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欧李仁油抗氧化活性的研究
林 海
(鹤壁职业技术学院，河南鹤壁 458030)
摘 要:采用磷钼络合物法、铁氰化钾法、Fenton检测体系、邻苯三酚自氧化法、Beauchamp C的方法测定了欧李仁油的
总抗氧化活性及欧李仁油对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子(O －2 ·) ，烷基自由基(R·)三种自由基的清除能力，并
与 VC 和橄榄油的抗氧化活性做比较。结果表明:欧李仁油的总抗氧化活性随着浓度的增大而增大，总抗氧化活性介
于 VC 和橄榄油之间;在 Fenton反应体系中，欧李仁油对羟基自由基的清除作用较显著，三者的清除能力大小顺序为:
欧李仁油 ＞ VC ＞橄榄油;在邻苯三酚自氧化体系中，欧李仁油对超氧阴离子自由基有一定的清除作用，三者的清除能
力大小为:VC ＞橄榄油 ＞欧李仁油;在亚油酸氧化体系中，欧李仁油、VC、橄榄油对烷基自由基的抑制作用大小为:欧
李仁油 ＞橄榄油 ＞ VC。从而认为欧李仁油具有较好的抗氧化活性。
关键词:欧李仁油，抗氧化活性，还原力，羟基自由基，超氧阴离子自由基，烷基自由基
Study on antioxidation activities of Chinese dwarf chetty seed oil
LIN Hai
(Hebi Vocational College，Hebi 458030，China)
Abstract:In order to study the antioxidant activity of Chinese dwarf cherry seed oil(CDCSO) ，the total antioxidant
activity using the method of molybdenum complexes，potassium perricyanide and the ability to scavenge the
hydroxyl radical(·OH) ，superoxide anion radical(O －2 ·) ，alkyl radical(R·)by the detection system of Fenton，
the pyrogallol method oxidation and the Beauchamp C method were determined.The results showed that the total
antioxidant activity of Chinese dwarf cherry seed oil increased with the increasing of the oil concentration，and the
activity was between VC’s and olive oil’s.In the Fenton reaction system，the activity of Chinese dwarf cherry seed
oil to scavenge hydroxyl radical was more significant than VC’s and olive oil’s. In the adjacent autoxidation
system，Chinese dwarf cherry seed oil had some ability to scavenge superoxide anion radical，but the ability was
lower than VC’s and olive oil’s. In linoleic acid oxidation system，the ability of Chinese dwarf cherry seed oil to
scavenge alkyl radical was better than VC’s and olive oil’s.So，It was concluded that Chinese dwarf cherry seed
oil had better antioxidant activity.
Key words:Chinese dwarf cherry seed oil;antioxidant activity;reducing power;hydroxyl radicals;superoxide anion
radical;alkyl radical
中图分类号:TS222 + .1 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2012)15－0105－04
收稿日期:2011－12－23
作者简介:林海(1970－) ，男，副教授，主要从事植物学方面的研究。
基金项目:河南省科技攻关项目(0624090004－2)。
欧李果仁为蔷薇科樱桃属落叶小灌木欧李的果
仁。欧李果仁中钙、钾、磷、铁、锌、硒的含量均高于
常见果树品种，可以入药，具有清热利水之功效，中
药上叫做“郁李仁”［1］。薛勇［2］通过双相溶剂法提取
出欧李仁油并对其油脂成分进行分析，从欧李仁油
中共检测出 43 种物质，含量最多的是 γ－谷甾醇，约
占总量的一半，角鲨烯(三十碳六烯)、维生素 A(视
黄醇)、γ－生育酚、异香橙烯等物质含量也较高，其它
物质主要是脂肪醇和烃类物质。但是，目前对欧李
仁油是否具有抗氧化活性及抗氧化活性的大小等问
题尚未见研究。为此，本实验采用 Fenton 反应检
测［3］、邻苯三酚自氧化法［4-5］、磷钼络合物法［6］、铁氰
化钾法［7］、Beauchamp C的方法［8］等测定欧李仁油的
总抗氧化活性、还原力及其对羟基自由基(·OH)、
超氧阴离子(O －2 ·)、烷基自由基(R·)三种自由基
的清除能力，从而对欧李仁油抗氧化活性进行探讨。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
欧李仁油 以河南科技大学林学院实验田中采
集的欧李果仁为原料，用索氏提取法提取;橄榄
油 品利初级初榨橄榄油，产地西班牙，超市购买;
VC 分析纯，天津市大茂化学试剂厂;磷钼试剂
(0.6mol /L浓硫酸、28mmol /L 磷酸钠和 4mmol /L 钼
酸铵)、无水乙醇、铁氰化钾、氯化铁、三氯乙酸、磷酸
二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸亚铁、Tris、HC1、30%双氧
水、水杨酸、蒸馏水、邻苯三酚、亚油酸、硫代巴比妥
酸等 均为分析纯。
分光光度计(723 型) ;索氏提取仪(2045 Auto
System)。
1.2 实验方法［6－7］
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2012.15.010
106
1.2.1 总抗氧化能力的测定
1.2.1.1 磷钼络合物法［6］ 用无水乙醇配制浓度分
别为 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg /mL 的欧李仁油溶液、橄
榄油溶液及 0.20、0.25、0.30、0.35、0.40mg /mL 的 VC
溶液备用;取 4mL 磷钼试剂，加入 0.4mL 样品液，
95℃水浴中恒温 90min;在 695nm波长下用乙醇调零
测其吸光度。所有测定平行进行三次，取平均值。
1.2.1.2 铁氰化钾法［7］ 取 1.2.2.1 配制的各样品液
1mL，加入 0.2mol /L、pH6.6 的磷酸缓冲液 2.5mL和质
量分数 1%铁氰化钾溶液 2.5mL，混合后在 50℃条件
下放置 20min;加入质量分数 10% 三氯乙酸溶液
2.5mL，4800r /min 条件下离心 10min;取上清液
2.5mL，加入 2.5mL 乙醇和质量分数 0.1% 氯化铁
2.5mL，混匀，静置 10min;在 700nm 处用乙醇调零测
其吸光度。
1.2.2 羟基自由基的生成及清除率的测定 用无水
乙醇配制浓度分别为 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mg /mL
的欧李仁油溶液、橄榄油溶液及 0.2、0.25、0.3、0.35、
0.4、0.45mg /mL的 VC 溶液备用;取 10mL 离心管，依
次加入 2mL 不同浓度的样品溶液，8.0mmol /L 的
FeSO4 溶液 0.6mL，20mmol /L 的 H2O2 溶液 0.5mL，
3.0mmol /L的水杨酸溶液 2.0mL;将离心管于 37℃反
应 30min，流水冷却，在 2000r /min 条件下离心
10min;取上清液于 510nm 处，以乙醇调零比色得 A1
值。以乙醇代替 20mmol /L H2O2 测定 A2 值，以乙醇
代替样品溶液测定 A0 值。平行测定三次。
其清除率计算公式如下:清除率(%)=［A0 －
(A1 －A2) ］/A0 × 100
式中:A0 为未加清除剂的吸光值;A1 为加入清
除剂的吸光值;A2 为试剂空白的吸光值。
1.2.3 超氧阴离子自由基的生成及清除率的测定
用无水乙醇配制浓度分别为 0.2、0.4、0.6、0.8、
1mg /mL的欧李仁油溶液、VC 溶液及 5、7、9、11、
13mg /mL的橄榄油溶液备用;取 50mmol /L，pH 为
8.2 的 Tris－HCl缓冲液 4.5mL(其中含有 2mmol /L 的
EDTA·2Na) ，加 0.1mL 不同浓度的样液，于 25℃保
温反应 10min;然后加入 25℃预温过的 5mmol /L 邻
苯三酚溶液 0.2mL，混合后迅速于干燥的比色皿中，
3min内在 320nm下每隔半分钟测定一次溶液的吸光
值，以 10mmol /L 的 HCl 为空白调零，对照组以等体
积乙醇代替样品;作吸光度随时间变化曲线的回归
方程，其斜率为邻苯三酚的自氧化速率。按下式计
算样品对 O －2 ·的抑制率:
抑制率(%)=(V对照－V样品)/V对照 × 100
式中:V对照:对照组邻苯三酚自氧化速率吸光度;
V样品:样品组邻苯三酚自氧化速率吸光度。
1.2.4 烷基自由基的生成及清除率的测定 用无水
乙醇配制浓度分别为 0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg /mL
的欧李仁油溶液，0.10、0.15、0.20、0.25、0.30mg /mL 的
VC 溶液及 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg /mL 的橄榄油溶液
备用;将 5mL 乙醇、5mL0.1mg /mL 磷酸缓冲液
(pH8.0)、1mL 不同浓度的样品与 0.1mL 亚油酸混
合，用 30W 紫外灯的紫外光照射 60min;然后加入
4mL 三氯乙酸(20%，W/V)、1mL 硫代巴比妥酸
(3%) ，95℃反应 90min，于 532nm 处比色。以乙醇
作为空白调零。
清除率计算公式:
清除率(%)=(A0－A1)/A0 × 100
式中:A0 为不加样品的吸光度;A1 为加入样品
的吸光度。
2 结果与分析
2.1 欧李仁油的总抗氧化能力
2.1.1 磷钼络合物法测定结果 欧李仁油溶液、VC
溶液、橄榄油溶液的总抗氧化活性如图 1 所示。由
图 1 可以明显看出，在实验浓度范围内，欧李仁油、
橄榄油和 VC 的吸光值均随着浓度的增大而增大，而
且在相同浓度条件下，欧李仁油的吸光值总是大于
橄榄油而小于 VC，即欧李仁油抗氧化活性大于橄榄
油的抗氧化活性，但小于 VC 的抗氧化活性。
图 1 欧李仁油、橄榄油和维生素 C总抗氧化活性的比较
Fig.1 Comparison of the total antioxidant activity
among Chinese dwarf cherry seed oil，olive oil and VC
2.1.2 铁氰化钾法的测定结果 如图 2 所示，在实验
浓度范围内，欧李仁油、VC、橄榄油的吸光值均随着
浓度的增大而增大，即欧李仁油、VC、橄榄油的还原
力(即总抗氧化活性)均随着浓度的增大而增大。当
吸光值为 0.400 时，欧李仁油、VC、橄榄油的浓度大小
为橄榄油 ＞欧李仁油 ＞ VC，即三者的还原力大小顺
序为:VC ＞欧李仁油 ＞橄榄油。
2.2 欧李仁油对羟基自由基的清除能力
由图 3 可以看出，欧李仁油、VC、橄榄油对羟基
自由基有显著的清除作用。在实验浓度范围内，欧
李仁油、VC、橄榄油对羟基自由基的清除作用随着浓
度的增大而升高。当清除率为 50%时，欧李仁油、
VC、橄榄油对羟基自由基的清除能力大小为:欧李仁
油 ＞ VC ＞橄榄油，这说明欧李仁油对羟基自由基的
清除能力强于 VC 和橄榄油。
2.3 欧李仁油对超氧阴离子自由基的清除能力
由图 4 可知，欧李仁油对超氧阴离子自由基清
除作用不是很强，浓度为 0.8mg /mL 时达到最大清除
率 25%，之后随浓度的升高而降低。VC 和橄榄油对
107
表 1 欧李仁油、VC、橄榄油清除烷基自由基能力的比较
Table 1 Comparison of the alkyl radical scavenging activity of Chinese dwarf cherry seed oil，olive oil and VC
欧李仁油 VC 橄榄油
浓度(mg /mL) 清除率(%) 浓度(mg /mL) 清除率(%) 浓度(mg /mL) 清除率(%)
0.02
0.04
0.06
0.08
0.10
19.27
41.81
53.39
60.79
72.09
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
8.76
19.94
49.55
75.31
85.14
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
10.17
32.82
47.91
56.27
79.89
图 2 欧李仁油、橄榄油和维生素 C还原能力的比较
Fig.2 Comparison of the reducing power among Chinese
dwarf cherry seed oil，olive oil and VC
图 3 欧李仁油、橄榄油和 VC 清除羟基自由基能力的比较
Fig.3 Comparison of the hydroxyl radical scavenging activity
of Chinese dwarf cherry seed oil，olive oil and VC
超氧阴离子自由基有较强的清除作用，并且随着浓
度的增加而升高。在清除率达到 50%时，VC 的浓度
远远小于橄榄油的浓度，说明 VC 对超氧阴离子自由
基的清除能力大于橄榄油，也大于欧李仁油。
2.4 欧李仁油对烷基自由基的清除能力
图 4 欧李仁油、橄榄油和 VC 清除
超氧阴离子自由基能力的比较
Fig.4 Comparison of the superoxide anion radical scavenging
activity of Chinese dwarf cherry seed oil，olive oil and VC
由表 1 可知，在实验浓度范围内，欧李仁油、VC、
橄榄油对烷基自由基具有较强的清除能力。表 1 中
数据显示，欧李仁油对烷基自由基的清除能力最强，在
浓度为 0.06mg /mL时清除率达到 53.39%，而橄榄油对
烷基自由基的清除能力较差，在浓度为 0.3mg /mL 时
清除率只有 47.91%，VC 和橄榄油对烷基自由基的清
除能力相当，但均比欧李仁油低。
3 结论与讨论
比较段光东［6］、童汉清［9］、何文兵［7］、戴国彪［10］等
分别对芹菜籽油、胡椒油、燕麦麸油、芫荽籽油的研
究结果后发现，欧李仁油的总抗氧化活性或清除自
由基能力的能力大于芹菜籽油的抗氧化活性或胡椒
油、燕麦麸油清除的自由基能力，但较芫荽籽油对羟
基自由基的清除能力小。欧李仁油之所以具有较好
的抗氧化能力，可能与欧李仁油中含有的多种抗氧
化成分角鲨烯、亚油酸、多酚、维生素(VC、VE 及其衍
生物)、多糖、酶、蛋白质和氨基酸等有关。
金越［11］、徐莉［12］等的实验证实 VC 和橄榄油具有
极强的自由基清除能力，本实验中欧李仁油清除羟
基自由基、烷基自由基的能力大于 VC 和橄榄油，对
超氧阴离子自由基的清除能力小于 VC 和橄榄油，但
这也足以说明欧李仁油具有较强的清除自由基的能
力，在医药、食品等加工业方面将有广阔的应用
(下转第 111 页)
111
小取决于分子中基团作为氢供体能力的大小。
3 讨论
黑色素是一类只溶于碱而不溶于其他溶剂的大
分子物质，其抗氧化性质已有广泛地报道［14－16］，从核
桃壳和核桃青皮中提取的黑色素由于来源不同，含
量存在差异，反映出来的抗氧化活性也略有不同。
在一定浓度范围内，核桃壳黑色素和核桃青皮黑色
素可以作为羟自由基的清除剂，也可作为氢供体，使
DPPH·褪色，且抗氧化活性随浓度的增加而增强。
总体上来说，核桃青皮黑色素对 DPPH·和·OH 的
清除能力均强于核桃壳黑色素和人工合成的抗氧化
剂 BHT，还原能力与 BHT 相仿，清除 O －2 ·的能力强
于核桃壳黑色素，稍弱于 VC。
红外光谱分析是了解黑色素结构最常用的一种
方法。组成分子的各种基团都有自己特定的红外特
征吸收峰。虽然有了核磁共振等先进方法可对黑色
素的结构进行鉴定，但是目前还没有得到天然黑色
素的完整结构，普遍认为黑色素是一类吲哚和多酚
的聚合体［17］。国内外许多学者对不同来源的黑色素
的红外光谱进行了对比研究，发现黑色素的主要功
能基团是一致的［18－19］。本研究所得红外图谱显示，从
核桃壳和核桃青皮中提取的黑色素结构相似，同样
含有羟基等活性基团，这可能就是其具有抗氧化活
性能力的原因。
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537－539.
(上接第 107 页)
前景。
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