全 文 ：#方药纵横#
翻白草提取物的抑菌作用研究
伍贤进,毛 倩,刘胜贵,李胜华,牛友芽,张 俭
(怀化学院生物工程系,湖南 怀化 418008)
摘 要: 方法:选用不同的提取溶剂提取翻白草的活性成分;运用二倍稀释法, 以大肠埃希氏菌、普通变形杆菌、铜绿
假单胞菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、八叠球菌为供试菌种,对翻白草的不同药用部位抑菌作用进行了抑菌试验。结
果: 翻白草不同药用部分的抑菌作用存在差异, 其带根全草抑菌作用最强, 地上部分次之,根部的抑菌作用最小; 不同提
取液的抑菌效果存在差异, 70%乙醇提取液的抑菌作用最强;对金黄色葡萄球菌和八叠球菌等革兰氏阳性菌的抑菌效果
好于革兰氏阴性菌。
关键词: 翻白草;提取; 抑菌
中图分类号: R285. 5 文献标识码: B 文章编号: 1000 - 1719( 2007) 09 -1295 - 02
Studies on Antibacter ial Activity of Potentilla D iscolor Bge.
XU X ian-jin, MAO Qian, LIU Sheng-gui, L I Sheng-hua, N IU You-ya, ZHANG J ian
(D epar tm ent o f B io engineer ing, Huaihua University, Huaihua 418008, Hunan, China)
Abstrac t: Me thods: By using the dilution m e thod, w ith Escherich ia co l,i P ro teu s vu lga ris, P seudom onas ae rug inosa, S tapy lo-
coccus au reus, En te rococcus faecalis, Sarcina lu tea as samp le s, the expe rim ent studied the antibac teria l ac tity o f Po ten tilla disco l-
o r. Bge. . Results: The eve ry pa rt of Po tentilla d isco lor. Bge. could have effects o f restra in ing bacte rium of six samp le s. The entire
Po ten tilla d iscolor. Bge. had the strongest effec ,t the aboveground pa rtw as w eaker and the be lowg round part was the w eakes.t The
antibacte ria l ac tiv ity w as different from the ex trac ts o f diffe rent so lven,t and the 70% a lcoho l ex trac ts cou ld have the be st antibac-
teria l e ffec ts. And there was be tter an tibac te rial e ffect to the g ram - positive bac te ria than gram - nega tive bac te ria.
K eywords: P o tentilla disco lor. Bge. ; ex trac ts; an tibac te rial ac tivity
收稿日期: 2007 - 04 - 07
基金项目:科技部国家科技基础条件平台项目 ( 2004DKA30430 ) ;湖南
省普通高校学科带头人培训费资助项目
作者简介:伍贤进 ( 1965 - ) ,男,湖南新宁人,教授,博士, 主要从事药用
植物资源及其持续利用研究。
翻白草 ( Po tentilla disco lorBge. ) ,为蔷薇科委陵菜
属多年生草本植物, 全国各地均有分布, 生于丘陵山
地、路旁及洼埂上, 为我国传统中药 [1 ]。5本草纲目6
记载, 翻白草有清热、凉血、解毒、止血消肿之功能。多
用于治疗痢疾、疟疾、痈肿及各种出血。目前临床上一
般用于治疗细菌性痢疾、溃疡性结肠炎, 有效率达
95%以上 [2 ],是一种较好的抗菌药物。近年来, 其更多
的药用价值被发现, 民间流行用翻白草治疗糖尿病并
取得不错的疗效。本文对翻白草提取物的抑菌作用进
行了研究,比较了不同溶剂、不同乙醇浓度提取所得的
提取物的抑菌效果, 并对具有较好抑菌作用的提取物
进行最低抑菌浓度的测定, 为开发利用翻白草提供科
学依据。
1 实验材料
1. 1 仪器 立式压力蒸汽灭菌器 ( YXQ - LS - 50S1,
上海博迅实业有限公司医疗设备厂 )、摇床 ( ZH-
WY200B, 上海智城分析仪器制造有限公司 )、电热恒
温培养箱 ( DHP - 2000型, 天津市华北实验有限公
司 )、水平层流净化工作台 (苏州洁净技术研究所制
造 )、SHZ - Ó 型循环水真空泵 (上海亚荣生化仪器
厂 )、旋转蒸发器 ( RE - 52AA,上海亚荣生化仪器厂 )。
化学试剂均为分析纯。
1. 2 药材 采集湖南怀化溆浦县,经鉴定为蔷薇科委
陵菜属多年生草本植物。
1. 3 菌 种 大 肠埃 希氏 菌 ( E scherichia co li
CVCC249)、普通 变形杆 菌 ( P ro teusvu laris CCTCC
AB91103)、铜绿假单胞菌 ( Pseudomonas aerugino sa )、
金黄 色 葡 萄 球菌 ( S taphy lococcus aureus CCTCC
AB91053)、粪肠球菌 ( En te rococcusfaecalis)、八叠球菌
( Sa rc ina lutea) ,均由怀化学院微生物学实验室提供。
2 方法与结果
2. 1 翻白草提取液的制备 水提液采用煎煮法,取翻
白草的全草、地上部分和根,于 60e 恒温干燥 16~ 18h
后,用蒸馏水煎煮 2次, 每次 30m in[3] , 过滤, 合并滤
液,于 4000r /m in离心 10m in。醇提液和醚提液的制
备,取翻白草的全草、地上部分和根, 分别溶于 50%、
70%、95%的乙醇和石油醚中,浸提 2h后, 然后置于超
声波设备中超声波提取 30m in[4 ], 于 4000 r /m in离心
10m in。各提取滤液浓缩至含生药 1g /mL,灭菌后放入
冰箱中保存备用。
2. 2 各提取液抑菌效果的考察 无菌条件下, 将灭菌
试管分成 5大组, 每组 42支。 42支试管再分成 6小
组,每组 7支。第 1支试管中加入 1mL 2倍浓度的 LB
液体培养基,第 2~ 5支试管中各加入 1mL LB液体培
养基,向第 1支试管中加入 1mL提取液后按 2倍稀释
法,使各管药液浓度分别为 0. 5、0. 25、0. 125、0. 0625、
0. 03125 g /mL, 然后向各管中加入 0. 1mL的 10- 4菌
液,第 6支试管中加 2mL LB液体培养基, 不加提取液
作为阳性对照 (水 ) ,第 7支试管中加提取液但不加菌
悬液作为阴性对照 ( 1. 25 @ 10- 5 g /mL氨苄西林钠 ), 将
培养物置于 37e 培养 16~ 18h。
从以上培养物中分别取 0. 1mL涂布于固体 LB培
养基平板上,于 37e 培养 16 ~ 18h后观察, 抑菌效果
见表 1~表 7(表中, / -0表示没有菌落, / + 0表示有
极少数菌落, / + + 0表示有少数菌落, / + + + 0表示
有大量菌落 )。以上试验重复 3次。
#1295# 辽宁中医杂志 2007年第 34卷第 9期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2007.09.115.wuxj.059
表 1 翻白草全草水提取液对供试菌种的抑制作用
供试菌种 阳性对照
(水 )
阴性对照 (氨
苄西林钠 )
水提取液的浓度 ( g /mL )
0. 5 0. 25 0. 125 0. 0625 0. 03125
大肠埃希氏菌 + + + - - + + + + + + + + + +
普通变形杆菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
铜绿假单胞菌 + + + - - + + + + + + + + + +
粪 肠 球 菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
八 叠 球 菌 + + + - - + + + + + + + + + +
金黄色葡萄球菌 + + + - - - + + + + + + + +
表 2 翻白草全草 50%乙醇提取液对供试菌种的抑制作用
供试菌种 阳性对照
(水 )
阴性对照 (氨
苄西林钠 )
50%乙醇提取液的浓度 ( g /mL)
0. 5 0. 25 0. 125 0. 0625 0. 03125
大肠埃希氏菌 + + + - - + + + + + + + + + +
普通变形杆菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
铜绿假单胞菌 + + + - - + + + + + + + + + +
粪 肠 球 菌 + + + - - + + + + + + + + +
八 叠 球 菌 + + + - - + + + + + + + +
金黄色葡萄球菌 + + + - - + + + + + + +
表 3 翻白草全草 70%乙醇提取液对供试菌种的抑制作用
供试菌种 阳性对照
(水 )
阴性对照 (氨
苄西林钠 )
70%乙醇提取液的浓度 ( g /mL)
0. 5 0. 25 0. 125 0. 0625 0. 03125
大肠埃希氏菌 + + + - - - + + + + + + + +
普通变形杆菌 + + + - - + + + + + + + + +
铜绿假单胞菌 + + + - - + + + + + + + + +
粪 肠 球 菌 + + + - - + + + + + + + +
八 叠 球 菌 + + + - - - + + + + + + +
金黄色葡萄球菌 + + + - - - - + + + + +
表 4 翻白草全草 95%乙醇提取液对供试菌种的抑制作用
供试菌种 阳性对照
(水 )
阴性对照 (氨
苄西林钠 )
95%乙醇提取液的浓度 ( g /mL)
0. 5 0. 25 0. 125 0. 0625 0. 03125
大肠埃希氏菌 + + + - - + + + + + + + + + +
普通变形杆菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
铜绿假单胞菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
粪 肠 球 菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
八 叠 球 菌 + + + - - + + + + + + + + + +
金黄色葡萄球菌 + + + - - + + + + + + + + +
表 5 翻白草全草石油醚提取液对供试菌种的抑制作用
供试菌种 阳性对照
(水 )
阴性对照 (氨
苄西林钠 )
石油醚提取液的浓度 ( g /mL )
0. 5 0. 25 0. 125 0. 0625 0. 03125
大肠埃希氏菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
普通变形杆菌 + + + - + + + + + + + + + + + +
铜绿假单胞菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
粪 肠 球 菌 + + + - + + + + + + + + + + + +
八 叠 球 菌 + + + - - + + + + + + + + +
金黄色葡萄球菌 + + + - - + + + + + + + + +
表 6 翻白草地上部分 70%乙醇提取液对供试菌种的抑制作用
供试菌种 阳性对照
(水 )
阴性对照 (氨
苄西林钠 )
70%乙醇提取液的浓度 ( g /mL)
0. 5 0. 25 0. 125 0. 0625 0. 03125
大肠埃希氏菌 + + + - - + + + + + + + + +
普通变形杆菌 + + + - - + + + + + + + + + +
铜绿假单胞菌 + + + - - + + + + + + + + +
粪 肠 球 菌 + + + - - + + + + + + + + +
八 叠 球 菌 + + + - - - + + + + + + + +
金黄色葡萄球菌 + + + - - - + + + + + +
表 7 翻白草根 70%乙醇提取液对供试菌种的抑制作用
供试菌种 阳性对照
(水 )
阴性对照 (氨
苄西林钠 )
70%乙醇提取液的浓度 ( g /mL)
0. 5 0. 25 0. 125 0. 0625 0. 03125
大肠埃希氏菌 + + + - - + + + + + + + + + +
普通变形杆菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
铜绿假单胞菌 + + + - - + + + + + + + + + +
粪肠球菌 + + + - - + + + + + + + + + + +
八叠球菌 + + + - - + + + + + + + + +
金黄色葡萄球菌 + + + - - - + + + + + +
表 1~ 表 5说明, 5种不同的提取溶剂的提取物
中, 70%乙醇提取物具有最强的抑菌作用, 50%乙醇和
水提取物的抑菌作用基本相当, 抑菌作用从强至弱依
次为: 70%乙醇、50%乙醇和水、90%乙醇、石油醚。
为了确定翻白草的不同药用部位的抑菌效果, 用
70%的乙醇分别提取翻白草的地上部分和地下部分的
活性成分进行抑菌实验 (表 6,表 7)。表 3、表 6、表 7
结果说明,对供试菌的抑制作用最强的为全草,地上部
分次之,根最弱。
由于 70%乙醇全草提取液的抑菌效果最好,故用
此来确定最低抑菌浓度。从表 3可得到其对金黄色葡
萄球菌的抑制作用最强,最低抑菌浓度 (M IC )为 0. 125
g /mL;对大肠埃希氏菌和八叠球菌的抑制作用次之,
M IC为 0. 25g /mL,对普通变形杆菌、铜绿假单胞菌、粪
肠球菌的抑制作用最差, M IC为 0. 5g /mL。
3 讨 论
实验结果表明翻白草各部位的水提取液、醇提取
液和醚提取液对供试的 6种细菌均存在不同程度的抑
菌效果,说明翻白草是一种较好的抗菌药材,其用于治
疗细菌性痢疾等疾病是有药理依据的。根据不同提取
溶剂和不同提取部位抑菌效果比较, 翻白草的药用成
分提取最好使用 70%乙醇提取全草;判断提取物抑菌
效果最好用金黄色葡萄球菌作为测试菌种。比较翻白
草对 6种受试菌的抑菌效果, 发现翻白草对革兰氏阳
性菌的抑菌效果好于革兰氏阴性菌。因此,翻白草对
革氏阳性菌引起的疾病或许会有更好的疗效。
目前对中草药提取物抑菌效果的检测一般采用试
管法或滤纸片法,但中草药提取的药液一般为颜色较
深的制剂,用试管法常常会因为制剂颜色深而导致观
察不准确, 用滤纸片法则会因为中草药扩散慢、抑菌
弱,较难得到准确的抑菌浓度。本实验将药液与菌液
混合培养后再取培养液涂平板后培养计数的方法研究
翻白草的抑菌效果,避免了试管法或滤纸片法的不足,
具有稳定可靠且定量性好的优点, 比较适合用于有色
中草药制剂抑菌浓度的测定。由于本实验采用此法判
断抑菌效果且以无菌落生长为最低抑菌浓度故所测定
的数据实际上是最低杀菌浓度。
参考文献
[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 [S ].北京:化学工业出版
社, 1986: 2705 - 2706
[ 2 ] 刘艳南,苏世文,朱廷儒.翻白草抗菌活性成分的研究 [ J].沈阳药
学院学报, 1983, 6: 17 - 22
[ 3 ] 付明,刘胜贵,伍贤进.灰白毛莓、苍耳的抑菌作用研究 [ J ].华中
师范大学学报 (自然科学版 ) , 2005, 39 ( 2 ): 246
[ 4 ] 罗敏,吴良如,王剑雨,等. 超声波提取中药有效成分及竹醋液的
抑菌活性研究 [ J ].世界竹藤通讯, 2005, 3( 4 ): 37 - 39
#1296# 辽宁中医杂志 2007年第 34卷第 9期