全 文 ：第19卷 第6期
Vol.19 No.6
2013年 6月
June.2013Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
湖南省不同产地蛇莓中熊果酸含量差异分析
童巧珍，刘义芳，李凤娟，郭 婷，张聪子，孙梦姗
（湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）
[摘要] 目的：比较湖南省不同产地蛇莓中熊果酸含量差异，为蛇莓的质量研究提供参考。方法：采用HPLC法，采用美国
Phenomenex C18色谱柱（4.6 mm×250 mm5 μm）；流动相：甲醇∶醋酸铵（水∶冰醋酸∶二乙胺-15∶0.4∶0.2）-88∶12；流速：1 mL·min-1；
柱温：25 ℃；检测波长：210 nm。结果：湖南省不同产地蛇莓中熊果酸含量存在较大差异，在0.24%-0.52%之间。结论：为有效利
用蛇莓资源，保证蛇莓药材的质量及疗效，建议选择平江石浆生产的蛇莓进行规范栽培。
[关键词] 蛇莓；熊果酸；HPLC；含量
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2013）06-0070-02
Differences of Ursolic Acid Content in Duchesnea Indica (Andr.) Focke from Different
Areas of Hunan Province
TONG Qiao-zhen, LIU Yi-Fang, LI Feng-juan, GUO Ting, ZHANG Cong-zi, SUN Meng-shan
（Hunan University of Chinese Medicine,Changsha 410208,China）
[Abstract] Objective: To compare the content of ursolic acid in Duchesnea indica (Andr.) Focke from different areas of
Hunan province and provide a reference for the quality research. Methods: HPLC method, Phenomenex C18 chromatographic
column(4.6 mm×250 mm，5 μm); mobile phase: methanol:ammonium acetate-(water-glacial acetic acid-diethylamine-15 ∶0.4 ∶0.2)-
88∶12; flow rate 1 mL·min-1; column temperature 25 ℃；λ=210 nm. Results: The contents of ursolic acid in Duchesnea indica
(Andr) Focke were obviously different in ursolic acid from different areas of Hunan province. The contents varied from 0.24%
to 0.52%. Conclusion: The results suggest that we should choice Duchesnea indica (Andr.) Focke from Pingjiang Shijiang to
plant in standardization to ensure the quality and curative effect and use of their resources.
[Key words] Duchesnea indica (Andr.) Focke; Ursolic acid; HPLC; Content
蛇莓为蔷薇科植物蛇莓Duchesnea indica (Andr.) Focke
［Fragaria indica Andr.］的全草，为常见中草药。具有清热、凉
血、消肿、解毒的功效，主治热病、惊痫、咳嗽、吐血、咽喉肿
痛、痢疾、痈肿、疔疮、蛇虫咬伤、汤火伤等 [1-2]，始载于《别
录》[3]。蛇莓主要含有甲氧基去氢胆甾醇、低聚缩合鞣质、熊果
酸等化学物质，其中熊果酸具有抑制血管生成、抗肿瘤、抗
炎、抗HIV等作用[4]。本实验通过HPLC法测定湖南省不同产地
蛇莓药材中熊果酸的含量，并对其进行比较分析，为蛇莓资
源的有效利用提供理论依据。
1 实验材料
1.1 仪器与试药 Agilent高效液相色谱仪1200（UV-VIS检
测器，Solution色谱工作站）；HEMGDING FA 2004型电子分析
天平（上海恒平科学仪器有限公司）；KQ-500DE型数控超声波
清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；熊果酸（编号：111539-
200415，含量：97%)购于中国药品生物制品检定所，供含量测
定用；甲醇、冰醋酸、二乙胺均为色谱纯；其他试剂均为分析
纯；重蒸水（自制）。
1.2 药材 蛇莓药材样品采自湖南省不同产地，经湖南中医
药大学中药资源教研室周日宝教授鉴定为蛇莓D. indica
(Andr.) Focke［Fragaria indica Andr.］的全草。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18（4.6 mm×250 mm，
5 μm）；流动相：甲醇-醋酸铵（水∶冰醋酸∶二乙胺-15∶0.4∶0.2）-
88∶12；流速：1 mL·min-1；柱温：25℃；检测波长：210 nm。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取熊果酸标准品2.60 mg，置
10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成
0.260 mg·mL-1的对照品溶液，备用。
2.3 供试品溶液的制备 取不同来源的蛇莓粉末（40目筛）
约3 g，精密称定，置于250 mL具塞锥形瓶中，精密加入50 mL
的95%乙醇，称重，超声提取40 min，取出，放至室温后再称
重，补足失去乙醇的重量，抽滤，取滤液水浴蒸干溶剂，残渣
用甲醇溶解，定容置50 mL容量瓶中，摇匀，用0.45 um微孔滤
膜过滤，作为供试品溶液。进样量为10 μL。*基金项目：湖南省教育厅资助项目（10C1029）
70
DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2013.06.048
Guiding Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy
第19卷 第6期
Vol.19 No. 6
2013年 6月
June.2013
2.4 方法学考察
2.4.1 系统适应性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液和
阴性对照品溶液，按确定的色谱条件进样测定。结果色谱行
为良好，熊果酸峰与其它组分色谱可达基线分离，且与相邻
色谱峰分离度大于1.5；理论板数按供试品熊果酸峰计，不低
于3000；而阴性对照品溶液色谱中在对照品相应的位置无色
谱峰，说明阴性对照品无干扰。（见图1）
A-对照品
B-供试品
图1 1号蛇莓样品HPLC图
2.4.2 精密度试验 精密吸取熊果酸对照品10 uL，重复进样
6次，按上述色谱条件测定其含量，RSD%为1.04%。表明仪器
精密度较好。
2.4.3 稳定性试验 分别精密吸取同一样品溶液（2号）10 uL，
分别于0、2、6、10、12、24 h注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，
计算其含量，RSD%为1.33%，表明样品中熊果酸在24h内稳定。
2.4.4 重现性试验 精密吸取同一蛇莓样品（2号）5份，每份
3 g，按“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定
熊果酸含量，RSD%为1.68%。表明方法重复性较好。
2.4.5 加样回收率试验 分别称取已知含量的2号样品（熊
果酸含量为0.24%）粉末5份，每份约1.5 g，精密称定，再精密
加入与样品中熊果酸含量相当的熊果酸标准品，按“2.3”项下
提取，“2.1”项下色谱条件测定含量，结果平均回收率为
100.58%，RSD%为1.63%。（见表1）
表1 熊果酸加样回收率试验
称样量 样品含量 加入量 测得量 回收率 平均值 RSD
(g) (mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)
1.5020 3.6048 3.6018 7.2181 100.32
1.5018 3.6043 3.6020 7.2013 99.86
1.5009 3.6022 3.6006 7.2395 101.02 100.58 1.63
1.5032 3.6077 3.6036 7.3223 103.08
1.5014 3.6034 3.6025 7.1569 98.64
2.4.6 样品含量测定 精密吸取“2.3”项下制备好的16份蛇
莓样品溶液10 μL注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下相应的
色谱条件对各样品进行检测，采用外标法以峰面积计算各样
品中熊果酸含量。（见表2）
表2 蛇莓中熊果酸含量 （x±s，n=3）
编号 产地 采收日期 熊果酸含量
（年、月、日） （%）
1 株洲市 20110626 0.28±0.002
2 岳麓区 20110620 0.24±0.002
3 浏阳大围山 20110630 0.34±0.001
4 浏周洛 20110528 0.39±0.003
5 南岳衡山 20110614 0.45±0.003
6 永顺西岐 20110616 0.40±0.005
7 平江冬塔 20110625 0.30±0.002
8 平江石浆 20110625 0.52±0.003
9 望城县 20110504 0.29±0.003
10 长沙县白山镇 20110614 0.33±0.001
11 湖南中医药大学校园 20110617 0.39±0.002
12 常德市 20110520 0.48±0.005
13 常德澧县 20110503 0.32±0.002
14 邵东南冲水库 20110527 0.33±0.025
15 隆回县 20110504 0.50±0.002
16 娄底新化 20110510 0.43±0.003
2.5 统计学方法 采用SPSS 16.0版本软件对以上16个不同
产地蛇莓药材中熊果酸含量进行方差分析。（见表3）
表3 方差分析
变异来源 SS df MS F Sig
Between Groups 32.461 15 2.164 4.695E4 .000
Within Groups .001 32 .000
Total 32.462 47
3 讨 论
根据表3方差分析结果可知，不同产地蛇莓中熊果酸含
量P=0.000＜0.01，说明不同产地蛇莓中熊果酸含量具有极显
著差异，本试验中所选材料差异具有统计学意义。
蛇莓属草本植物，在我国广泛分布，易于栽培繁殖，作为
药用的同时广泛用于城市绿化和园林建设。为有效利用蛇莓
资源，更好地发挥蛇莓在作为药物使用时的疗效，建议选用
平江石浆的蛇莓发展人工栽培，建立蛇莓规范化的种植基
地。
参考文献
[1] 江苏新医学院．中药大辞典（下册）[S].上海：上海科技出版
社，1985：211
[2] 彭江南，陆蕴如，陈德昌．蛇莓化学成分的研究[J].中草药，
1995，26(7)：339-341
[3] 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草[M].上海：
上海科学技术出版社，1999：26-28
[4] 王予祺，常琪，唐敬天.蛇莓化学成分和药理作用的研究进
展[J].世界科学技术，2007,9（2）：107-110
（收稿日期：2013-02-28 编辑：李海洋）
71