全 文 ：2016年6月第22卷第11期 June.2016 Vol.22 No.11
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中药制剂与药理研究
*基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.81360668）
通讯作者：杨梅英，E-mail：115149469@qq.com
腺果蔷薇，维吾尔语名称为巴孜米畏丽克阿佐干，为蔷
薇科（Rosaceae）蔷薇属（Rosa）植物腺果蔷薇（Rosa fedtschenkoana
Regel.）。腺果蔷薇在我区沿天山一带山区均有分布，生长在
山地草原带的阳坡沟旁或灌木丛中。苏联中亚及蒙古也有分
布。腺果蔷薇的药用部位为根、叶和果实，是维吾尔医的常用
药材，其根能活血化瘀，祛风除湿，解毒收敛，杀虫；叶能解毒
消肿；果实能治疗神经衰弱，高血压病，神经性头痛，脾虚泄
泻，慢性肾炎；健脾胃，助消化，治疗肺虚喘咳，自汗盗汗，崩
漏带下[1]。经化学成分预试研究，腺果蔷薇中主要含有大量的
黄酮类、酚类和有机酸类等成分。本文旨在通过采用比色法
测定维吾尔药腺果蔷薇不同部位的总黄酮的含量，以期为进
一步开发和利用其药用价值提供数据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 ME204型电子天平（梅特勒-托利多）；岛津UV-
2501PC紫外可见分光光度计（日本岛津有限公司）；HH-4数
显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）；AS1020OAD超声
波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）。
1.2 材料 腺果蔷薇，采自新疆伊犁地区，由新疆维吾尔自
治区药物研究所何江副研究员鉴定为蔷薇科植物腺果蔷薇
Rosa fedtschenkoana Regel.的根、茎、叶和干燥成熟的果实芦
丁对照品：购自中国药品生物制品检定所，批号为：100080-
200707；甲醇、乙醇等试剂均为分析纯。
维吾尔药腺果蔷薇不同部位
总黄酮含量测定*
耿 伟1，季晓娟1，艾尼娃尔·艾克木2，杨梅英1
（1.新疆医科大学第一附属医院药学部，新疆 乌鲁木齐 830000；
2.新疆医科大学药学院分析/药分教研室，新疆 乌鲁木齐 830011）
[摘要] 目的：测定维吾尔药腺果蔷薇根、茎、叶和果实中总黄酮含量。方法：采用单因素与正交实验确定最
佳提取工艺；采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定腺果蔷薇不同部位的总黄酮含量。结果：最佳提取工
艺为：乙醇浓度为60%，用量为药物重量的14倍，加热回流2h，2次。以芦丁为对照品求得线性方程为：Y=0.5281X-
0.0149（r=0.9998），线性范围为0.2~1.2mg/mL。结论：该提取工艺稳定可行，含量测定方法简便、灵敏、准确，可作
为腺果蔷薇中总黄酮的含量测定方法。
[关键词] 腺果蔷薇；总黄酮；提取工艺；含量测定
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2016）11-0036-04
Determination of C ntent of Total Flavones from the Plant
ofRosa Fedtschenkoana Regel.
GENG Wei1, JI Xiao-juan1, Ainiwaer AIKEMU2, YANG Mei-ying1
(1.The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi Xinjiang 830000 China；
2.Department of Pharmeceutical Analysis, Xinjiang Medical University, Urumqi Xinjiang 830011, China)
[Abstract] Objective: To determine the content of the total flavones from the roots, stems, leaves and fruits
of Rosa fedtschenkoana Regel. Methods: The best extraction technology was determined by orthogonal experiment
design; The content of total flavones was determined by absorption spectrometry with rutosids as reference sub－
stance. Results: Optimum extraction technology was as follows, 60％ ethanol, ratio of material to liquid 14 times,
and time of 2 h, twice. The standard to make the standard curve: y=0.5281X-0.0149(r=0.9998); the linear range
was 0.2-1.2 mg/mL. Conclusion: This method was simple, accurate and suitable for the quality control of the
flavonoids in Rosa fedtschenkoana Regel.
[Key words] Rosa fedtschenkoana Regel.; total flavones; extraction technology; contents determination
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2016.11.012
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2 实验方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品（120 ℃干燥
恒重后）10 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇适量，置于水浴上
微热使其溶解后放冷，加甲醇至刻度并摇匀。精密量取5 mL，
置于25 mL棕色量瓶中，加水至刻度并摇匀，即得（每1 mL水
中含芦丁对照品为0.2 mg）。
2.2 供试品溶液的制备 精密称取腺果蔷薇果实10 g，置
100 mL圆底烧瓶中，加入60%乙醇10倍量，加热回流提取1.5 h，
提取2次，趁热过滤，合并滤液，浓缩至干，加适量水溶解后定
容至50 mL，摇匀过滤。精密量取续滤液为1 mL，置于50 mL棕
色量瓶中，加水至刻度并摇匀，即得供试品溶液。
2.3 波长的选择 精密量取芦丁对照品溶液1 mL，供试品溶
液1 mL置50 mL棕色量瓶中，分别加水至6.0mL，加入5%NaNO2
溶液1 mL，混匀后放置6 min，加入10%Al(NO3)3溶液1 mL，摇匀
后放置6 min，加入4%NaOH试液10 mL，最后再加水至刻度，摇
匀后放置15 min，以相应试剂作空白，按照紫外-可见分光光
度法（《中国药典》2010年版一部附录VA）[2]，于400～600 nm波
长处扫描，对照品溶液和供试品溶液均在509 nm有较大吸
收。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察 精密量取0.2 mg/mL的对照品溶液1、
2、3、4、5、6 mL，分别置25 mL棕色量瓶中，加水至6.0mL，加入
5%NaNO2溶液1 mL，混匀后放置6 min，加入10%Al(NO3)3溶液
1 mL，摇匀后放置6 min，加入4%NaOH试液10 mL，最后再加
水至刻度，摇匀后放置15 min，以相应试剂作空白，按照紫外-
可见分光光度法（《中国药典》2010年版一部附录VA），于509
nm波长处测定吸光度，以浓度为自变量X，吸光度为因变量Y
进行线性回归，求得方程为：Y=0.5281X-0.0149（r=0.9998）。结果
表明：芦丁在0.008~0.048mg/mL范围内，线性关系良好。
2.4.2 精密度实验 分别精密吸取对照品溶液3 mL，均按照
“2.4.1”项下操作，于509 nm处测定吸光度，重复测定6次，结
果RSD%为0.55%（n=6），表明该法的精密度较好。
2.4.3 稳定性实验
2.4.3.1 显色稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液，均按
照“2.4.1”项下操作，每隔0.5 h测定一次，测定5次。测定结果
表明，供试品溶液显色后放置2 h内，测定结果无影响，但放置
超过2 h后导致测定结果偏低，因此供试品溶液应在显色后
2 h内测定完毕，放置2 h的RSD%为1.10%（n=5）。
2.4.3.2 样品稳定性实验 将同一供试品溶液分别冷藏避光
放置0、1、2、3、4、5 d，照按照“2.4.1”项下操作，测定吸光度。
RSD为0.67%（n=6），结果表明供试品溶液放置5 d对测定结
果无影响。
2.4.4 重复性实验 取同一批供试品6份，照样品的测定方
法项处理后，测定吸光度值，RSD%=0.42%（n=6），表明该法重
复性良好。
2.4.5 回收率实验 取1 mL已知总黄酮含量的样品制成供
试品溶液，精密吸取0.5 mL供试品溶液9份，分别精密加入高、
中、低不同浓度的芦丁对照品溶液适量，按照供试品溶液的
制备方法与测定方法测定吸光度值，测定结果为平均回收
率=100.96%，RSD%为0.89%（n=9）。（见表1）
表 1 回收率试验结果 （n=9）
序号 样品含量(mg) 对照品加入量(mg) 实测量(mg) 回收率(%)
1 0.4137 0.32 0.7383 101.45
2 0.4137 0.32 0.7345 100.27
3 0.4137 0.32 0.7364 100.86
4 0.4137 0.40 0.8216 101.99
5 0.4137 0.40 0.8197 101.52
6 0.4137 0.40 0.8159 100.57
7 0.4137 0.48 0.8898 99.20
8 0.4137 0.48 0.9030 101.96
9 0.4137 0.48 0.8974 100.77
2.5 提取工艺的考察
2.5.1 不同提取溶剂的考察 称取腺果蔷薇果实10 g，分别
用10倍量水，20%乙醇，40%乙醇，60%乙醇，95%乙醇加热回
流提取两次，每次1.5 h，过滤，合并滤液，浓缩近干，加水溶解
并定容至50 mL，作供试品溶液备用。（见图1）
图 1 不同提取溶剂总黄酮含量比较
由图1可知，比较不同浓度乙醇提取的总黄酮含量：水
提＜20%乙醇提取＜40%乙醇提取＜60%乙醇提取＜95%乙醇提
取，因此可确定提取溶剂为60%乙醇。
2.5.2 不同提取方法的考察 取腺果蔷薇10 g，用60%乙醇
采用回流、冷浸24 h、超声3种不同方法提取，过滤蒸干，用水
定容至100 mL，作供试品备用。（见图2）
图 2 不同提取方法总黄酮含量比较
由图2可知，比较不同提取方法提取的总黄酮含量：冷浸
提取＜超声提取＜回流提取，因此可确定加热回流提取效果最
佳。
2.5.3 提取温度的考察 选择不同提取温度50、60、70、80、
90℃，于60%乙醇加热，回流提取1.5 h，提取2次，趁热过滤后
合并滤液，浓缩至干，加适量水溶解并定容至50 mL，作供试
品溶液备用。（见图3）
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图 3 不同提取温度总黄酮含量比较
由图3可知，比较通过比较不同提取温度的总黄酮含量
可知：提取温度50℃＜60℃＜70℃＜90℃＜80℃，因此可确定最
佳提取温度为80℃。
2.5.4 提取工艺正交试验 为进一步优化提取最佳条件，根
据单因素试验结果，以60%乙醇为提取溶剂，选取提取时间
（A）、提取次数（B）、溶剂量（C）3个因素，运用L9（34）进行正交
实验。因素水平见表2。按“2.4.1”项下方法操作，于509 nm处
测吸光度，并计算总黄酮含量。实验结果见表3。采用方差分
析处理数据见表4，优选出最佳提取工艺。
表 2 因素水平表
水平 A提取时间(h) B提取次数(次) C溶剂量(倍) D空白
1 1 1 6 1
2 2 2 10 2
3 3 3 14 3
表 3 正交试验结果
试验号 A B C 总黄酮含量(%)
1 1 1 1 32.45
2 1 2 2 32.48
3 1 3 3 32.50
4 2 1 2 32.62
5 2 2 3 32.63
6 2 3 1 32.61
7 3 1 3 32.52
8 3 2 1 32.58
9 3 3 2 32.55
k1 32.48 32.53 32.55
k2 32.62 32.57 32.55
k3 32.55 32.55 32.55
极差R 0.14 0.03 0.01
表 4 方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 F值 P值 显著性
A 0.030188 2 498.98 0.002 **
B 0.001758 2 29.06 0.033 *
C 0.0000615 2 1.00 0.500
D 0.001614 2 26.68 0.036 *
误差 0.0000605 2
注：F1-0.05(2，2)=19.00，F1-0.10(2，2)=99.00
通过表3、表4的实验结果可知，各个因素对试验结果影
响程度依次为：A>B>D>C，提取时间对腺果蔷薇果实总黄酮
含量有极显著影响（P<0.01）。通过综合考虑，确定最佳因素水
平的组合为：A2B2C3，即：加入14倍量的60%乙醇，加热回流提
取2次，每次为2 h。
2.5.5 验证试验 精密称取腺果蔷薇3份，每份为10 g，按照
优选出的最佳提取工艺条件进行验证试验。（见表5）
表 5 验证试验结果
序号 总黄酮含量（%） 平均值（%） RSD%
1 33.696 33.949 1.288
2 34.454
3 33.696
2.6 不同部位腺果蔷薇的总黄酮含量测定 按正交试验得
到的工艺制备样品溶液，按照“2.4.1”项下方法显色，以相应
试剂空白为参比，测定腺果蔷薇根、茎、叶和果实中总黄酮的
含量。结果见表6。
表 6 腺果蔷薇不同部位总黄酮含量测定结果 （n=3）
不同部位 根 茎 叶 果实
总黄酮含量（%） 31.077 36.726 41.618 34.043
3 讨 论
目前尚未见有关维吾尔药腺果蔷薇的根、茎、叶和果实
的总黄酮含量测定方面的相关报道，因此本实验采用回流提
取，采用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法测定腺果蔷薇的总黄
酮含量，通过方法学考察，结果表明该法用于测定维药腺果
蔷薇中总黄酮含量，精密度、重现性和稳定性均符合含量测
定的技术要求，操作简便，可作为维药腺果蔷薇含量测定的
方法。
比较不同提取温度的总黄酮含量可知，并不是温度越高
提取率越高，当温度超过80℃时，总黄酮含量反而降低，因此
采用80℃回流提取效果最佳。
通过测定不同部位腺果蔷薇的总黄酮含量可知，腺果蔷
薇的根、茎、叶和果实中均含有总黄酮，其中腺果蔷薇叶的总
黄酮含量最高，其次为茎，含量均在30%以上。另外，通过文献
可知不同部位的腺果蔷薇功效不同[1]，说明化学成分亦有不
同，本文初步测定腺果蔷薇根、茎、叶和果实中总黄酮含量，
可为进一步的化学成分研究提供数据，并为进一步的开发利
用奠定基础。
参考文献
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表达的影响，疗效更好[11]，目前已经代替他莫
西芬成为一线治疗用药。但AI应用后，患者血中的雌激素水
平下降，易造成植物神经功能紊乱和骨关节症状，目前口服
AI治疗大多需要连续服药5～10年，其不良反应也会随着服药
时间而增加。而对AI引发的不良反应的治疗也存在矛盾，AI
引发的不良反应主要是由于雌激素下降引发，如补充雌激
素，则违背治疗的最初理念，因此临床多以心理疏导或对症
处理为主。
窦云[12]认为内分泌治疗后类更年期反应的主要因素为脾
肾亏虚、肾精不足、虚火上炎；万冬桂等[13]认为乳腺癌内分泌
治疗后骨质疏松肾虚为本，兼有脾虚，治益补肾健脾。本研究
中所用健脾益肾颗粒依据“肾为先天之本，脾为后天之本”的
理论组方，方中党参、白术健脾益气；枸杞子、女贞子、菟丝
子、补骨脂补肾温肾、填精益髓，整方合用可健脾益肾、扶正
培本。既可针对乳腺癌患者内分泌治疗后脾肾亏虚进行针对
性治疗，又为中药成药，免去了方剂煎煮的繁琐，患者服用方
便，易于接受，研究过程中顺从性好。刘浩等[14]采用健脾益肾
颗粒对前列腺癌去势术患者进行治疗，发现其有克服前列腺
癌术后耐药控制复发转移的功效。杨吉荣[15]应用健脾益肾颗
粒联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌，也发现其有减毒增效、
改善患者免疫功能的作用。
本研究显示，治疗组患者各项生活质量评分均高于对照
组，5年无病生存率高于对照组，类更年期反应和骨相关事件等
主要不良反应发生率低于对照组，说明健脾益肾颗粒可提高乳
腺癌5年无病生存率，改善生活质量，降低不良反应的发生率。
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