全 文 ：北方园艺２０１２（０７）：１２３～１２５ ·生物技术·
第一作者简介：张丹（１９８６－），女，山西运城人，在读硕士，现主要从
事组织培养方面的研究工作。
责任作者：康永祥（１９６３－），男，陕西乾县人，硕士，副教授，硕士生
导师，现主要从事树木学研究工作。
基金项目：林业公益性行业专项资助项目（２００８０４０１０）。
收稿日期：２０１２－０１－１１
毛梾初代培养影响因素研究
张 　 丹，康 永 祥，薛 丽 艳，叶 新 华
（西北农林科技大学 林学院，陕西 杨凌７１２１００）
　　摘　要：以毛梾茎段为外植体，研究了不同消毒方式、不同基本培养基类型、不同取材时间和
不同激素组合对毛梾初代培养的影响。结果表明：０．１％氯化汞１０ｍｉｎ取得了比较理想的消毒效
果，污染率和褐化率均较低；ＭＳ培养基为较适宜的初代培养基，其萌发时间、生长状况均优于其
它培养基；外植体在ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ上生长最好。
关键词：毛梾；初代培养；影响因素
中图分类号：Ｓ　７９２．１１９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１２）０７－０１２３－０３
　　毛梾（Ｃｏｒｎｕｓ　ｗａｌｔｅｒｉ　Ｗａｎｇｅｒ．）为山茱萸科梾木属
落叶乔木，又名车梁木、小六谷。分布于山东、河北、河
南、江苏、安徽、浙江、湖北、湖南、山西、陕西、甘肃、贵州、
四川、云南等省。喜阳、耐旱、耐寒，能耐－２３℃的低温，
在自然界常散生于向阳山坡及岩石缝间。用种子繁殖，
４～６ａ可开花结实。枝叶茂密、白花可赏，也可栽作行
道树用。木材坚重，供作车辆、家具等用；种子含油
３０％～３５％，榨油可以食用和作精密机械如钟表等的润
滑油；树皮及叶可提栲胶；花为蜜源植物［１］。由此可见，
毛梾是一种不可多得的园林绿化树种和木本油料树种，
经济性状非常明显。
能源问题目前已成为一个全球性的问题，煤炭、天
然气、石油等能源是有限的，而太阳能、风能等新能源虽
然取之不尽，但是其生产与利用又难以控制，不断开发
新能源，用可再生能源来取代有限的石化能源是非常必
要的［２－３］。我国人口多耕地少，食用油进口量还在逐年
上升，不可能仿效欧美等发达国家大力种植油料作物
（油菜、大豆等）的方式来发展生物柴油工业［４－８］。但是我
国山地资源丰富，木本油料植物又具有野生性、耐旱、耐
贫瘠等优点，一次栽植，多年受益。毛梾就是一种非常
优良的木本油料树种，经济前景非常广阔。目前，毛梾
的繁殖方式主要是种子繁殖，但种子繁殖率低，出苗不
齐，繁育时间长；虽然可以扦插育苗，但是存活率低，生
根也非常困难，又受到了季节和资源的限制，所以就需
要一种行之有效的方法来进行繁育。组织培养简单、迅
速、繁殖速度快，可以极大的缩短木本植物的周期，有利
于植物的推广和规模化生产。该试验通过对影响毛梾
初代培养的因素进行探索和分析，寻求毛梾初代培养最
适宜的培养条件，旨在为今后建立稳定而高效的毛梾组
织培养技术体系提供依据和参考。
１　材料与方法
１．１　试验材料
试验材料来自陕西省杨凌示范区西北农林科技大
学林学院毛梾资源圃，外植体采自２ａ生毛梾实生苗的
当年生枝条。
１．２　试验方法
１．２．１　外植体的处理和消毒　选择生长健壮、病虫害少
的植株，剪取当年生的枝条，立即带回实验室，剪去叶
片，用牙刷蘸洗衣粉水刷洗表面，截取枝条（基部、中部、
梢部），剪成１．５ｃｍ左右的茎段，流水冲洗１２ｈ左右，采
用６种消毒处理（表１），各处理均用无菌水冲洗５次，然
后将茎段两侧与消毒液接触的部位切掉，切成１ｃｍ左
右的茎段，接种到ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　１ｍｇ／Ｌ
的培养基中。每升培养基均添加琼脂６ｇ，蔗糖３０ｇ，ｐＨ
５．５～６．０，１２１℃灭菌２０ｍｉｎ（以下培养基琼脂、蔗糖含
量、ｐＨ、灭菌方法均相同）。每个处理接１Ｌ培养基，每
瓶接种１个茎段，３次重复。７ｄ后观察、记录外植体生
长情况，统计外植体的污染率和褐化率。
表１ 不同的消毒方法
处理
消毒方法／ｍｉｎ
７５％酒精 ８４消毒液 ０．１％氯化汞
１　 ０．５　 ５　 ５
２　 ０．５　 １０　 ５
３　 ０．５　 １５　 ５
４　 ０．５ － ５
５　 ０．５ － １０
６　 ０．５ － １５
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·生物技术· 北方园艺２０１２（０７）：１２３～１２５
１．２．２　不同基本培养基对初代培养的影响　采用 ＭＳ、
１／２ＭＳ、ＷＰＭ　３种不同类型的培养基，不添加任何激素，
以茎段为外植体进行培养。每个处理接１Ｌ培养基，每
瓶接种１个茎段，３次重复。７ｄ后观察、记录外植体生
长情况，从外植体开始萌发时间、增殖等方面来进行
比较。
１．２．３　不同取材时间对初代培养的影响　从２０１０年９
月份开始每个月都采集毛梾当年生茎段为外植体，接种
到ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　１ｍｇ／Ｌ中。每次接１Ｌ
培养基，每瓶接种１个茎段，３次重复。７ｄ后观察、记录
外植体生长情况。依次筛选最适宜的取材时间。
１．２．４　不同激素组合对初代培养的影响　采用Ｌ９（３３）
正交表进行正交实验，以ＭＳ为基本培养基，探索３种植
物激素及其浓度对毛梾初代培养的影响（表２）。３次重
复，１个月后观察、记录外植体生长情况，统计诱导率。
表２ 正交实验设计激素浓度
浓度
激素／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ　 ＮＡＡ　 ＩＢＡ
１　 ０．１　 ０．１　 ０
２　 ０．５　 ０．３　 ０．１
３　 １．０　 ０．５　 ０．５
２　结果与分析
２．１　不同消毒处理对外植体的影响
用不同消毒方法处理外植体，初代培养７ｄ后，由表
３可看出，５号处理污染率和褐化率相对是比较理想；６
号处理污染率很低，但是褐化率非常高；１～４号处理污
染率非常高，培养基上长有黄色、黑色等颜色的霉菌，外
植体上出现白色的菌丝，并且逐渐增大，也有少部分培
养基是细菌污染，出现白色的脓液，结果表明，毛梾外植
体茎段适宜的消毒方法是０．１％氯化汞消毒１０ｍｉｎ
左右。
表３ 不同消毒方法的消毒效果
处理
消毒方法／ｍｉｎ
７５％酒精 ８４消毒液 ０．１％氯化汞
污染率／％ 褐化率／％
１　 ０．５　 ５　 ５　 ８１．７　 ４．２
２　 ０．５　 １０　 ５　 ８０．８　 ２．５
３　 ０．５　 １５　 ５　 ７４．２　 ５．８
４　 ０．５ － ５　 ７９．２　 ４．２
５　 ０．５ － １０　 ４２．５　 ４５．０
６　 ０．５ － １５　 ２７．５　 ６３．３
２．２　不同基本培养基对毛梾初代培养的影响
采用３种不同培养基处理培养７ｄ以后，由表４可
看出，ＭＳ培养基效果较好，在无任何激素处理的情况
下，外植体生长状况良好，部分接种的茎段开始慢慢膨
大并萌发，叶片缓慢展开；ＷＰＭ培养基次之；１／２ＭＳ培
养基诱导时间最长，结果表明，ＭＳ培养基是毛梾初代培
养最适宜基本培养基。
表４　基本培养基类型对初代培养的影响
培养基 萌发时间／ｄ 生长状况
ＭＳ　 ５ 萌发早，生长健壮
１／２ＭＳ　 １５ 生长不良
ＷＰＭ　 ９ 萌发较早，生长较好
２．３　不同取材时间对初代培养的影响
由图１可看出，取材时间对培养效果有一定的影
响，在４～６月取材培养效果较好，主要表现在污染率、褐
化率和存活率上。在４～６月取材，外植体较幼嫩、易消
毒，污染率和褐变率低，接种后存活率高，长势快、生长
能力强。冬季是取材最不适宜时间，此时所取材料还需
要解除休眠，而且消毒困难，容易发生污染和褐变，存活
率低。因此，４～６月是毛梾组培快繁取材最适宜时间。
图１　不同取材时间对毛梾初代培养的影响
２．４　不同激素组合对初代培养的影响
由表５可知，用不同激素组合处理，接种１个月后
统计结果，发现６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＩＢＡ均能诱导茎段萌发，但
各自诱导能力存在一些差异。
表５ 不同激素组合试验结果
处理
激素／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ　 ＮＡＡ　 ＩＢＡ
接种外植
体数量
诱导芽数
／个
诱导率
／％
１　 ０．１　 ０．１　 ０　 １２０　 １６　 １３．３
２　 ０．１　 ０．３　 ０．１　 １２０　 ５　 ４．２
３　 ０．１　 ０．５　 ０．５　 １２０　 ５　 ４．２
４　 ０．５　 ０．１　 ０．１　 １２０　 ２２　 １８．３
５　 ０．５　 ０．３　 ０．５　 １２０　 １７　 １４．２
６　 ０．５　 ０．５　 ０　 １２０　 １９　 １５．８
７　 １．０　 ０．１　 ０．５　 １２０　 ７　 ５．８
８　 １．０　 ０．３　 ０　 １２０　 ４　 ３．３
９　 １．０　 ０．５　 ０．１　 １２０　 ５　 ４．２
　　由表６可知，６－ＢＡ的诱导作用达到显著，ＮＡＡ和
ＩＢＡ的诱导作用不显著，３种激素作用的强弱依次是：
６－ＢＡ＞ＮＡＡ＞ＩＢＡ。处理４生长最好，生长旺盛，颜色
嫩绿，叶片舒展。其它处理长势较弱，叶片呈卷曲状，几
　　　表６ 方差分析
激素 ＳＳ　 ｄｆ　 ＭＳ　 Ｆ　 Ｆ０．０５
６－ＢＡ　 ２２２．５７　 ２　 １１１．２９　 ２８．７６　 １９．００
ＮＡＡ　 ４７．４４　 ２　 ２３．７２　 ６．１３
ＩＢＡ　 １１．７７　 ２　 ５．８９　 １．５２
误差 ７．７４　 ２　 ３．８７
２８９．５２　 ８
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乎无伸长生长，有的处理有很多茎段没有萌发。６－ＢＡ、
ＮＡＡ、ＩＢＡ　３种激素均能诱导茎段出芽，但各自诱导能
力却存在很大差异。６－ＢＡ的诱导能力比较强，但高浓度
的植物激素反而抑制了生长。
３　结论与讨论
３．１　消毒方法的选择
外植体消毒成功与否是建立组培快繁体系很重要
的一个条件。试验中采用０．１％氯化汞消毒１０ｍｉｎ取
得了不错的消毒效果。６号处理褐化率高的原因可能是
消毒剂处理时间过长，产生了毒害作用。总得来说毛梾
的污染率还是比较高，原因可能是一方面木本植物生长
周期长，次生代谢物分泌较多，而且毛梾自身覆盖有一
层绒毛，容易滋生细菌，且不易消除；另一方面外植体采
集于野外，自身携带的菌类比较多［９］，而在组织培养中
由于材料内部（细胞内或细胞间）的内生细菌也不能被
一般的表面灭菌方法所清除，也会引起培养材料的污
染；此外消毒剂处理时间也不能过长，会对植物组织和
细胞有杀伤作用，外植体会吸收或者残留部分重金属而
死亡，酒精也能导致外植体烧苗而死亡［１０］。
３．２　基本培养基对初代培养的影响
不同种植物对培养基的需求也不相同，只有选择适
宜的培养基才能保证培养材料的生长。试验结果表明，
ＭＳ培养基较适宜于毛梾的组织培养，其各项指标均高
于１／２ＭＳ、ＷＰＭ。这和前人的研究结果较为一致，木本
植物组织培养中应用最为广泛的是ＭＳ培养基，它的无
机盐（如钾盐、铵盐及硝酸盐）含量均较高，微量元素种
类较全，浓度也较高，我国近年来在树种成功的离体培
养中，多数选用ＭＳ培养基［１１］。
３．３　不同取材时间对初代培养的影响
取材时间对培养效果有一定的影响，４～６月份是毛
梾的生长季节，新的枝条开始萌发，所采集外植体比较
幼嫩，带菌较少，较短的消毒时间就能达到很好的效果，
毒害作用也相对减弱。木本植物在冬季要进行休眠，枝
条不易解除休眠，而且也不易消毒，消毒时间过长，植物
大都发生褐变导致死亡。
３．４　不同植物激素对初代培养的影响
正交实验法要求任意因素都是全面试验，而且试验
点的分布也是均衡的。该试验考察了３种植物激素３
个浓度组合的９组试验，每组试验都有很强的代表性，
能够比较全面地反映优选区内的大致情况。在只有１～
２个因素起主要作用，而试验之前又不知道哪个因素起
主要作用的情况下，正交实验法能保证主要因素的各个
可能搭配都不会漏掉［１２］。通过方差分析，看出处理４是
最佳组合，萌发时间早，长势好，诱导率也高。另外，在
１Ｌ培养基中添加２ｇ　ＰＶＰ或者２ｇ活性炭对褐化现象
有一定的抑制作用。外植体生长一段时间，叶片发生黄
化蜷曲现象，此时将外植体下端发黑的部位切除并转接
有一定的抑制作用。
综上所述，该试验通过对消毒方式，培养基，取材时
间以及植物激素４个方面的研究，对毛梾初代培养的影
响因素进行了初步的研究，为将来建立一整套组培体系
奠定了一定基础，还存在一些问题，有待今后进一步的
研究探讨。
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