全 文 ：黑龙江农业科学２０１４（９）：９４～９６
Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
蛇莓总多酚体外抗氧化活性研究
苟体忠１，２，唐文华１，２，徐绍琴３，孙大方１
（１．凯里学院 化学与材料工程学院，贵州 凯里５５６０１１；２．凯里学院 应用化学研究所，贵州 凯
里５５６０１１；３．凯里学院 继续教育学院，贵州 凯里５５６０１１）
摘要：为了促进蛇莓的综合利用，采用总抗氧化能力、·ＯＨ清除率和ＤＰＰＨ·清除率来考察蛇莓总多酚的体外
抗氧化活性。结果表明：蛇莓总多酚总抗氧化能力高于 ＶＣ，且蛇莓总多酚的·ＯＨ清除率远高于 ＶＣ。此外，蛇
莓总多酚对ＤＰＰＨ·的ＩＣ５０（１８．２μｇ·ｍＬ－
１）与ＶＣ（ＩＣ５０＝１７．６μｇ·ｍＬ－
１）相近。蛇莓总多酚是天然的抗氧化活
性剂和自由基清除剂。
关键词：蛇莓；总多酚；抗氧化活性
中图分类号：Ｒ２８４　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００２－２７６７（２０１４）０９－００９４－０３
收稿日期：２０１４－０４－０８
基金项目：国家青年自然科学基金资助项目（４１３０３０１６）；贵
州省科技厅自然科学基金资助项目（黔科合Ｊ字［２０１１］２０７９
号）；凯里学院博士专项基金资助项目（ＢＳ２０１００３）；贵州省高
校优秀科技创新人才计划资助项目（黔教合 ＫＹ字［２０１２］
０９９号）；贵州省教育厅“高层次人才引进项目”资助项目（院
科通［２０１２］７号）；凯里学院重点资助项目（Ｚ１２０２）；贵州省
特色重点学科资助项目（黔教高发［２０１１］２０８号）；凯里学院
重点学科资助项目（院通字［２０１０］８６号）
第一作者简介：苟体忠（１９８１－），男，贵州省遵义市人，博士，
副教授，从事天然药物化学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｔｚ８１０１１０＠
１２６．ｃｏｍ。
　　蛇莓（Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ）为蔷薇科植
物，又名三叶莓、龙吐珠、蛇泡草和野杨梅等，具有
有清热解毒、凉血、消肿之功效［１］。蛇莓主要分布
于贵州、云南、四川、广西、湖南和湖北等地。目前
蛇莓主要用于治疗肝癌、舌管癌、胃癌等多种癌
症。蛇莓中含有黄酮苷类［２］、三萜类［３］等活性成
分，其水提物对人体肝癌、胃癌、食管癌［４］、艾氏腹
水癌［５］以及不同菌种［６］有明显的抑制作用。但蛇
莓总多酚抗氧化活性的研究尚未见报道。因此，
该文分析了蛇莓总多酚的抗氧化活性，从而为蛇
莓的综合利用提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　材料　蛇莓于２０１３年１１月采自凯里市
雷公山，经凯里学院植物学博士鉴定为蔷薇科植
物蛇莓（Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ）的全草。
１．１．２　药剂　三氯乙酸、没食子酸、１，１－二苯－２－
苦基肼自由基（ＤＰＰＨ 自由基）、Ｆｏｌｉｎ　＆ｃｉｏｃａｌ－
ｔｅｕ’ｓ酚试剂为 Ａｌａｄｄｉｎ试剂。其它试剂均为分
析纯。
１．１．３　仪器与设备　紫外分光光度计（ＵＶ－
２５５０，岛津）、植物粉碎机（北京科伟永兴仪器有限
公司）、水浴振荡器（ＳＨＡ－Ｃ型，巩义予华仪器有
限公司）、超声波（ＷＨ－３００，济宁万和超声电子设
备有限公司）、低速离心机（ＴＤ５Ｍ，长沙湘智离心
机仪器有限公司）；电子天平（上海衡平仪器仪表
厂）。
１．２　方法
１．２．１　样品处理与总多酚的提取　将蛇莓样品
于８０℃烘箱中干燥，再用植物粉碎机粉碎并过８０
目筛，待用。分别称取约２ｇ上述样品于６个
５０ｍＬ离心管中，分别用石油醚、正丁醇、乙醇、乙
酸乙酯、甲醇和水提取，经正交试验确定最佳萃取
条件为：料液比为１∶２０，超声间歇提取２次，每次
３０ｍｉｎ，功率１００％，离心，取上层清液合并，再置
于５０ｍＬ容量瓶中并用相应试剂定容至刻度，摇
匀，待测。
１．２．２　总多酚测定　总多酚含量的测定参照文
献［７］并稍作修改。其简要流程为：准确称取
０．１２５ｇ没食子酸，用超纯水定容至１　０００ｍＬ。
分别吸取该标准溶液０、１、２、３、４和５ｍＬ于６个
２５ｍＬ比色管中，（Ｉ）先加超纯水至１０ｍＬ，摇匀，
再加入Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ酚试剂１．０ｍＬ，混匀，然
后加入６．０ｍＬ　１０％Ｎａ２ＣＯ３溶液，并用超纯水定
溶至刻度，摇匀。然后在暗室中放置２ｈ，并于
７６０ｎｍ 波长下测定其吸光度。以没食子酸浓
度（Ｃ）为横坐标，吸光度（Ａ）为纵坐标，绘制标准
曲线，其回归方程为：Ａ＝０．０８３　８Ｃ＋０．００６　７（ｒ＝
０．９９９　９）。取蛇莓提取液０．２ｍＬ于２５ｍＬ比色
管中，按步骤（Ｉ）测定其吸光度，再根据回归方程
计算蛇莓提取液总多酚的浓度，并以此计算样品
多酚含量，以每克样品中没食子酸当量表示（ｍｇ
ＧＡＥ·ｇ－１）。
１．２．３　醇提物总抗氧化能力测定　总抗氧化能
力的测定方法参照文献［８］，其简要流程为：取
１ｍＬ不同浓度提取液，并依次加入２．５ｍＬ的
ｐＨ＝６．６ 的 磷 酸 盐 缓 冲 液 和 １％ 铁 氰 化
钾（Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６）溶液，摇匀并置于５０℃水浴振荡
器中２０ｍｉｎ。然后加入２．５ｍＬ　１０％（ｍ／ｖ）三氯
乙酸溶液，摇匀并取混液２．５ｍＬ，再加入２．５ｍＬ
超纯水以及０．１％（ｍ／ｖ）氯化铁溶液，摇匀并静置
１０ｍｉｎ，在７００ｎｍ处测定吸光度（Ａｓ），以超纯水
４９
９期 　　苟体忠等：蛇莓总多酚体外抗氧化活性研究
代替提取液作为空白并测定其吸光度 Ａｃ。则总
抗氧化能力用ΔＡ来表示（ΔＡ＝Ａｓ－Ａｃ），其值
越大，表示提取液抗氧化能力越强。
１．２．４　·ＯＨ清除率的测定　·ＯＨ清除率的测定
方法参照文献［８］，其简要流程为：在２５ｍＬ比色
管中依次加入４ｍＬ　ｐＨ＝７．４磷酸钠缓冲液以及
１．５ ｍＬ　５ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ 邻 二 氮 菲 溶 液、１ ｍＬ
７．５ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ＦｅＳＯ４溶液、１．５ｍＬ双蒸水，摇匀，
再加入１ｍＬ不同浓度的提取液，立即摇匀。最
后加入１．０ｍＬ　１％（ｖ／ｖ）Ｈ２Ｏ２溶液，摇匀并置于
３７℃恒温水浴中恒温６０ｍｉｎ，再于５３６ｎｍ处测
定其吸光度。根据下式计算样品对ＯＨ·清除率：
清除率（％）＝［（Ａ１－Ａ２）／（Ａ０－Ａ２）］×１００
式中：Ａ１为加入提取液及 Ｈ２Ｏ２时测得的吸
光度；Ａ２为加 Ｈ２Ｏ２而不加提取液时测得的吸光
度；Ａ０为不加提取液及 Ｈ２Ｏ２时测得的吸光度。
１．２．５　ＤＰＰＨ·清除率测定　ＤＰＰＨ·清除率的
测定方法参照文献［９］，其简要流程为：在２５ｍＬ
比色管中依次加入２ｍＬ　２×１０－４　ｍｏｌ·Ｌ－１　ＤＰＰＨ·
溶液和２ｍＬ不同浓度提取液，摇匀，并在暗室中
放置３０ｍｉｎ，以无水乙醇为参比液，在５１７ｎｍ下
测定 其 吸 光 值 Ａｓ，同 时 测 定 ２ ｍＬ　２×
１０－４　ｍｏｌ·Ｌ－１　ＤＰＰＨ·溶液与２ｍＬ无水乙醇混合
液的吸光值 Ａｃ。计算样品溶液对ＤＰＰＨ·的清
除率：
ＤＰＰＨ·的清除率（％）＝（１－Ａｓ／Ａｃ）×１００
２　结果与分析
图１　不同提取液的ＤＰＰＨ·清除率比较
Ｆｉｇ．１　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｎ　ＤＰＰＨ·ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ
２．１　蛇莓不同极性试剂提取液对ＤＰＰＨ·的清除
能力
　　从图１可见，不同极性试剂提取液对ＤＰＰＨ·
的清除能力大小顺序为：乙醇＞甲醇＞水＞乙酸
乙酯＞正丁醇＞石油醚。由此可知，乙醇提取液
具有较高的清除ＤＰＰＨ·的能力。因此，以下试验
均以乙醇提取液为考察对象。
２．２　蛇莓总多酚含量
按１．２．２的方法得到蛇莓总多酚含量为
３．７ｍｇ　ＧＡＥ·ｇ－１。
２．３　蛇莓总多酚和ＶＣ的总抗氧化能力
从图２可见，随着浓度的增加蛇莓总多酚和
ＶＣ总抗氧化能力也逐渐增加，且蛇莓总多酚总
抗氧化能力高于ＶＣ，其具有较强的抗氧化能力。
经相关分析表明，蛇莓总多酚和 ＶＣ之间均存在
明显的正相关关系（其相关系数分别为０．９７９　３
和０．９８７　１），分析认为，蛇莓醇提物的抗氧化能力
主要是由多酚成分决定的。
图２　蛇莓总多酚、ＶＣ浓度对总抗氧能力比较
Ｆｉｇ．２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｎ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ
ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ　ａｎｄ　ＶＣ
图３　蛇莓总多酚、ＶＣ浓度对·ＯＨ的清除率比较
Ｆｉｇ．３　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｎ·ＯＨ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ
ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ　ａｎｄ　ＶＣ
２．４　蛇莓总多酚和ＶＣ对·ＯＨ的清除率
由图３可见，随着浓度的增加，蛇莓总多酚清
除·ＯＨ效率明显增加。然而，ＶＣ对·ＯＨ的清除效
率影响较小，且明显低于蛇莓多酚对·ＯＨ的清除
效率。经相关分析表明，蛇莓总多酚浓度与·ＯＨ
的清 除 率 之 间 存 在 显 著 正 相 关 关 系 （ｒ＝
０．９９１　４），而ＶＣ与·ＯＨ的清除率之间存在一定
的正相关关系（ｒ＝０．７９３　１）。分析认为，蛇莓总
５９
　　　　　黑　龙　江　农　业　科　学 ９期
多酚具有明显的清除·ＯＨ活性。
图４　蛇莓总多酚、ＶＣ浓度对ＤＰＰＨ·的清除率比较
Ｆｉｇ．４　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｎ　ＤＰＰＨ·ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ
ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ　ａｎｄ　ＶＣ
２．５　蛇莓总多酚和ＶＣ对ＤＰＰＨ·的清除率
由图４可见，随着蛇莓总多酚和ＶＣ浓度的增
加，其清除ＤＰＰＨ·的活性增加。经相关分析表明，
蛇莓总多酚和ＶＣ与ＤＰＰＨ·的清除率之间均存
在明显的正相关关系（相关系数分别为０．９９８　０
和０．９９９　５）。分析认为，蛇莓醇提物清ＤＰＰＨ·的
活性主要是由多酚成分决定的。
以蛇莓总多酚和 ＶＣ浓度对ＤＰＰＨ·的清除
率作回归分析。蛇莓总多酚对ＤＰＰＨ·的清除率的
回归方程为：Ｙ＝２．４９９　３　Ｘ＋４．６１５　９（ｒ＝
０．９９８　０）。ＶＣ对ＤＰＰＨ·的清除率的回归方程为
Ｙ＝２．７６９　８　Ｘ＋１．３６９　４（ｒ＝０．９９８　９）。当ＤＰＰＨ·
的清除率为５０％时，对应蛇莓总多酚和 ＶＣ的浓
度即为ＩＣ５０。经计算蛇莓总多酚和ＶＣ的ＩＣ５０分
别为１８．２和１７．６μｇ·ｍＬ－
１，结果表明，蛇莓总多
酚具有一定的清除ＤＰＰＨ·的活性。
３　结论与讨论
国外学者研究也表明，含有高水平总多酚的植
物表现出很好的体外抗氧化活性［１０］。该研究结果表
明，蛇莓乙醇提取液具有一定的清除ＤＰＰＨ·的能力，
且其总多酚含量达３．７ｍｇ　ＧＡＥ·ｇ－１。蛇莓总多酚总
抗氧化能力高于ＶＣ，具有较强的还原能力。蛇莓总
多酚对·ＯＨ的清除效率明显高于ＶＣ，是清除·ＯＨ的
良 好 活 性 剂。蛇 莓 总 多 酚 对 ＤＰＰＨ·的
ＩＣ５０（１８．２μｇ·ｍＬ－
１）与ＶＣ相近（１７．６μｇ·ｍＬ－
１），表明
蛇莓总多酚具有较好的抗氧化活性，是天然的抗氧
化活性剂。
综上可知，蛇莓总多酚具有较强的抗氧化活
性和清除自由基的能力。然而，在蛇莓总多酚中
决定其抗氧化活性或清除自由基的主要活性成分
尚未可知，仍需对其总多酚提取物进行进一步分
离、提纯，再对分离后的成分进行抗氧化活性实
验，并对其进行对比分析，以期筛选出抗氧化活性
能力最强的活性成分，以便为蛇莓的综合开发利
用提供重要参考。
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ａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１２，５：４８９－４９９．
［１０］　Ｓｈｕｋｌａ　Ｓ，Ｍｅｈｔａ　Ａ，Ｂａｊｐａｉ　Ｖ　Ｋ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｏ－
ｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｌｅａｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｓｔｅｖｉａ　ｒｅ－
ｂａｕｄｉａｎａ　Ｂｅｒｔ．［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｐａ－
ｔｈｏｌｏｇｙ，２０１２，６４：８０７－８１１．
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｆ
Ｔｏｔａｌ　Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍＤｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ
ＧＯＵ　Ｔｉ－ｚｈｏｎｇ１，２，ＴＡＮＧ　Ｗｅｎ－ｈｕａ１，２，ＸＵ　Ｓｈａｏ－ｑｉｎ３，ＳＵＮ　Ｄａ－ｆａｎｇ１
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋａｉｌｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｉｌｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５６０１１；
２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｋａｉｌｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｉｌｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５６０１１；３．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｏｎ－
ｔｉｎｕｉｎｇ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｋａｉｌｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｉｌｉ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５６０１１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ，ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍ　Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ　ｗａｓ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｈｙｄｒｏｘｙｌ
ａｎｄ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙ－
ｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍＤｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ　ｗａｓ　ｓｌｉｇｈｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ＶＣ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃ－
ｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍＤｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ　ｗａｓ　ｍｕｃｈ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ＶＣ．Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｈａｌｆ－ｍａｘｉｍａｌ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＩＣ５０）ｆｏｒ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍＤｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ　ａｎｄ　ＶＣ
ｗａｓ　ｓｉｍｉｌａｒ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　１８．２ａｎｄ　１７．６μｇ·ｍＬ－
１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ　ｆｒｏｍＤｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ　ｉｓ
ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｅｒ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｕｃｈｅｓｎｅａ　ｉｎｄｉｃａ　Ｆｏｃｋｅ；ｔｏｔａｌ　ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
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