全 文 ：ＤＯＩ：１０．１３３５０／ｊ．ｃｊｐｂ．１４０５０５ ·论著·
翻白草油对ＲＳＶ感染宿主ＨｅＬａ细胞
Ｆａｓ／ＦａｓＬ蛋白表达的影响＊
刘蕾１，２，刘志新２，王淑湘２，谭晓梅 １，陈光２，王淑秋２，罗佳波１＊＊
（１．南方医科大学中医药学院，广东广州５１０５１５；２．佳木斯大学基础医学院，黑龙江佳木斯１５４００７）
【摘要】　目的　通过检测呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染宿主 ＨｅＬａ细胞Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白的变化，探讨翻白草油的抗
ＲＳＶ作用。　方法　用ＲＳＶ感染宿主ＨｅＬａ细胞，采用Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法求出ＲＳＶ对细胞半数感染量（ＣＣＩＤ５０）；将翻白
草油与 ＨｅＬａ细胞共孵育，ＭＴＴ法检测翻白草油对 Ｈｅｌａ细胞的毒性作用；选取最大无毒浓度的翻白草油和１００ＣＣＩＤ５０
的ＲＳＶ病毒进行抗病毒试验，在药物４种作用方式下（对ＲＳＶ病毒的直接灭活作用，在生物合成阶段对ＲＳＶ病毒的作
用，对ＲＳＶ病毒吸附的作用，药物预处理作用），采用免疫荧光和 Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ方法检测宿主 ＨｅＬａ细胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ蛋白
的表达。　结果　ＲＳＶ培养液对 ＨｅＬａ细胞中的毒力为１０５．８　ＣＣＩＤ５０／Ｌ；翻白草油对 ＨｅＬａ细胞的最小毒性浓度是０．１０
ｍｇ／Ｌ。翻白草油（除药物预处理作用方式外）Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白表达的荧光强度分别为１．８５１±０．０２２、１．８３０±
０．０４４、１．８０１±０．０３８和１．８３２±０．０３４、１．７６７±０．０２２、１．８１６±０．０２４，ＲＳＶ病毒对照组荧光强度分别为２．１１２±０．０４８
和１．９０４±０．０２５，翻白草油（除药物预处理作用方式）组与病毒组比较，宿主 ＨｅＬａ细胞Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白的表达显
著降低（Ｐ＜０．０５）；翻白草预处理组Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白表达的荧光强度分别为２．０９８±０．０７５和１．８８２±０．０５５，与
ＲＳＶ病毒对照组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。　结论　翻白草油在直接灭活阶段、病毒复制阶段、病毒吸附阶段
的抗ＲＳＶ作用与调节宿主 ＨｅＬａ细胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ蛋白的表达有关。
【关键词】　翻白草油；ＲＳＶ；ＨｅＬａ细胞；Ｆａｓ蛋白；ＦａｓＬ蛋白
【中图分类号】　Ｒ３７３．１　　　【文献标识码】　Ａ　　　【文章编号】　１６７３－５２３４（２０１４）０５－０４０３－０５
［Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ．２０１４Ｍａｙ；９（５）：４０３－４０７，ｉｎｓｉｄｅ　ｂａｃｋ　ｃｏｖｅｒ．］
Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ＦａｓＬ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎ　Ｈｅｌａ　ｃｅｌｓ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ
ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｃｙｔｉａｌ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
ＬＩＵ　Ｌｅｉ　１，２，ＬＩＵ　Ｚｈｉ－ｘｉｎ２，ＷＡＮＧ　Ｓｈｕ－ｘｉａｎｇ２，ＴＡＮ　Ｘｉａｏ－ｍｅｉ　１，ＣＨＥＮ　Ｇｕａｎｇ２，ＷＡＮＧ　Ｓｈｕ－ｑｉｕ２，
ＬＵＯ　Ｊｉａ－ｂｏ１　（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ
５１０５１５，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊａｍｕｓｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊａｍｕｓｉ　１５４００７，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｏｎ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｃｙｔｉａｌ　ｖｉｒｕｓ
（ＲＳＶ）ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｂｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ＦａｓＬ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｉｎ　Ｈｅｌａ　ｃｅｌｓ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＲＳＶ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｆｔｅｒ
ＨｅＬａ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＲＳＶ，ｖｉｒａｌ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｗａｓ　ａｓｓｅｓｓｅｄ　ｖｉａ　ｔｈｅ　５０％ｃｅｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ　ｄｏｓｅ（ＣＣＩＤ５０）ａｃｃｏｒｄｉｎｇ
ｔｏ　ｔｈｅ　Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ　ＭＴＴ （３－（４，５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ－２－ｙｌ）－２，５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ）
ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｎ　ＨｅＬａ　ｃｅｌｓ．Ｔｈｅ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｎｏｎ－ｔｏｘｉｃ　ｃｏｎｃｅｎ－
ｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ａｎｄ　１００ＣＣＩＤ５０ｏｆ　ｔｈｅ　ＲＳＶ　ｖｉｒｕｓ　ｗｅｒｅ　ａｌｓｏ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｐｅｒｆｏｒｍ　ａｎｔｉｖｉｒａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｅｘ－
ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ＦａｓＬ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ　ａｎｄ　ａｎ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｓｓａｙ　ｉｎ　ｆｏｕｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｍｏｄｅｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ａｃｔｉｏｎ（ａｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ　ＲＳＶ，ａｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ＲＳＶ　ｄｕｒｉｎｇ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ
ＲＳＶ，ａｎｄ　ａｃｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ）．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ＣＣＩＤ５０ｏｆ　ＲＳＶ　ｗａｓ　１０５．８ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｔｏｘｉｃ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ＴＣ０）ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｗａｓ　０．１０ｍｇ／Ｌ　ｉｎ　ＨｅＬａ　ｃｅｌｓ．Ｉｎ　ｔｈｒｅｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｏｄｅｓ　ｏｆ　ｄｒｕｇ　ａｃｔｉｏｎ（ａｃｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｐｒｅ－
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｅｘｃｌｕｄｅｄ），ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｆａｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　１．８５１±０．０２２，１．８３０±０．０４４，ａｎｄ　１．８０１±
０．０３８ｖｅｒｓｕｓ　２．０９８±０．０７５ｉｎ　ｕｎｔｒｅａｔｅｄ　ｃｅｌｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｏｆ　ＦａｓＬ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　１．８３２±０．０３４，
１．７６７±０．０２２，ａｎｄ　１．８１６±０．０２４ｖｅｒｓｕｓ　１．８８２±０．０５５ｉｎ　ｕｎｔｒｅａｔｅｄ　ｃｅｌｓ．Ｗｈｅｎ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌ－
ｏｒ　ｏｉｌ（ａｃｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｅｘｃｌｕｄｅｄ），ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ＦａｓＬ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｌｏｗｅｒ（Ｐ＜０．０５）
ｔｈａｎ　ｉｎ　ｕｎｔｒｅａｔｅｄ　ｃｅｌｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ＦａｓＬ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｄｉｄ　ｎｏｔ　ｄｉｆｆｅｒ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｆｏｒ　ｃｅｌｓ　ｐｒｅｔｒｅａｔｅｄ
ｗｉｔｈ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｕｎｔｒｅａｔｅｄ　ｃｅｌｓ（Ｐ＞０．０５）．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｈａｓ　ａｃｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔ　ＲＳＶ　ｂｙ
·３０４·
中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
＊
＊＊
【基金项目】　黑龙江省自然科学基金项目（Ｎｏ．Ｄ２０１０１５）。
【通讯作者】　罗佳波，Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｊｂ＠ｆｉｍｍｕ．ｃｏｍ
【作者简介】　刘　蕾（１９７３－），女，黑龙江人，博士，副教授，硕士生导师，主要从事呼吸道病毒研究与药物防治研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｕｌｅｉｔｉａｎｘｕｅ＠１６３．ｃｏｍ
ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖｉｒｕｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｉｔｓ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ｉｔｓ　ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉ－ＲＳＶ　ａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ
ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｍａｙ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ＦａｓＬ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ．
【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ，ＲＳＶ，ＨｅＬａ，Ｆａｓ，ＦａｓＬ
　　呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）是婴幼儿急性下呼吸道感
染最重要的病毒病原，流行面广，发病率高［１，２］，且与
支气管哮喘的发作存在相关性。ＲＳＶ感染致病主要
发生在婴幼儿，出生后２年内几乎所有婴幼儿均感染
过ＲＳＶ。新生儿母源性抗体可提供一定的保护力，随
着婴儿生长来自母亲的ＲＳＶ特异性中和抗体不断减
少，且自身免疫系统功能尚未成熟，是发生ＲＳＶ感染
并导致严重病情的高危人群。早产儿、先天性心肺功
能不全和免疫缺陷个体及６５岁以上的老年人均是
ＲＳＶ易感人群［３～６］。ＲＳＶ感染可引起上皮细胞的损
伤和异常免疫影响气道结构和功能反应，形成气道炎
症及高反应性［７］，甚至发生反复喘息和哮喘。
目前，除支持治疗以外，尚无特异性ＲＳＶ疾病的
治疗方案，无可以减少疾病发生率和重症病例病死率
的ＲＳＶ疫苗。中药具有毒副作用小、价格低廉、药源
丰富、多靶点作用机制和调节机体免疫功能的独特优
势。因此，可从中药中筛选抗 ＲＳＶ 药物用于治疗
ＲＳＶ感染。
翻白草（Ｐｏｔｅｎｔｉｌｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　Ｂｕｎｇｅ）是传统的中
草药植物，具有降血糖、抗菌和降血脂等多种药理作
用，且毒副作用低。本研究拟观察翻白草挥发油抗
ＲＳＶ作用。
材料与方法
１　材料
１．１　细胞株和病毒株　ＨｅＬａ细胞株和ＲＳＶ病毒株
由佳木斯大学病理生理学教研室提供。
１．２　主要试剂　翻白草油由本实验室提取；ＲＰ－
ＭＩ１６４０培养基、胎牛血清和双抗（青霉素－链霉素）
购自美国 ＧＩＢＣＯ公司；兔源Ｆａｓ和ＦａｓＬ多克隆抗
体、β－ａｃｔｉｎ、ＦＩＴＣ标记羊抗兔ＩｇＧ抗体和 ＨＲＰ标记
羊抗兔ＩｇＧ抗体购自美国Ｓａｎｔａ公司；脱脂奶粉购自
美国ＢＤ公司。
２　方法
２．１　翻白草油配制　翻白草油（６５．６ｍｇ／ｍｌ）用细胞
维持液（含２％胎牛血清的ＲＰＭＩ１６４０液）按１∶２０、１
∶４０、１∶８０等比例进行２倍倍比稀释，０．２２μｍ滤器
抽滤除菌，４℃保存备用。
２．２　ＲＳＶ毒力测定　病毒毒力以５０％培养细胞的感
染量（５０％ｃｅｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ　ｄｏｓｅ，ＣＣＩＤ５０）表示。
将ＲＳＶ液从１０－１至１０－１０做１０倍系列稀释。将各稀释
度的ＲＳＶ液接种 ＨｅＬａ细胞，每一稀释度做８孔，同
时设立阴性对照，３７℃培养３～５ｄ，观察细胞病变反
应（ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ，ＣＰＥ）。用Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法求出
ＲＳＶ对细胞半数感染量（ＣＣＩＤ５０）。
２．３　翻白草油对 ＨｅＬａ细胞毒性测定　将不同浓度
的翻白草油分别加入９６孔细胞培养板的 ＨｅＬａ细胞
中，每个浓度做８孔，同时设立正常细胞对照，置于３７
℃、５％ＣＯ２条件下培养，连续观察３ｄ，记录细胞形态
变化。培养结束前４ｈ，弃培养板液体，ＰＢＳ冲洗３次；
每孔加 ＭＴＴ（５ｍｇ／ｍｌ）２０μｌ，３７℃培养４ｈ，弃上清；
每孔加ＤＭＳＯ　２００μｌ，振荡５ｍｉｎ，用酶标读数仪 （波
长４９０ｎｍ）测吸光度值。试验重复３次。
２．４　翻白草油抗ＲＳＶ病毒试验　用２％ ＲＰＭＩ１６４０
细胞维持液（含２％胎牛血清）将翻白草油稀释为０．１、
０．０２５和０．００６３ｍｇ／ｍｌ，０．２２μｍ抽滤除菌后用于试
验。用２％ ＲＰＭＩ１６４０细胞维持液将 ＲＳＶ原液作１
０００倍稀释，０．２２μｍ微孔滤器抽滤除菌后用于试验。
翻白草油每个浓度做８孔，同时设不加药病毒对照，观
察药物抗ＲＳＶ作用。
２．４．１　药物对ＲＳＶ病毒的直接灭活作用　将不同浓
度的翻白草油分别与１００ＣＣＩＤ５０ＲＳＶ病毒液等量混
合，３７℃作用２ｈ后，将其接种 Ｈｅｌａ细胞，３７℃吸附
２ｈ，弃上清，加５ｍｌ　２％ＲＰＭＩ１６４０细胞维持液，观察
翻百草油对ＲＳＶ的直接灭活作用。
２．４．２　生物合成阶段对 ＲＳＶ病毒的作用　将０．５
ｍｌ　１００ＣＣＩＤ５０ＲＳＶ病毒液接种于 Ｈｅｌａ细胞，３７℃吸
附２ｈ，弃病毒液，加入不同浓度的翻白草油５ｍｌ，观
察对ＲＳＶ的作用。
２．４．３　对ＲＳＶ病毒吸附的作用　不同浓度的翻白草
油分别与１００ＣＣＩＤ５０ＲＳＶ病毒液等量混合后，立即加
入 Ｈｅｌａ细胞中，３７℃吸附２ｈ后，弃去培养瓶中液
体，加２％ ＲＰＭＩ１６４０细胞维持液５ｍｌ，观察对ＲＳＶ
吸附的作用
２．４．４　药物预处理作用　在药物无毒范围内，于 Ｈｅ－
ｌａ细胞悬液中预先加入不同浓度的翻白草油５ｍｌ，３７
℃作用４ｈ，ＰＢＳ洗涤３次，再加入１００ＣＣＩＤ５０ＲＳＶ病
毒液０．５ｍｌ，吸附２ｈ，弃病毒液上清，加２％ ＲＰ－
ＭＩ１６４０维持液５ｍｌ，观察药物对ＲＳＶ的作用
２．５　免疫荧光法检测Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白的表达
　滴加多聚赖氨酸的玻片接种 ＨｅＬａ细胞，２４ｈ细胞
长成单层，密度在６０％～７０％。在４种作用方式下用
翻白草油（０．００６　３ｍｇ／ｍｌ）处理样品，４％多聚甲醛固
定１５ｍｉｎ，分别加入１︰１００稀释（用ＰＢＳＴ稀释）的
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中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白兔源多克隆抗体５０μｌ，３７℃孵
育２ｈ。ＰＢＳＴ洗涤３次，每次５ｍｉｎ；加入１︰５０稀
释（用ＰＢＳＴ稀释）的ＦＩＴＣ标记羊抗兔ＩｇＧ抗体，３７
℃孵育９０ｍｉｎ，ＰＢＳＴ浸泡洗３次，每次３ｍｉｎ；ＤＡＰＩ
染色５ｓ，封片。用激光扫描共聚焦显微镜取图，每个
试样随机选择３０个细胞测量细胞荧光强度。取图条
件：１）激发光波长：４９０ｎｍ；２）扫描方式：ｘｙｚ；３）物镜：
６０倍干镜（ＮＡ为０．７５）；４）激光功率：（２０士２）ｍＷ；
５）扫描强度：５０％；６）光电倍增管的增益（ＰＭＴ）：８５２；
７）探测针孔：２．０２；８）扫描次数：４。
２．６　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测翻白草油对 ＲＳＶ 感染宿主
ＨｅＬａ细胞Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白的影响　取细胞蛋
白样品裂解，测定蛋白含量，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，然
后以２６０ｍＡ电转移到ＰＶＤＦ膜，ＴＢＳＴ缓冲液漂洗；
用５％脱脂奶粉３７℃封闭１ｈ，ＴＢＳＴ缓冲液漂洗；加
入Ｆａｓ蛋白或ＦａｓＬ蛋白兔源多克隆抗体４℃过夜孵
育，ＴＢＳＴ缓冲液漂洗；加入ＨＲＰ标记二抗３７℃孵育
９０ｍｉｎ，ＴＢＳＴ缓冲液漂洗；加入ＥＣＬ试剂显色并拍
照，用凝胶图象处理系统分析目标条带的净吸光度值。
３　统计学分析
数据用ＳＡＳ９．１３软件处理。调用Ｐｒｏｃ　ＧＬＭ 过
程进行方差分析，实验组与各对照组的比较采用ｄｕｎ－
ｎｅｔ　ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。
结　果
１　ＲＳＶ病毒毒力测定
倒置显微镜下观察ＣＰＥ，与 ＨｅＬａ细胞对照组相
比，ＲＳＶ病毒作用的 ＨｅＬａ细胞变圆，细胞呈典型的
串珠样改变。作用７２ｈ，５０％ ＨｅＬａ细胞出现病变时，
视为ＣＰＥ阳性细胞；未出现细胞病变的 ＨｅＬａ细胞视
为ＣＰＥ 阴性细胞。采用 Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法计算 ＲＳＶ
对 ＨｅＬａ细胞的毒力为１０５．８　ＣＣＩＤ５０／Ｌ，实验中 ＲＳＶ
病毒攻击量为１０３ＣＣＩＤ５０／Ｌ。
　　
图１　不同浓度翻白草油对ＨｅＬａ细胞活力的影响
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ＨｅＬａ　ｃｅｌｓ　ｉｎｃｕｂａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ
２　翻白草油对Ｈｅｌａ细胞的毒性作用
翻白草油对 ＨｅＬａ细胞毒性作用表现为：细胞增
殖缓慢、细胞皱缩变圆、颗粒增多、折光性增强、部分细
胞出现破碎脱落等，ＨｅＬａ细胞活力随着翻白草油浓
度的降低而逐渐增加。翻白草油对 Ｈｅｌａ细胞的最小
毒性浓度为０．１０ｍｇ／Ｌ（图１）。
　　
Ａ　ＨｅＬａ细胞　Ｂ　ＲＳＶ感染 ＨｅＬａ细胞　Ｃ　翻白草油对ＲＳＶ
直接灭活作用组　Ｄ　翻白草油对ＲＳＶ生物合成阶段作用组　Ｅ　翻
白草油对ＲＳＶ吸附阶段作用组　Ｆ　翻白草油预处理组
图２　免疫荧光法检测Ｆａｓ蛋白表达（６００×）
Ａ　ＨｅＬａ　ｃｅｌｓ　Ｂ　ＨｅＬａ　ｃｅｌｓ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＲＳＶ　Ｃ　ＲＳＶ　ｉｎａｃ－
ｔｉｖａｅｄ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｂｙ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　Ｄ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｉｎ－
ｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖｉｒａｌ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ＲＳＶ　Ｅ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ
ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＳＶ　Ｆ　Ｔｈｅ　ａｃｔｉｏｎ　ｍｏｄｅ　ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ
ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ
Ｆｉｇ．２　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ
（Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，６００×）
３　激光共聚焦显微镜观察翻白草油对ＲＳＶ感染宿主
ＨｅＬａ细胞Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白的影响
激光共聚焦显微镜观察，翻白草油（除药物预处理
作用方式外）组Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白表达的荧光强
度分别为１．８５１±０．０２２、１．８３０±０．０４４、１．８０１±
０．０３８和 １．８３２±０．０３４、１．７６７±０．０２２、１．８１６±
０．０２４，ＲＳＶ 病毒对照组荧光强度分别为２．１１２±
０．０４８和１．９０４±０．０２５，差异有统计学意义（Ｐ＜
０．０５）；翻白草油预处理组Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白表达
荧光强度与ＲＳＶ病毒对照组比较差异无统计学意义
（Ｐ＞０．０５）（图２、３，表１）。表明在直接灭活阶段、病
毒复制阶段和病毒吸附阶段，翻白草油可能通过抑制
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中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
ＲＳＶ宿主 ＨｅＬａ细胞Ｆａｓ蛋白、和ＦａｓＬ蛋白表达抗
ＲＳＶ病毒。
表１　Ｆａｓ和ＦａｓＬ蛋白表达（ｘ±ｓ，荧光强度）
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ＦａｓＬ
组别
Ｇｒｏｕｐ
Ｆａｓ　 ＦａｓＬ
直接灭活Ｄｉｒｅｃｔ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　１．８５１±０．０２２＊＊ １．８３２±０．０３４＊
生物合成Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　 １．８３０±０．０４４＊＊ １．７６７±０．０２２＊＊
吸附Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　 １．８０１±０．０３８＊＊ １．８１６±０．０２４＊
预处理Ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　 ２．０９８±０．０７５　 １．８８２±０．０５５
病毒对照Ｖｉｒｕｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　 ２．１１２±０．０４８　 １．９０４±０．０２５
　　 注（Ｎｏｔｅ）：与病毒对照组比较（Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖｉｒｕｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ），＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。
　　
Ａ　ＨｅＬａ细胞　Ｂ　ＲＳＶ感染 ＨｅＬａ细胞　Ｃ　翻白草油对ＲＳＶ
直接灭活作用组　Ｄ　翻白草油对ＲＳＶ生物合成阶段作用组　Ｅ　翻
白草油对ＲＳＶ吸附阶段作用组　Ｆ　翻白草油预处理组
图３　免疫荧光法检测ＦａｓＬ蛋白表达（６００×）
Ａ　ＨｅＬａ　ｃｅｌｓ　Ｂ　ＨｅＬａ　ｃｅｌｓ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＲＳＶ　Ｃ　ＲＳＶ　ｉｎａｃ－
ｔｉｖａｅｄ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｂｙ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　Ｄ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｉｎ－
ｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖｉｒａｌ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ＲＳＶ　Ｅ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ
ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＳＶ　Ｆ　Ｔｈｅ　ａｃｔｉｏｎ　ｍｏｄｅ　ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ
ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ
Ｆｉｇ．３　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＦａｓＬ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍ
（Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ，６００×）
４　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ检测翻白草油对ＲＳＶ感染宿主ＨｅＬａ
细胞Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白表达的影响
试验结束时采用 Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ测定宿主 ＨｅＬａ细
胞Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白水平，结果见图４～７。翻白
草油（除药物预处理作用方式）组与病毒组比较，宿主
ＨｅＬａ细胞Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白的表达差异有统计
学意义（Ｐ＜０．０５）（图４～７）。
　　
注：与病毒对照组比较，＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。
１　呼吸道合胞病毒　２　翻白草油（０．１ｍｇ／ｍｌ）　３　翻白草油
（０．０２５ｍｇ／ｍｌ）　４　 翻白草油（０．０６３ｍｇ／ｍｌ）
图４　翻白草油对ＲＳＶ的直接灭活作用
Ｎｏｔｅ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖｉｒｕｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１
　１　ＲＳＶ　２　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．１ｍｇ／ｍｌ）　３　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓ－
ｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．０２５ｍｇ／ｍｌ）　４　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．０６３ｍｇ／ｍｌ）
Ｆｉｇ．４　ＲＳＶ　ｉｎａｃｔｉｖａｅｄ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｂｙ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ
　　
注：与病毒对照组比较，＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。　１　呼吸道合
胞病毒　２　翻白草油（０．１ｍｇ／ｍｌ）　３　翻白草油（０．０２５ｍｇ／ｍｌ）　４
　翻白草油（０．０６３ｍｇ／ｍｌ）
图５　翻白草油对ＲＳＶ生物合成阶段的作用
Ｎｏｔｅ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖｉｒｕｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。
　１　ＲＳＶ　２　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．１ｍｇ／ｍｌ）　３　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓ－
ｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．０２５ｍｇ／ｍｌ）　４　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．０６３ｍｇ／ｍｌ）
Ｆｉｇ．５　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖｉｒａｌ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｏｆ　ＲＳＶ
·６０４·
中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
　　
注：与病毒对照组比较，＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１。　１　呼吸道合
胞病毒　２　翻白草油（０．１ｍｇ／ｍｌ）　３　翻白草油（０．０２５ｍｇ／ｍｌ）　４
　翻白草油（０．０６３ｍｇ／ｍｌ）
图６　翻白草油对ＲＳＶ吸附阶段的作用
Ｎｏｔｅ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖｉｒｕｓ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．
０１。　１　ＲＳＶ　２　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．１ｍｇ／ｍｌ）　３　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ
ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．０２５ｍｇ／ｍｌ）　４　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．０６３ｍｇ／ｍｌ）
Ｆｉｇ．６　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＳＶ
　　
１　呼吸道合胞病毒　２　翻白草油（０．１ｍｇ／ｍｌ）　３　翻白草油
（０．０２５ｍｇ／ｍｌ）　４　翻白草油（０．０６３ｍｇ／ｍｌ）
图７　翻白草油预处理对ＲＳＶ的作用
１　ＲＳＶ　２　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．１ｍｇ／ｍｌ）　３　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ
ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．０２５ｍｇ／ｍｌ）　４　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ（０．０６３ｍｇ／ｍｌ）
Ｆｉｇ．７　Ｅｘｃｅｐｔ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｏｎ　ｍｏｄｅ　ｏｆ　Ｐｏｔｅｎｔｉｌａ　ｄｉｓｃｏｌｏｒ　ｏｉｌ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ
讨　论
细胞凋亡是生命活动的基本特征之一，与细胞增
殖共同维持机体内环境稳定和正常生长发育。细胞增
殖与细胞凋亡失控导致许多疾病发生。与细胞凋亡密
切相关的胱冬蛋白酶（ｃａｓｐａｓｅｓ）介导的凋亡途径主要
有两条：一是Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ系统参与的内源性（线粒体）
途径，二是Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统参与的外源性（死亡信号）
途径［８～１０］。
Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统介导的细胞凋亡途径是目前研究
较为深入的有关细胞凋亡的信号传导。Ｆａｓ基因是一
个凋亡促进基因，其编码的Ｆａｓ蛋白与其配体ＦａｓＬ
结合可导致Ｆａｓ胞内的死亡域活化，并引起与之结合
的ＦＡＤＤ构象改变，使ｃａｓｐａｓｅ　８前体集聚、断裂和激
活，产生有活性的ｃａｓｐａｓｅ８，从而激发下游一系列的级
联反应，诱发细胞凋亡［１１］。病毒感染与宿主细胞凋亡
有着密切的联系，病毒感染宿主细胞，通过各种机制参
与宿主细胞凋亡的诱导［１２～１５］。因此，本研究通过检测
Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白分析翻白草油抗ＲＳＶ的可能机
制。
免疫荧光和 Ｗｅｓｔｅｎ　ｂｌｏｔ方法对Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ
蛋白的检测结果显示，翻白草油（除药物预处理作用方
式外）组Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋白表达降低，说明翻白草
油的抗ＲＳＶ作用可能通过降低Ｆａｓ蛋白和ＦａｓＬ蛋
白表达，进而抑制外源性（死亡受体通路）引起的ＲＳＶ
宿主Ｈｅｌａ细胞的凋亡过程。在翻白草油抗ＲＳＶ病毒
过程中死亡受体凋亡通路起重要作用，但对于该过程
具体的调控机制、相关的分子机制以及是否涉及其他
信号分子，还需深入研究。
【参考文献】
［１］　Ｐａｉｖａ　ＴＭ，Ｉｓｈｉｄａ　ＭＡ，Ｂｅｎｅｇａ　ＭＡ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｈｉｆｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｉｍｉｎｇ　ｏｆ
ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｃｙｔｉａｌ　ｖｉｒｕｓ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ　ｍｅｇａｌｏｐｏ－
ｌｉｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｉｍｍｕｎｏｐｒｏｐｈｙｌａｘｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｅｄ　Ｖｉｒｏｌ，２０１２，
８４（１１）：１８２５－３０．
［２］　Ｂｒｏｕｇｈｔｏｎ　Ｓ，Ｂｈａｔ　Ｒ，Ｒｏｂｅｒｔｓ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｍｉｎｉｓｈｅｄ　ｌｕｎｇ　ｆｕｎｃ－
ｔｉｏｎ，ＲＳＶ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ　ｉｎ　ｐｒｅｍａｔｕｒｅｌｙ
ｂｏｒｎ　ｉｎｆａｎｔｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｄｉｓ　Ｃｈｉｌｄ，２００６，９１（１）：２６－３０．
［３］　Ｓａｎｔｏｓ　ＲＰ，Ｃｈａｏ　Ｊ，Ｎｅｐｏ　ＡＧ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　Ｕｓｅ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ
ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ　ｆｏｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　ｒｓｖ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｈｉｌｄｒｅｎ
ｗｉｔｈ　ｌｅｕｋｅｍｉａ［Ｊ］．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，２０１２，１３０（６）：ｅ１６９５－９．
［４］　ｓｅｙ　ＡＲ，Ｈｅｎｎｅｓｓｅｙ　ＰＡ，Ｆｏｒｍｉｃａ　ＭＡ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｃｙ－
ｔｉａｌ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｅｌｄｅｒｌｙ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ－ｒｉｓｋ　ａｄｕｌｔｓ［Ｊ］．Ｎ　Ｅｎｇｌ　Ｊ
Ｍｅｄ，２００５，５２（７）：１７４９－５９．
［５］　Ｓｙｋｅｓ　ＪＡ，Ｖｅｒｍａ　Ｒ，Ｐｅｓｈｋｏｖｓｋｙ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｅａｒｌｙ　ｒｅｐａｉｒ　ｏｆ　ｌａｒｇｅ
ｉｎｆａｎｔ　ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ｓｅｐｔａｌ　ｄｅｆｅｃｔ　ｄｅｓｐｉｔｅ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｃｙｔｉａｌ　ｖｉｒｕｓ－
ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｗｉｔｈ　ｐｏｓｔｒｅｐａｉｒ　ｃｈｙｌｏｕｓ　ｐｅｒｉｃａｒｄｉａｌ　ｅｆ－
ｆｕｓｉｏｎ　ｒｅｑｕｉｒｉｎｇ　ｐｌｅｕｒｏｐｅｒｉｃａｒｄｉａｌ　ｗｉｎｄｏｗ：ａ　ｃａｓｅ　ｒｅｐｏｒｔ　ａｎｄ　ｒｅ－
ｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｐｅｄｉａｔｒ　Ｅｍｅｒｇ　Ｃａｒｅ，２０１２，２８（１０）：
１０７２－７．
［６］　Ｌｅｅ　ＨＣ，Ｈｅａｄｌｅｙ　ＭＢ，Ｌｏｏ　ＹＭ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｙｍｉｃ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｌｙｍｐｈｏ－
ｐｏｉｅｔｉｎ　ｉｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｃｙｔｉａｌ　ｖｉｒｕｓ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ａｉｒｗａｙ
ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｍｏｔｅｓ　ａ　ｔｙｐｅ　２ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ
Ａｌｅｒｇｙ　Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０１２，１３０（５）：１１８７－９６．
（下转封三）
·７０４·
中 国 病 原 生 物 学 杂 志
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　
２０１４年５月　第９卷第５期
Ｍａｙ　２０１４，Ｖｏｌ．９，Ｎｏ．５
书［５］　王瑛．一例输入性黑热病病例的流行病学调查分析［Ｊ］．中华疾
病控制杂志，２０１０，１４（８）：８２１－２．
［６］　邓智杰，林嘉．昆明市输入性内脏利什曼病２例报告［Ｊ］．中国寄
生虫学与寄生虫病杂志，２０１０，２８（４）：封二．
［７］　蔡辉霞，左素俊，徐文兴，等．山西省１例新发内脏利什曼病病
例调查［Ｊ］．中国寄生虫学与寄生虫病杂志，２０１２，３０（３）：１８８－
９０．
［８］　蓝梅，林金盈，韦美秋，等．广西首次输入性黑热病的诊治与鉴
别诊断［Ｊ］．内科，２００８，２８（４）：４８０－１．
［９］　张国平，陈方平，冯莉娟，等．湖南地区首例黑热病２例诊治分
析及文献复习［Ｊ］．中南大学学报（医学版），２００５，３０（２）：２４５－
６．
［１０］　孙晓东，雷黎辉，王剑，等．播散型组织胞浆菌病误诊１例［Ｊ］．
中国病原生物学杂志，２００８，３（３）：１９６，２０５．
［１１］　陈洋，郭伏平，范洪伟．间断发热２年，腹胀６月［Ｊ］．协和医学
杂志，２０１２，４（１）：６３－８．
【收稿日期】　２０１３－１２－２０　【修回日期】　
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
２０１４－０３－０４
（上接４０７页）
［７］　王冬，车海龙，金红．ＩＰ－１０对呼吸道合胞病毒所致小鼠肺部炎性
病变的影响［Ｊ］．中国病原生物学杂志，２０１０，５（８）：５７２－４．
［８］　Ｃｈｏｉ　ＪＨ，Ｌｅｅ　ＨＷ，Ｐａｒｋ　ＨＪ，ｅｔ　ａｌ．Ｋａｌｏｐａｎａｘｓａｐｏｎｉｎ　Ａ　ｉｎｄｕｃｅｓ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｕ９３７ｃｅｌｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　Ｃａ２
＋ｉｎｆｌｕｘ　ａｎｄ　ｃａｓｐａｓｅ－８ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐａｔｈｗａｙｓ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ　Ｔｏｘｉ－
ｃｏｌ，２００８，４６（１１）：３４８６－９２．
［９］　Ｎａｓｔｉｕｋ　ＫＬ，Ｋｒｏｌｅｗｓｋｉ　ＪＪ．ＦＬＩＰ－ｐｉｎｇ　ｏｕｔ：ｄｅａｔｈ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｉｇｎａ－
ｌｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｓｔａｔｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｂｉｏｌ　Ｔｈｅｒ，２００８，７（８）：１１７１－９．
［１０］　Ａｙｅｄ－Ｂｏｕｓｓｅｍａ　Ｉ，Ｂｏｕａｚｉｚ　Ｃ，Ｒｊｉｂａ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｍｙｃｏｔｏｘｉｎ
Ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ（ＨｅｐＧ２）ｖｉａ
ｐ５３－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ　ｉｎ
Ｖｉｔｒｏ，２００８，２２（７）：１６７１－８０．
［１１］　Ｃｕｒ　ｔｉｎ　ＪＦ，Ｃｏｔｔｅｒ　ＴＧ．Ｌｉｖｅ　ａｎｄ　ｌｅｔ　ｄｉｅ：ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ
ｉｎ　Ｆａｓ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｅｌ　Ｓｉｇｎａｌ，２００３，１５（１１）：９８３－
９２．
［１２］　Ｈａｎ　Ｘ，Ｌｉ　Ｚ，Ｃｈｅｎ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ　ｖｉｒｕｓ　Ａ／Ｂｅｉｊｉｎｇ／５０１／
２００９（Ｈ１Ｎ１）ＮＳ１ｉｎｔｅｒａｃｔｓ　ｗｉｔｈβ－ｔｕｂｕｌｉｎ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ　ｎｅｔｗｏｒｋ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｎ　Ａ５４９ｃｅｌｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳ
Ｏｎｅ，２０１２，７（１１）：ｅ４８３４０．
［１３］　Ｈｏｎｇ　Ｌ，Ｚｈａｎｇ　Ｊ，Ｍｉｎ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｒｏｌｅ　ｆｏｒ　ＭＨＢｓｔ１６７／ＨＢｘ　ｉｎ
ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｅｎａｌ　ｔｕｂｕｌａｒ　ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｎｅｐｈｒｏｌ
Ｄｉａｌ　Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２０１０，２５（７）：２１２５－３３．
［１４］　Ｃｒａｎｅ　Ｍ，Ｉｓｅｒ　Ｄ，Ｌｅｗｉｎ　ＳＲ．Ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎ－
ｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｈｅｐａｔｏｌ，２０１２，４（３）：９１－８．
［１５］　李程，王永康，杜磊，等．ＨＢＶ相关性肝病患者肝组织中 ＨＢｘ－
Ａｇ、Ｂａｘ及Ｂｃｌ－２的对比研究［Ｊ］．中国病原生物学杂志，２０１３，８
（４）：２９３－７．
【收稿日期】　２０１４－０１－２９　【修回日期】　
檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼檼
２０１４－０３－２６
（上接４３７页）
［４］　阿依甫汗·阿汗，吐尔干艾力，邵英梅，等．肝包虫病的外科治疗
现状［Ｊ］．肝胆外科杂志，２００９，１７（１）：１３－４．
［５］　ＭｃＭａｎｕｓ　ＤＰ，Ｇｒａｙ　ＤＪ，Ｚｈａｎｇ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉａｇｎｏｓｉａａｓ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，
ａｎｄ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ［Ｊ］．ＢＭＪ，２０１２，３４４：ｅ３８６６．
［６］　Ｄｅｒｙｎｃｋ　Ｒ，Ｚｈａｎｇ　Ｙ．Ｓｍａｄ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｎｄ　Ｓｍａｄ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｐａｔｈｗａｙｓ　ｉｎ　ＴＧＦ－ｂｅｔａ　ｆａｍｉｌｙ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００３，４２５
（６９５８）：５７７－８４．
［７］　Ｓｈｉ　Ｙ，Ｍａｓｓａｇｕｅ　Ｊ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ＴＧＦ－ｂｅｔａ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｆｒｏｍ　ｃｅｌ
ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｕｓ［Ｊ］．Ｃｅｌ，２００３，１１３（６）：６８５－７００．
［８］　Ｚｈｅｎｇ　Ｈ，Ｚｈａｎｇ　Ｗ，Ｚｈａｎｇ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｙｄａｔｉｄ
ｔａｐｅｗｏｒｍＥｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ　ｇｒａｎｕｌｏｓｕｓ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｇｅｎｅｔ，２０１３，４５（１０）：
１１６８－７５．
［９］　杨乐，王丽敏，张传山，等．细粒棘球蚴ＴＧＦ－βⅠ型受体全长和胞
内域酵母双杂交载体的构建及自激活鉴定［Ｊ］．中国病原生物学
杂志，２０１３，８（１１）：９８８－９２．
［１０］　李静，张传山，吕国栋，等．细粒棘球蚴ＳｍａｄＡ基因的克隆及其
功能的初步鉴定［Ｊ］．畜牧兽医学报，２０１１，４２（１２）：１７５６－６２．
［１１］　李静，张传山，吕国栋，等．细粒棘球蚴ＳｍａｄＣ蛋白及其 ＭＨ２
结构域酵母双杂交载体的构建及自激活鉴定［Ｊ］．中国兽医学报，
２０１２，３２（１）：５８－６２．
［１２］　温浩，徐明谦．实用包虫病学［Ｍ］．１版．北京：科学出版社，
２００７：２１－２，４０－１．
［１３］　Ｖｕｉｔｔｏｎ　ＤＡ．Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ　ａｎｄ　ａｌｅｒｇｙ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｒｅｖ　Ａｌｅｒｇｙ
Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００４，２６（２）：９３－１０４．
［１４］　Ａｌｅｓｓａｎｄｒａ　Ｓ，Ｆｅｄｅｒｉｃａ　Ｄ，Ａｎｔｏｎｅｌａ　Ｔ．Ｈｏｓｔ－Ｐａｒａｓｉｔｅ　Ｒｅｌａｔｉｏｎ－
ｓｈｉｐ　ｉｎ　ｃｙｓｔｉｃ　ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｏｓｉｓ：ａｎ　ｅｖｏｌｖｉｎｇ　ｓｔｏｒｙ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｄｅｖ　Ｉｍ－
ｍｕｎｏｌ，２０１２，２０１２：６３９３６２．
［１５］　Ｏｓｍａｎ　Ａ，Ｎｉｌｅｓ　ＥＧ，Ｖｅｒｊｏｖｓｋｉ　ＡＳ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ　ｍａｎｓｏｎｉ
ＴＧＦ－ｂｅｔａ　ｒｅｃｅｐｔｏｒⅡ：ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｈｏｓｔ　ｌｉｇａｎｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ
ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｅ　ｔａｒｇｅｔ　ｇｅｎｅ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　Ｐａｔｈｏｇ，２００６，２（６）：ｅ５４．
［１６］　Ｋｎｏｂｌｏｃｈ　Ｊ，Ｂｅｃｋｍａｎｎ　Ｓ，Ｂｕｒｍｅｉｓｔｅｒ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｋｉｎａｓｅ
ａｎｄ　ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ　ＴＧＦ－ｂｅｔａ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ｏｒｇａｎｓ　ｏｆ
Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ　ｍａｎｓｏｎｉ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ，２００７，１１７（３）：３１８－３６．
［１７］　Ｚａｖａｌａ－Ｇｏｎｇｏｒａａ　Ｒ，Ｋｒｏｎｅｒａ　Ａ，Ｂｅｒｎｔｈａｌｅｒｐ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｍｅｍｂｅｒ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ－βｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｆａｍｉｌｙ　ｆｒｏｍ　Ｅｃｈｉｎｏ－
ｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ　ｉｓ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｂｙ　ｈｕｍａｎ　ｂｏｎｅ　ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ
ｐｒｏｔｅｉｎ　２［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐａｒａｓｉｔ，２００６，１４６（２）：２６５－７１．
［１８］　Ｚａｖａｌａ－Ｇｏｎｇｏｒａ　Ｒ，Ｄｅｒｒｅｒ　Ｂ，Ｇｅｌｍｅｄｉｎ　Ｖ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｈａｒ－
ａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｅｃｏｎｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌｙ　ｕｎｕｓｕａｌ　ＡＲ－Ｓｍａｄ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ａｎ
ＭＨ１ｄｏｍａｉｎ　ａｎｄ　ａ　Ｓｍａｄ４ｏｒｔｈｏｌｏｇｕｅ　ｆｒｏｍＥｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｌｔｉｌｏｃ－
ｕｌａｒｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ，２００８，３８（２）：１６１－６．
［１９］　Ｅｐｐｉｎｇ　Ｋ，Ｂｒｅｈｍ　Ｋ．Ｅｃｈｉｎｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｌａｒｉｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＥｍＳｍａｄＥ，ａ　ｎｏｖｅｌ　ＢＲ－Ｓｍａｄ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ＴＧＦ－
ｂ　ａｎｄ　ＢＭＰ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ，２０１１，１２９（２）：８５－９４．
［２０］　Ｊｅｆｆｒｅｙ　Ｌ，Ｗｒａｎａ　ＪＬ，Ｌｉｌｉａｎａ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｔｈｅ　ＴＧＦ－βｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９４，３７０（６４８８）：３４１－７．
【收稿日期】　２０１４－０１－１９　【修回日期】　２０１４－０４－１５