全 文 ：药物分析
尖嘴林檎叶药材质量标准的初步研究
王长青，杨丽莹，陈艳芬，李书渊
(广东药学院 中药学院，广东 广州 510006)
摘要:目的 建立尖嘴林檎叶的质量标准，以评价和控制其质量。方法 采用薄层色谱法对尖嘴林檎叶进
行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定尖嘴林檎叶中槲皮素的质量分数。结果 建立了尖嘴林檎叶中芦
丁、槲皮素的薄层色谱鉴别方法;建立了高效液相色谱法测定尖嘴林檎叶中槲皮素的质量分数。槲皮素
在 0． 086 7 ～ 0． 607 6 μg范围内呈良好的线性关系，相关系数 r = 1(n = 7) ，平均加样回收率为 97． 0%，
ＲSD为 2． 4%。结论 建立的方法简便、准确，为尖嘴林檎叶的药材鉴定、质量标准完善提供了依据。
关键词:尖嘴林檎;薄层色谱;高效液相色谱;芦丁;槲皮素
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A doi:10． 3969 / j． issn． 1006-8783． 2013． 06． 009
文章编号:1006-8783(2013)06-0612-03
Study on the quality standard of Malus doumeri (Bois)A． Chevalier
WANG Changqing，YANG Liying，CHEN Yanfen，LI Shuyuan
(School of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
Abstract:Objective To establish the quality standard of Malus doumeri (Bois)A． Chevalier to evaluate and
control its quality． Methods TLC identification was employed，and the content of quercetin was determined by
HPLC． Ｒesults Quercetin and rutin’s TLC identification was established． The content of quercetin in Malus
doumeri (Bois)A． Chevalier was determined by HPLC． The calibration curve was linear in the range of
0. 086 7 － 0． 607 6 μg(r = 1，n = 7)and the average recovery was 97． 0% with ＲSD of 2． 4% ． Conclusion
These methods were simple and accurate，which could be used for the identification and quality control of Malus
doumeri (Bois)A． Chevalier．
Key words:Malus doumeri (Bois)A． Chevalier;TLC;HPLC;rutin;quercetin
收稿日期:2013-09-06
基金项目:国家自然科学基金(81302894) ;广东省自然科学基金(S2012040006768) ;广州市荔湾区科技计划项目
(20134815026)
作者简介:王长青，广东药学院 2009 级本科生;通信作者:李书渊(1963 －) ，女，教授，从事中药物质基础和质量标准研究，
Email:1018720684@ qq． com。
网络出版时间:2013-12-04 15:26 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /44． 1413． Ｒ． 20131204． 1526． 006． html
尖嘴林檎叶为蔷薇科苹果属植物尖嘴林檎
Malus doumeri (Bois)A． Chevalier 的干燥叶。尖嘴
林檎叶在粤北地区做凉茶饮用，称大益茶、山楂叶，
主治脾胃虚弱、食积停滞，有良好的保健功效。目
前，国内外针对尖嘴林檎叶的研究相对较少，主要是
有关其抗衰老功效 ［1］、防腐保鲜功效［2］以及抑菌作
用方面的研究［3］。林檎的种类繁多，使得尖嘴林檎
叶市场上流通的尖嘴林檎叶药材较为混杂。关于尖
嘴林檎叶的化学成分研究及质量评价研究尚相当欠
缺，给林檎的应用推广带来较大局限性。本试验通
过薄层色谱法和高效液相色谱法鉴定并测定其所
含的主要化学成分，为其质量标准及质量控制提
供依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
DFT-200 型粉碎机(林大机械有限公司) ;
BP211D 型十万分之一电子分析天平(赛多利斯科
学仪器有限公司) ;AYl20 型万分之一电子分析天平
(日本岛津公司) ;HH-4 型数显恒温水浴锅(富华仪
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Dec． 2013，29(6)
器有限公司) ;DGX-9143B-2 电热恒温干燥箱(福玛
实验设备有限公司) ;SK250HP超声波清洗器(上海
科导超声仪器有限公司) ;LC-20AT 高效液相色谱
仪(日本岛津公司)。
1． 2 试药
槲皮素对照品(批号:100081-200907，购于中国
药品生物制品检定所) ;芦丁对照品(批号:100080-
200306，购于中国药品生物制品检定所)。3 批药材
分别经中国科学院华南植物园叶华谷研究员鉴定为
蔷薇科苹果属尖嘴林檎 Malus doumeri(Bois)A．
Chevalier的叶，详见表 1。
水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其余为分析纯。
表 1 3 批尖嘴林檎叶药材信息表
Table 1 Sources of 3 batches of Malus doumeri (Bois)
A． Chevalier
编号 购买地 产地
20120423 广东连南药材市场 广东
20130228 广东清平药材市场 广西
20130326 广东清平药材市场 广东
2 方法与结果
2． 1 芦丁的薄层色谱鉴别
2． 1． 1 供试品溶液的制备 取尖嘴林檎叶粉末 2 g，
加甲醇 20 mL，超声处理 25 min，滤过，滤液蒸干，残
渣加蒸馏水 15 mL，超声使其溶解，用石油醚萃取，
弃去石油醚层，水液浓缩至 2 mL，装入 D101 大孔吸
附树脂柱(内径为 1． 5 cm，柱高为 10 cm)上。用蒸
馏水 200 mL洗脱，直至洗脱液为无色时，弃去洗脱
液，换用 15%(体积分数)乙醇液 200 mL洗脱，弃去
洗脱液，继续用 30%(体积分数)乙醇液 100 mL 洗
脱。收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 2 mL溶解，作为
供试品溶液。
2． 1． 2 对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，加
甲醇制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为对照品溶液。
2． 1． 3 薄层色谱鉴定 分别吸取上述 2 种溶液 10
μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以甲醇-丙酮-水
(体积比 7∶ 5 ∶ 6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以
5%(质量浓度)AlCl3 显色剂。置紫外灯(365 nm)
下检视，供试品色谱在与对照品色谱相应位置上显
相同的淡黄色荧光斑点。见图 1。
2． 2 槲皮素的薄层色谱鉴别
2． 2． 1 供试品溶液的制备 取尖嘴林檎叶粉末 2 g，
加甲醇 20 mL，再加稀 HCl 5 mL，置水浴上加热回流
30 min，放冷，滤过，滤液浓缩至 2 mL，即得。
2． 2． 2 对照品溶液的制备 取槲皮素对照品适量，加
甲醇制成每 1 mL含 1 mg的溶液，作为对照品溶液。
4321
1 ～ 3．供试品溶液;4．芦丁对照品溶液。
图 1 芦丁的薄层色谱图
Figure 1 TLC chromatogram of rutin
2． 2． 3 薄层色谱鉴定 吸取上述 2 种溶液各 5
μL，分别点于同一以羧甲基纤维素为黏合剂的硅胶
G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(体积比 8∶ 2)为展开
剂，展开，取出，晾干，喷以 5%(质量浓度)AlCl3 溶
液。置紫外灯(365 nm)下检视，供试品色谱中，在
与对照品色谱相应位置上，显相同颜色荧光斑点。
见图 2。
4321
1 ～ 3．供试品溶液;4．槲皮素对照品。
图 2 槲皮素的薄层色谱图
Figure 2 TLC chromatogram of quercetin
2． 3 槲皮素含量的测定
2． 3． 1 供试品溶液的制备 取同一批次尖嘴林檎
叶药材粉末约 1 g，精密称定，置具塞平底烧瓶中。
精密加入甲醇-25%(体积分数，下同)HCl 溶液(体
积比 4∶ 1)25 mL，密塞，称定质量。置恒温水浴中加
热回流 1 h，立即冷却，再称定质量，用甲醇-25%HCl
(体积比 4∶ 1)混合溶液补足减失的质量。摇匀，滤
过，取续滤液，即得供试品溶液。
2． 3． 2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照
品 4． 0 mg，置 10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
摇匀。制成每 1 mL 含槲皮素 0． 4 mg 的对照品溶
液。精密吸取上述对照品溶液 1 mL，置 10 mL容量
瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每 1 mL含槲皮
素 0． 04 mg的对照品溶液。
316第 6 期 王长青，等．尖嘴林檎叶药材质量标准的初步研究
2． 3． 3 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:C18柱
(5 μm，250 mm ×4． 6 mm，Dikma Diamonsil ODS) ;流
动相:甲醇-0． 4%(体积分数)H3PO4 溶液(体积比
65∶ 35) ;检测波长:372 nm;流速:1. 0 mL /min;柱
温:30 ℃;进样量:20 μL。理论塔板数按槲皮素峰
算，应不低于 3 000。分别精密吸取对照品、供试品
溶液各 20 μL，依法测定。见图 3。
1
1
10 20 30 40 50 600
50250
t/min
U/
m
V
0
25
50
0
25
50
U/
m
V A
B
1．槲皮素。
图 3 槲皮素对照品(A)、供试品溶液(B)的 HPLC图谱
Figure 3 HPLC chromatograms of reference substance (A)
and sample (B)solution
2． 3． 4 线性关系的考察 分别精密吸取上述对照
品溶液 2、4、6、8、10、12、14 μL，依次注入液相色谱
仪，按“2． 3． 3”项下色谱条件测定峰面积。以峰面
积(Y)为纵坐标，槲皮素进样量(X)为横坐标绘制
标准曲线，得到槲皮素回归方程为:Y = 4． 213 334 ×
106X － 1． 014 6 × 104，r = 1(n = 7)。槲皮素进样量
在 0． 086 7 ～ 0． 607 6 μg范围内线性关系良好。
2． 3． 5 精密度试验 精密吸取“2． 3． 2”项下槲皮
素对照品溶液，按“2． 3． 3”项下色谱条件连续测定 6
次，记录色谱图。结果槲皮素峰面积的 ＲSD 值为
0. 13%，表明仪器的精密度良好。
2． 3． 6 稳定性试验 精密吸取供试品(批号:
20120423)溶液 20 μL，按“2． 3． 3”项下色谱条件，分
别于 0、2、6、12、24 h 进样测定，记录色谱图。结果
槲皮素峰面积的 ＲSD为 0． 12%，表明供试品溶液在
24 h内稳定性良好。
2． 3． 7 重复性试验 同为第一批的尖嘴林檎叶
(批号:20120423)药材粉末 6 份，按照“2． 3． 1”项下
方法制备供试品溶液，按“2． 3． 3”项下色谱条件分
别进样测定。结果槲皮素峰面积的 ＲSD为 1． 77%，
表明本方法重复性良好。
2． 3． 8 加样回收试验 取尖嘴林檎叶样品(批号:
20120423)6 份，各约 0． 05 g，精密称定。分别精密
加入槲皮素对照品 0. 243 mg，按照“2． 3． 1”项下方
法制备供试品溶液，按“2． 3． 3”项下色谱条件分别
进样测定。结果槲皮素的平均回收率为 97. 0%，
ＲSD为 2． 4%。见表 2。
表 2 尖嘴林檎叶中槲皮素的加样回收率试验结果
Table 2 Ｒesults of the recovery test of quercetin(n = 6)
编号
样品量 /
g
样品中的
量 /mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
1 0． 054 4 0． 152 0 0． 243 0． 397 8 100． 15
2 0． 050 2 0． 140 2 0． 243 0． 375 5 96． 83
3 0． 050 9 0． 142 2 0． 243 0． 371 3 94． 28
4 0． 053 0 0． 148 1 0． 243 0． 382 1 96． 29
5 0． 052 1 0． 145 6 0． 243 0． 383 1 97． 74
6 0． 053 6 0． 149 7 0． 243 0． 381 6 95． 43
平均回收率 = 97． 0%，ＲSD = 2． 4%
2． 3． 9 样品测定 分别取尖嘴林檎叶粉末 3 批，按
“2． 3． 1”项下方法制备供试品溶液，按“2． 3． 3”项下
色谱条件分别进样测定。结果 3 批尖嘴林檎叶中槲
皮素质量分数分别为 2． 79、2． 79、2． 77 mg /g。
3 讨论
以甲醇-25%(体积分数)HCl溶液为溶剂，水解
提取槲皮素，能将黄酮苷充分水解，且提取率高。用
甲醇为溶剂，超声提取尖嘴林檎叶中的芦丁，经大孔
树脂柱采用不同体积分数的乙醇梯度洗脱，能使之
有效分离纯化。该法操作方便、耗时短，提取液杂质
质量分数低。
槲皮素为黄酮类化合物，是尖嘴林檎叶的活性
成分之一［4］，具有抑菌及抗氧化的作用。且槲皮素
在尖嘴林檎叶中质量分数较高，因此选择槲皮素为
含量测定的指标性成分。本研究建立的槲皮素
HPLC测定方法简便、可靠、重复性好，可用于尖嘴
林檎叶的质量控制。
参考文献:
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法的探讨［J］．分析试验室，2009，28:249 － 250．
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菌和清除自由基作用的研究［J］．天然产物研究与开发，
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(责任编辑:刘晓涵)
416 广东药学院学报 第 29 卷