的斑点 , 即吸附上去的免疫球蛋白 ; 另外可以设想 ,
似有可能由于免疫球蛋白的吸附 , 使得原来空间构型较为稳定的病毒质粒在其自身构型
上发生力的不平衡性 ,从而使得 丑卫下 变形质粒比 丑卫下 易断裂 , 因此使得变形杆状质粒
大多比较短一些 . 另外可见病毒通过抗体蛋 白相互粘连的现象 .
国外报道的病毒与其相应免疫球蛋白的反应 , 常经超速离心后再进行电镜观察〔` 〕 .本
工作省略了这一步 , 同样可以观察到病毒与其相应免疫球蛋白反应后的形态 . 应用时不经
超速离心 ,会使血清中的其他蛋 白成分出现在电镜视野中 ,但不影响观察结果 . 由于病毒
R M V 与其相应免疫球蛋白反应后直径一般能加粗 1 / 4 左右 , 这使电镜观察病毒的灵 敏
度有所提高 . 另外 , 本工作为研究 丑卫7 质粒与其抗体的作用提供了一个方法 .
参 考 文 献
仁1 〕 徐来升等 ,上海农业科技 , 3 ( 198 0 ) 28 .
仁2 〕 朱培坤 , 上海农业科技 , 5 ( 19 80 ) 17 .
「3 ] 林学颜 ,免疫学基础 ,福建科学技术出版社( 198 0 )28 .
[ 4 」 L . J . S : i f e t a l . , A , . J . V e t . R es . , 38 ( 197 7 ) 13 ·
O B S E R V A T IO N S O N T H E R IB G R A S S M O S A IC V I R U S W I T H
E L E C T R O N M IC R O S C O P E A F T E R IM M U N O R E A C T I O N
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