全 文 ：子组织培养快繁技术研究
刘玉冬 , 刘艳军 , 杨静慧 , 桂 毓 , 朱文碧 , 武春霞　(天津农学院 ,天津 300384)
摘要　[目的]为了建立 子的组织培养快繁体系。[方法] 取 子的侧芽消毒后 ,接种到 1/2 MS培养基上 , 10 d后将生长健壮的 子侧
芽分别接种到含有不同浓度激素的MS培养基上 ,培养 30 d后 ,从中筛选出增殖率最高的培养基配方;后将增殖出的芽切下 ,接种到含有
不同浓度激素的伸长培养基上进行伸长培养 , 30 d后 ,从中筛选效果最好的培养基配方;将伸长后的芽接切下 ,接种到含有不同浓度生
长激素的 1/ 2MS 培养基上 ,培养 60 d后 ,从中筛选生根效果最好的培养基。[结果] 子增殖率最高的培养基配方为MS+6-BA 0.5mg/L
+IAA 0.5mg/L;伸长培养效果最好的培养基配方为MS+6-BA 0.5 mg/L +IAA 1.0 mg/L;生根效果最好的培养基为 1/2 MS+NAA 0.5
mg/L。[结论]该研究可以为 子的繁殖推广奠定基础。
关键词　 子;组织培养;培养基;快繁
中图分类号　S 603.6　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)09-03947-02
Tissue Culture and Rapid Propagation of Cotoneaster bullatus
LIU Yu-dong et al　(Tianjin Agricultural College, Tianjin 300384)
Abstract 　[Objective] The research aimed to establish the system of Cotoneaster bullatus tissue culture and rapid propagation.[Method] The shoots of
C.bullatus were disinfected and inoculated on 1/2 MS medium and the buds were used for tissue culture after 10 d.The shoots of C.bullatus were re-
generated from the disinfected buds on MS medium containing hormones of different concentration.And the optimal media were selected.The regenerated
buds were inoculated on MS medium containing hormones of different concentration for elongation.After 30 d , the optimal mediawere selected.The buds
of elongated were cut down and were inoculated on MS medium containing hormones of different concentration for rooting.After 60 d , the optimal media
were selected.[ Result] The experimental results suggested that the optimal media with highest proliferation rate were MS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 0.5
mg/L.The optimal mediawith best elongation effects wereMS+6-BA 0.5 mg/L+IAA 1.0mg/ L.The optimal media with best rooting effects were 1/2
MS+NAA 0.5 mg/L.[ Conclusion] This research could provide basis for the propagation and extension of C.bullatus.
Key words　 Cotoneaster bullatus;Tissue culture;Medium;Rapid propagation
基金项目　“重盐碱地旱荒地改良植物选育”课题(072CKFNCO1100)。
作者简介　刘玉冬(1967-), 男 ,天津人 ,副教授 ,从事园艺方面的
研究。
收稿日期　2009-01-12
　　 子属植物隶属蔷薇科 ,全世界约有 90余种 ,我国分布
广泛 ,主产于西部和西南部 ,约有 58种[ 1] 。主要用作绿篱 、
布代岩石园及观花果材料[ 2] 。作为观花果材料不仅花果鲜
艳 ,不少种类还具有弧形枝条及艳丽的秋色红叶[ 3] 。目前 ,
我国各地对 子属植物的引种栽培较少 ,北京植物园曾一度
收集很多种类 ,但后来保存很少。上海植物园的前身———龙
华苗圃 20世纪 50年代开始有少量引种 ,60年代初开始用于
制作盆景 , 1974年建园后引种较多 ,大量引种是在 1979至
1981年[ 4-5] 。
为了进一步利用国外珍贵的 子属植物资源 ,天津农学
院园林植物教研室于 2008年正式从加拿大引进 子属植物 ,
力求通过引种试验 ,既收集丰富的种质资源 ,又全面了解其
生物学特性 、在天津的生长表现以及栽培管理要求 ,并进而
筛选出推广种 ,供园林绿化应用[ 6-8] 。该研究主要是通过组
织培养技术加快 子的生长繁殖速度 ,在较短的时间内繁殖
出尽可能多的引种材料 ,为这一园林植物的繁殖推广奠定
基础。
1　材料与方法
1.1　试验材料　试验所用 子(Cotoneaster bullatus)由天津
农学院园艺系园林植物实验室提供。
1.2　试验方法
1.2.1　外植体的消毒及预培养 。将预选好的试验材料用自
来水冲洗 30min ,在超净工作台上按以下程序进行表面消毒
处理:用 70%的酒精浸湿 30 s ,取出后再采用含有效氯 2.8%
的次氯酸钠水溶液进行消毒 15 min ,然后用无菌水冲洗 3～ 5
次 ,最后用无菌吸水纸吸干 ,将消毒处理的侧芽全部接种到
1/2 MS培养基上预培养 10 d后备用。
1.2.2　 子的芽增殖培养。将预培养 10 d后的健壮侧芽分
别接种到含有不同激素浓度配比的 MS培养基上 ,加浓度
3%蔗糖 ,浓度 0.7%琼脂 ,调至 pH 值 5.8 。培养温度控制在
(25±2)℃,光照时间 12 h/d ,光照强度 2000 lx。培养 30 d后
对增殖情况进行统计。
增殖培养基配方:①MS +6-BA 0.25 mg/L+IAA 0.2
mg/L;②MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L;③MS+6-BA 1.0
mg/L+IAA 1.0mg/L;④MS+6-BA 2.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L;
⑤MS+6-BA 3.0mg/L+IAA 1.0mg/L。
1.2.3　 子的芽伸长培养。将在增殖培养基上长出的芽分
别接种到含有不同激素浓度配比的MS培养基上进行伸长培
养 ,培养 30 d后对伸长情况进行统计。
伸长培养基配方:①MS +IAA 0.2 mg/L;②MS +6-BA
0.25mg/L+IAA 0.25mg/L;③MS+6-BA 0.25mg/L+IAA 0.5
mg/L;④MS+6-BA 0.25mg/L+IAA 1.0mg/L。
1.2.4　 子再生芽的生根培养。当 子组培苗长至 2～ 3 cm
时 ,将生长健壮的小苗切成单苗接种于以下生根培养基上 ,
诱导生根培养基用 1/2MS 、蔗糖 20 g/L ,pH值为 5.8 ,添加不
同浓度 IAA 和不同浓度NAA ,每种培养基接种 50株 ,培养 60
d后统计试验结果 。
生根培养基配方:①1/2MS+IAA 0.5mg/L;②1/2 MS+
IAA 1.0mg/L;③1/2 MS+IAA 2.0mg/L;④1/2 MS+NAA 0.3
mg/L;⑤1/2MS+NAA 0.5mg/L;⑥1/2 MS+NAA 1.0mg/L。
2　结果与分析
2.1　不同浓度激素培养基对 子芽增殖的影响　将预培养
10 d后的健壮侧芽分别接种到含有不同激素浓度配比的MS
培养基上进行增殖培养 ,从表 1可以看出 ,随着 6-BA浓度的
增加 , 子每个芽增殖数开始增加 ,但当 6-BA 浓度超过 1.0
mg/L时 , 子每个芽增殖数变小。从每个芽增殖数的情况
来看 ,6-BA浓度达到 1.0mg/L时 , 子每个芽增殖数最大 ,
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2009, 37(9):3947-3948　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　张彩丽　责任校对　况玲玲
但从芽生长情况来看 , 6-BA浓度达到 0.5mg/L时 ,再生出的
芽生长更健壮一些。因此 ,综合以上因素 , 子芽的增殖最
适培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L ,光照时间为
12 h/d ,光照强度为 2 000 lx。
表1　不同浓度激素培养基对 子芽增殖的影响
Table 1　Effects of media with different concentrations of hormones on the
bud proliferation of Cotoneaster bullatus
培养基配方
Medium
formula
接种芽数∥个
Number of
inoculated
buds
每个芽增殖数∥个
Proliferated
number of
peach buds
芽生长情况
Growth
status
of buds
① 50 1.1 健壮
② 50 3.2 健壮
③ 50 4.5 一般 ,有玻璃化现象
④ 50 4.0 一般 ,有玻璃化现象
⑤ 50 1.4 弱 ,有玻璃化及卷边现象
2.2　不同浓度激素培养基对 子芽伸长的影响　将增殖培
养基上长出的芽分别接种到含有不同激素浓度配比的MS培
养基上进行伸长培养 ,从表 2可以看出 ,当培养基中只加入
生长素时 , 子的平均生长速度较慢 ,芽的生长情况表现出
细弱现象;当培养基中加入 6-BA 后 子的平均生长速度加
快 ,芽的生长情况表现为健壮;但随着 6-BA/IAA 浓度的比值
变化时 , 子每个芽平均长度也随之变化 ,当 6-BA/IAA 浓度
的比值为 1/2时 , 子每个芽平均长度最大 ,且长出的芽生
长更健壮一些。因此 ,综合以上因素 , 子芽伸长的最适培
养基为MS+6-BA 0.25mg/L+IAA 0.5mg/L ,光照时间为 12
h/d ,光照强度为 2 000 lx。
表2　不同浓度激素培养基对 子芽伸长的影响
Table 2　Effects of media with different concentrations of hormones on the
bud elongation of C.bullatus
培养基配方
Medium
formula
接种芽数∥个
Number of
inoculated buds
每个芽伸长长度∥cm
Elongated length
of each bud
芽生长情况
Growth status
of buds
① 50 2.1 弱小
② 50 3.3 健壮
③ 50 4.1 健壮
④ 50 3.0 一般
2.3　生长素 IAA 、NAA对 子无菌苗生根的影响　从表 3
可以看出 ,当培养基中加入 IAA时 ,随着 IAA浓度的增加(从
0.5 mg/L增加到 2.0mg/L), 子组培苗生根率也不断提高 ,
但生根数很低 ,而且根的质量一般 ,即根的粗度不够 ,且易在
移栽时脱落;当培养基中加入NAA时 ,随着 NAA浓度的增
加(从 0.3 mg/L增加到 1.0mg/L), 子组培苗生根率也不断
提高 ,当NAA浓度为 0.5 mg/L时达到 100%,当NAA浓度增
加到 1.0mg/L时 ,生根的质量随之下降 , 平均每株生根数也
下降。因此 , 子组培苗较为理想的生根培养基 ,生根率最
高 、生根的质量也最好的配方为 1/2MS+NAA 0.5mg/L。
3　结论与讨论
3.1　6-BA/IAA浓度比值对 子芽增殖的影响　6-BA/IAA
浓度比值对植物材料的影响 ,一般是比值高时有利于分化 ,
低时利于生长 ,但过高或过低时都不会获得较理想的结果。
在试验中 ,随着 6-BA/IAA 浓度比值的增加 , 子每个芽增殖
数也增大 ,但当达到一定量时(2∶1), 子每个芽增殖数开始
下降 ,说明 6-BA/IAA浓度比值适度时 ,获得芽的增殖率才能
达到最大;同时 ,从再生芽的质量来看 ,当 6-BA/IAA 浓度比
值达到 1时 ,再生芽开始出现玻璃化现象 ,说明高的 6-BA/
IAA浓度比值不利于芽的增殖生长 。
表3　IAA、NAA对 子组培苗生根的影响
Table 3　Effects of IAA and NAA on the rooting of C.bullatus tissue cul-
ture seedlings
培养基配方
Medium
formula
接种数∥个
Inoculated
number
生根率∥%
Rooting
rate
平均每株生根数∥个
Average root number
of each plant
根的质量
Root
quality
① 50 　　　5.2 1.5 一般
② 50 13.3 1.2 一般
③ 50 16.4 2.0 一般④ 50 74.2 4.2 较好
⑤ 50 100.0 5.8 较好
⑥ 50 100.0 5.1 一般
3.2　 子再生芽伸长培养的意义　 子再生芽初期较细
弱 ,如果直接用于生根 ,细弱的再生苗将大大降低再生苗的
生根率及移栽成活率 ,从而使快繁效果下降。因此 ,在生根
培养前进行 1～ 2次的伸长继代是十分必要的。
3.3　生长素 IAA 、NAA对 子无菌苗生根的影响　比较
IAA 、NAA对 子无菌苗生根的情况来看 ,NAA的效果要明
显好于 IAA ,不论从生根数量 ,还是质量上都较 IAA好 ,这说
明 子对生长素NAA 的反应更强些 ,这是在许多木本植物
中常出现的现象 ,尤其对于难生根的植物如 子 ,在生根培
养中更凸显出NAA的优势效果。
3.4　 子组织培养最佳方案　通过以上试验 ,得出 子组
织培养快繁的最佳方案为:取 子的侧芽消毒后 ,接种到
1/2MS培养基上 ,10 d后将生长健壮的 子侧芽分别接种到
增殖培养基MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.5mg/L上;30 d后将
增殖出的芽切下 ,接种到培养基MS +6-BA 0.5mg/L+IAA
1.0mg/L上;30 d后将伸长到 2 ～ 3 cm后的芽切下 ,接种到培
养基 1/2MS+NAA 0.5mg/L上;60 d后将生好根的 子组培
苗栽植到基质中进行入地培养。
参考文献
[ 1] 西宁植物志编辑委员会.西宁植物志[M] .北京:中国藏学出版社 ,
1999:273.
[ 2] 苏小惠.平枝 子盆景的制作与养护[ J] .特种经济动植物 ,2005(12):12-13.
[ 3] 陈振光.园艺植物离体培养学[M] .北京:中国农业出版社 ,1996.
[ 4] 周丽华 ,尹擎 ,吴征镒.矮生 子的分类学研究[ J] .云南植物研究 ,
2000 ,22(4):379-382.
[ 5] 周丽华 ,吴征镒.小叶 子的分类学研究[ J] .云南植物研究 , 2001 , 23
(2):162-168.
[ 6] 柴慈江 ,史燕山,骆建霞 ,等.子的组织培养与快速繁殖[ J] .植物生
理学通讯, 2006(3):7-9.
[ 7] 李晓玲 ,李毅丹.平枝 子的组织培养和快速繁殖[ J] .植物生理学通
讯 ,2006(3):9-11.
[ 8] 郭伟珍 ,林艳 ,曹军合.平枝 子的组培快繁技术[ J] .林业实用技术 ,
2006(10):4-6.
[ 9] LIU HM ,LINGHU K Y ,FANG X B.The study on induction and proliferation of
tube bulbsin Lilium brownii[ J] .Agricultural Science&Technology ,2008, 9(1):
18-20, 53.
[ 10] 蒲海萍,黄洁.水 子组织培养的研究[ J] .青海农林科技 , 2008(1):31
-32.
[ 11] JIANG Q , DONG L ,NING Z Y , et al.Establishment of somatic cell clones in
Thesium chinense Turcz and its in vitro rooting technique[ J] .Agricultural Sci-
ence &Technology , 2008,9(5):47-49, 52.
3948 　　　　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年