全 文 ：传统医药 2 0 0 6年第 5 1卷第 15 期
水母雪莲花药材的薄层鉴别
徐振文 ’ ,蓝红梅 2 ,李 普 ’
( 1
. 广东省深圳市宝安 区龙华医院药剂科 , 广东 深圳 s ls or ;g
2
. 广东省梅州市药品检验所 ,广东 梅州 51 4 0 71 ; 3 . 广州汉方现代中药研究开发有限公司 ,广东 广州 51 0 24 0)
摘要 : 目的 提高水母雪莲花药材质量标准 。方法 采用薄层色谱法对药材及其中香豆素类成分进行鉴别 。结果 该方法重现性好 、 专属性
强 , 1 0 批药材中含有香豆素类成分 , 以 东蔑著内醋和伞形花内醋含量较高 。结论 薄层色谱法可用于水母雪莲花的药材鉴别 。
关健词 :水母雪莲花 ;薄层鉴别 ; 东筐芳内醋 ;伞形花内醋
中图分类号 : 2R 8 2 . 5 ; 2R 8 2 . 7 1 文献标识码 : A 文章编号 : 100 6 一 4 9 3 1 ( 2 0 06 ) 15 一 00 64 一 02
常用于中药的雪莲科植物有 12 种及 l 个变种 ,其化学成分有
所不同 [` J。水母雪莲花为菊科植物 sa us s uer a , ne d su a M ax im . 的干燥
全草 , 始载于藏药文献《月王药珍妒 , , 《中华人民共和国卫生部药品
标准 (藏药 )》第一册以全草人药。水母雪莲花原药材标准只有显微
鉴别部分 , 笔者认为有必要提高标准 。水母雪莲花含有黄酮及黄酮
昔类 、香豆素类 、木脂素类 、多糖类及挥发油等多种成分 { , ’ ,其中黄酮
类成分包括芦丁 、芹菜素 、 木裤草素 、山亲素等 , 香豆素类成分包括东
莫若内醋 、伞形花内醋等。在此介绍水母雪莲花的薄层鉴别 。
1 仪器与试药
e
a m a g A
u t o m a t i C孔 e s a m p le r 薄层自动点样仪 , e a m a g R e p or s t a r 3
薄层成像系统 , C am a g T L C P la t e H e a t e : l 薄层板加热器 , e a m a g 双
槽展开缸 ( 2 0 C m x 2 0 。 m ) , e a m a g N a n om a t 4 手动点样仪 ,均由瑞士
c am ag 公司生产 ; Dur m o nd 定量毛细管 (美国 ) ; E ye l a 旋转蒸发仪
( 日本 Ey e l a 公司 ) 。 E L MA T 66 o / H 超声波清洗器 (美国 E L MA 公
司 , 功率 3 6 o w , 频率 3 5 kH z ) 。 M e m e rt 型烘箱 (德 国 M e m e rt 公
司 ) 。雪莲花对照药材 (批号为 121 205 一 01 0 1 ,为菊科植物天山雪莲
花 S a 。 、 er a in vo l uc ar at K va . e t iK n . 的干燥地上部分 ) , 芦丁 (供含
量测定用 , 批号为 0 0 80 一 9 705 ) , 东蓖若内醋 (供鉴别用 , 批号为
0 7 6 8
一 9 2 0 2 )
, 均 由中国药品生物制 品检定所提供 ; 伞形花内醋
(U m b
e ]11允or n e , H P LC 检测 〕 9 8 . 0% , 批号为 93 97 9 一 2 0 2 2 40 3 , Fl u k a
公司提供 ) 。试验所用水母雪莲花药材经西藏高原生物研究所李晖
副研究员鉴定 ,为菊科植物水母雪莲花 aS o su er a m de o a M ax im . 的
干燥全草 (7 一 8 月采集 , 晒干 ) 。预制硅胶 G 板 (青岛海洋化工厂分
厂 ) ; 聚酞胺薄膜 (薄层层析用 , 浙江省台州市路桥四甲生化塑料
厂 ) ; 甲醇 、氯仿 、 丁酮 、 甲酸 、冰醋酸 、醋酸乙酷等均为分析纯 ;水为
高纯水 。
2 方法与结果
2
.
1 水母雪莲花的鉴别
2
.
1
.
1 提取方法 :为最大限度地提取药材中的有效成分 ,笔者对
醋酸乙醋超声提取 、 95 % 乙醇超声提取 、 甲醇超声提取 、 甲醇超声
提取后聚酞胺吸附洗脱等方法进行了比较 , 以 甲醇超声提取法的
效果最好 。 甲醇超声提取操作简便 、 省时 , 可消除杂质的干扰 , 故最
后选择用该法提取药材中的有效成分 。
2
.
1
.
2 薄层条件 : 曾经使用以下条件进行试验 。 固定相为 0 . 5 %
CM C
一 N a 硅胶 G 板 ,展开剂分别为醋酸乙醋 一 甲酸 一水 (8 : 1 : 1 ) 、
甲苯 一醋酸乙醋 一 甲酸 (5 : 4 : 1 ) 、 甲苯 一 醋酸乙醋 一 甲酸 (3 : 6 : 1 ;)
固定相为聚酞胺薄膜 , 展开剂分别为醋酸乙醋 一 丁酮 一 甲酸 一 水
( 6
: 2 : 1 : 1 )
、乙醇 一水 ( 7 : 3 ) 、水 一 95 % 乙醇 一 甲酸 一 乙酞丙酮 ( 9 :
2 : 2 : 1 )
、水 一 95 % 乙醇 一 甲酸 一 乙酞丙酮 ( 7 : 3 : 2 : 3) 、 氯仿 一 甲
醇 一 甲酸 ( 7 : 3 : 0 . 5 ) 、 甲醇 一 冰醋酸 一 水 ( 9 : 0 . 5 : 0 . 5 ) 。试验结果
表明 , 以甲醇 一 冰醋酸 一 水 ( 9 : 0 . 5 : 0 . 5 )为展开剂在聚酞胺薄膜
上展开的分离效果最好 , 斑点清晰 , 故选用聚酞胺薄膜薄层层析 ,
以甲醇 一 冰醋酸 一水 (9 : 0 . 5 : 0 . 5 )为展开剂 。 温度 、湿度对聚酞胺
薄膜层析展开和分离有影响 , 因此展开过程中相对湿度应控制在
7 0% 以下 。
2
.
1
.
3 显色方式 :三氯化铝试液是常用的黄酮类显色剂 ,故被选
作显色剂 。聚酞胺薄膜在温度过高时会软化 、变形 , 故喷以足量显
色剂 ,于 60 ℃ 下加热至显色清晰 , 在紫外光灯 (3 65 n m )下检视 。在与
芦丁对照品和对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点 。
2 1
.
4 灵敏度试验 :取本品 1 9,
用 自动 点样仪分别吸取 0 . 1 ,
0
.
2
,
0
.
3
,
0
.
4
,
0
.
6
,
0
.
8
,
l
,
1
.
2
,
1
.
5 泌 点样 ,依法展开 , 显色 ,
于紫外光灯 ( 365 n m )下检视 , 最
低 检 出量 为 0 . 1 卜(L 相 当 于
0
.
05 m g 生药 ) 。选择 1协L 点样 ,分
离效果理想 ,斑点清晰 (见图 1 ) 。
2
.
1
.
5 鉴别结果 :对 10 批水母
雪莲花药材进行了薄层鉴别试
验 。供试品溶液色谱图中 ,在与对
照药材和对照品溶液色谱相应位
1
. 芦丁对照组
2
一
10
, 水母雪莲花药材 (批号为 02 08 01 ,
点样量依次为 0 . 1 , 0 2 , 0 . 3 , 0 . 4 ,
0
.
6
,
0
.
8
, 1
.
0
,
1
.
2
,
1
.
5 卜L )
图 1 灵敏度试验薄层鉴别色谱图
置上显相同颜色的荧光斑点 。特征斑点有 二 蓝色荧光斑点 , 凡值约
0
.
;4 b
. 黄绿色荧光斑点 , fR 值约 o . 5( 芦丁 ) ; c . 黄绿色荧光斑点 , fR 值
约 0 . 6 ; d . 亮蓝色荧光斑点 , fR 值约 0 . 7 。色谱图见图 2 。由图 2 可见 ,
薄层鉴别重现性好 、专属性强 。
1
. 芦丁对照品 2 . 天 山雪莲花对照药材
3 一 2 2
. 水母雪莲花药材 (批号依次为 0 4 0 8 0 1 , 0 4 0 80 2 , 0 4 0 5 0 3 , 0 4 0 8以 ,
0 4 0 8 0 5
,
0 4 0 90 1
,
04 0 9 0 2
,
0 4 0 9 0 3
,
040 9 0 4
,
04 0 9 0 5 )
图 2 天 山雪莲花对照药材和水母雪莲花药材的薄层鉴别色谱 图
2
.
2 水母雪莲花中香豆素类成分的鉴别
2
.
2
.
1 测定方法 :取本品粉末 1 9 ,加甲醇 50 m L ,超声处理 20 m in ,
过滤 , 滤液蒸至近干 , 加甲醇 2 m L 溶解 , 作为供试品溶液 。另取东
蓑若内酷和伞形花内酷对照品 , 加乙醇制成每 1 m L 各含 0 . 1 m g 的
混合溶液 ,作为对照品溶液 。照薄层色谱法 12 0 0 年版《中国药典
(一部 )} 附录 VI B ]试验 ,吸取上述两种溶液各 5 林L ,分别点于同一
以按甲基纤维素钠 ( CM C 一 N a) 为赫合剂的硅胶 G 薄层板上 , 以氯
仿 一 甲醇 ( 1 0 : 0 . 5) 为展开剂展开 ,取出 ,晾干 , 于紫外光灯 (3 65 n m )
6 4 中国药业 hC in a hP a rJ 孔 a ce “ 雌亡。 扮
2 0 0 6年第 1 5卷第 1 5期 综述报告
正交设计在中药挥发油提取工艺研究中的应用概况
李奉勤 ,薛彦朝 ,马 静 ,李晓瑞 ,高永丰 ,肩彩云
(石家庄 以岭药业股份有限公司 , 河北 石 家庄 05 0 03 5)
摘要 : 正交设计既可明确各因素的主次和相互作用 , 还能获得诸因素各水平的最佳搭配 ; 正交表 “ 均 匀分散 、 整齐可比 ” 的性质使得试验具
有代表性 , 既保留了因素设计整体考虑 、 综合比较的优点 , 又避免 了全 面试验 、 工作量大的弊病 , 已广泛用于 中药工艺技术研究及其他科研
领域 。笔者对近年来正交设计在中药挥发油提取工艺中蒸馏法 、 超临界流体萃取法 、 微波萃取技术 、溶剂提取法 、超声提取法等 5 个方 面的
报道作一总结 , 旨在为中药挥发油提取工 艺的研究和应用提供一种 思路 。
关键词 : 正交设计 ; 中药 ;挥发油 ;提取工艺 ;应用
中图分类号 : T Q 4 6 1 文献标识码 : A 文章编号 : 10 06 一 4 93 1 ( 2 00 6 ) 1 5 一 0 06 5 一 02
正交试验设计 (。 rt ho go na l e xP er im e nt al de is gn )是一种利用正交 挥发油在 4 一 s h 内可提取完全 , 4 h 的平均收率为 98 . 61 % (m L / g ) 。
表安排多因素多水平试验 ,并用统计学方法分析考察结果 ,得出最 李江等 14 ’以水蒸气蒸馏法提取羲术的挥发油 , 对影响挥发油提
佳条件的科学方法 , 近年来在我国中药挥发油提取工艺研究中被 取的浸泡时间 、蒸馏时间 、药材粉碎度 3 个因素进行 了优选 ,结果
广泛应用 。现将其研究进展总结如下 , 为中药挥发油提取工艺的研 最佳工艺条件为羲术药材的粉碎粒度为 1 0 一 20 目 , 加人 8倍量的
究和大生产提供参考 。 水在 130 ~ 1 40 ℃条件下蒸馏 s h ; 因为浸泡与否对获术挥发油提取
1 蒸馏法 效率的影响不明显 , 因此可以不考虑浸泡因素。
何文斐等 l , l采用水蒸气蒸馏法 , 以 b ( 3’) 正交表安排试验 , 以挥发 霍祥宇等 l , ’以水蒸气蒸馏法提取肉桂的挥发油 , 以挥发油得率
油得率为考察指标 ,对影响金银花挥发油提取的浸泡时间 、提取时间 、 为考察指标 , 对影响挥发油提取的浸泡时间 、 提取时间 、加水量 3
加水量 3个因素进行了优选 ,得出最佳工艺为金银花加 or 倍量的水 , 个因素进行了优选 , 结果最佳工艺为药材加 6 倍量的水浸泡 Z h ,
浸泡 l h , 提取 10 h ;在此基础上进一步考察了挥发油提取条件的温度 水蒸气蒸馏 s h 后收取挥发油 。
因素 (5 0℃ , 7 5℃ , 10 0℃ ) ,结果表明提取温度为 75 ℃时得率最高 , 并 2 超临界流体萃取 ( SF E )法
且蒸馏 12 h 后金银花挥发油基本不再被蒸出 ,其中蒸馏 10 h 的得率 SFE 是近年发展起来的一项新技术 。超临界流体是处于临界温
可达总得率的 90 % 以上 ;3 批重复试验表明此工艺条件稳定可行 。 度和临界压力以上的流体 , 如 c 0 2 、氨 、 乙烯 、 丙烷 、水等 , 目前研究
张芳侠等 tZI 以挥发油收取量为考察指标 , 对影响丁香挥发油提 较多的为 C O Z 。流体在超临界状态下兼有双重特点 , 既具有与气体
取的药材粉碎度 、浸泡时间 、提取时间 、 加水量 4 个因素进行了三水 相当的高扩散系数和低砧度 , 又具有与液体相近的密度和对物质
平优选 ,结果丁香挥发油的最佳提取工艺是将药材粉碎成 20 目粗粉 , 良好的溶解能力 , 因此可作为溶剂进行萃取 。由于挥发油组分多为
加 8倍量的水浸泡 24 h ,水蒸气蒸馏 10 h 收取挥发油 。高保栓等口 ’ 低沸点 、易氧化物质 ,传统方法提取时容易受到破坏 , 近年来采用
也以水蒸气蒸馏法提取丁香挥发油 , 并对上述 4 个因素进行了优选 , SF E 进行提取的范例逐渐增多 。
结果最佳提取工艺是将药材粗粉加 8 倍量的水浸泡 40 m in ,水蒸气 林秀仙等 t“ ,对超临界 C 0 2 ( CO : 一 sF )E 技术萃取杏仁油的工艺
蒸馏 s h 后收取挥发油 , 验证试验表明所选工艺条件可行 ,而且丁香 进行了研究 ,初步确定了最佳工艺条件 , 并且与石油醚提取工艺进
下检视 。供试品溶液色谱中 , 在与对照品溶液色谱相应位置上显两
个相同的蓝色荧光斑点 。
2
.
2
.
2 提取方法 : 因为香豆素类成分易溶于甲醇 , 2 . 1项下所用
的甲醇超声提取方法能有效提取香豆素类成分 , 为简化操作 、 省
时 , 可用 2 . 1 项下供试品溶液进行试验 。
2
.
2
.
3 薄层条件 : 硅胶 G 板常用于香豆素类的薄层鉴别 , 故选择
以 CM C 一 N a 为豁合剂的硅胶 G 板为固定相 。为选择较好的展开
剂 ,对氯仿 、不同比例的氯仿 一 醋
酸乙酷 、氯仿 一 甲醇 、苯 一醋酸乙
酷等溶剂系统进行了试验 。结果
表明 , 以氯仿 一 甲醇 ( 10 : 0 . 5) 为
展开剂时分离效果理想 ,斑点清
晰 , 故以其为展开剂 。
2 2
.
4 显色方式 : 香豆素类成
分在紫外光 ( 365 n m )下显蓝色至
蓝紫色荧光 , 故无需喷显色剂即
可直接于紫外光灯 ( 365 n m )下检
视 。供试品溶液色谱中 ,在与对照
品溶液色谱相应位置上显两个相
同的蓝色荧光斑点 。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2
1
. 东筐若内酉旨对照品
2
. 伞形花内醋对照品
3 一 12
. 雪 莲 花 药 材 ( 批 号 为
0 4 0 8 0 1
,
0 4 0 80 2
,
04 0 80 3
,
0 4 0 8 04
,
0 4 0 8 0 5
,
0 4 0 9 0 1
,
04 0 90 2
,
0 4 0 9 03
,
0 4 0 9 0 4
,
0 4 0 9 0 5 )
图 3 水母 雪莲花药材 中
香豆素类的薄层鉴别
2
.
2
.
5 鉴别结果 : 10 批水母雪莲花药材的薄层鉴别试验证明 , 水
母雪莲花含有香豆素类成分 ,其中东蓑若内醋和伞形花内酷的含
量较高 。供试品溶液色谱中 , 在与对照品溶液色谱相应位置上均显
两个相同的蓝色荧光斑点 。特征斑点 a . 为蓝色荧光斑点 , R f值约
0
.
6( 东蓖若内酷 ) ; b . 为蓝色荧光斑点 , R「值约 0 . 4( 伞形花内醋 ) 。
色谱图见图 3 。
3 讨论
薄层色谱试验证明 ,雪莲花对照药材与水母雪莲花的化学成
分有所不同 (图 1 ) 。 由于中国药品生物制品检定所没有提供水母雪
莲花对照药材 , 试验时不以该药材为对照 , 而取 10 批水母雪莲花
药材进行薄层试验 。建议原雪莲花对照药材改为天 山雪莲花对照
药材 ,并增加水母雪莲花对照药材 。
参考文献 :
【1 贾忠建 . 水母 雪莲化学成 分的研究 [ IJ . 高等学校化 学学报 , 198 6 , 7
( 9 ) : 7 89 一 7 9 1
.
【21 李君 山 . 雪莲花类 药材的化学和 药理研究进展【J] . 中国药学杂志 ,
19 9 8
,
3 3 ( 8 ) : 4 4 9 一 4 5 2
.
口 ] 陈金瑞 . 藏药 雪莲花 的化学成分 [ J] . 云南植 物研究 , 19 89 , 1 1 (3) :
2 7 1 一 2 7 3
.
〔收稿日期 : 2 0 ` 一 02 一 12)
中国药业 hC in a hP ~ ac eu t i
c a ls