全 文 ：尿病最常见的并发症之一 , 其发生率占糖尿病的 60%以
上 [ 2] , 在糖尿病伴有严重心脏自主神经病变患者无痛性心肌
梗死 、恶性心律失常 、心源性猝死的发生率明显增加 [ 2] , 因此
早期诊断对临床具有预测价值。 HRV分析是一种能够为临
床早期发现 2型糖尿病患者心血管自主神经功能异常的较好
方法 [ 3] 。
络病学理论认为冠心病心律失常的中医病理机制为气阴
两虚而致络虚不荣 、络脉瘀阻 , 提出络虚不荣与心脏传导系统
和自主神经功能异常的内在相关性 , 确定益气养阴 、活血通
络 、清心安神的治疗法则 ,并结合其临床经验组成了参松养心
胶囊处方。该方标本兼治 , 通补并用 ,组方严谨 ,充分发挥其
在抗心律失常方面的整体协同作用 [ 4] 。
本文结果显示糖尿病患者口服参松养心胶囊 1个月 , 患
者 SDNN、SDANN、r-MSSD均较治疗前均有提高(P<0.05或
<0.01),说明参松养心胶囊能提高糖尿病患者的 HRV, 改善
心脏自主神经系统功能。
参考文献
1　孙瑞龙 , 吴宁.心率变异性临床应用的建议.中华心血管病志 ,
1998, 8:254.
2　TaskForceoftheEuropeansocietyofcardiologyandNorthAmerican
SocietyofpacingandElectrophysiolgy.Heartratevariabilitystandards
ofmeasurement, physiologicalinterpretationandclinicaluse.Circula-
tion, 1996, 93:1043-1065.
3　苗青 ,吕卓人.非胰岛素依赖糖尿病患者心血管自主神经功能与心
率变异性 ,中华心血管病杂志 , 1998, 8:256-259.
4　吴以岭.络病学.中国科学技术出版社 , 2004:281-282.
垂盆草中总黄酮含量测定方法研究
贾苒　刘泽荣　付晓泰
【摘要】　目的　建立垂盆草中总黄酮含量的测定方法 。方法　以 50%的乙醇为溶剂超声提取垂盆
草中的黄酮类成分 ,用聚酰胺柱吸附黄酮类化合物 ,再以芦丁为对照品 ,用紫外可见分光光度法(UV)测
定总黄酮的含量 。结果　总黄酮在 10 ～ 68 μg/ml浓度范围内线性关系良好 (r=0.999 8 , n=7),平均加
样回收率为 95.7%,相对标准偏差 RSD=0.84%(n=6),重复性的 RSD为 0.63%。结论　本方法简便 、
快速 、灵敏度高 ,测定结果准确 、重现性好 ,能满足垂盆草药材及制剂质量控制的要求 。
【关键词】　垂盆草;总黄酮;含量测定;紫外可见分光光度法
　　垂盆草(HerbaSedi)为景天科植物垂盆草(SedumSar-
mentosumBunge)的干燥全草 ,具有利湿 、解毒之功效 , 为《中
国药典》二部收载的药材。可用于治疗湿热黄疸 , 小便不利 ,
急慢性肝炎等疾病。垂盆草中 , 除含有垂盆草苷外 , 还含有黄
酮类和甾醇类化合物 [ 1, 2] 。早期的研究一般选择垂盆草苷为
质量控制指标 [ 3, 4] , 但垂盆草苷对热和光的稳定性很差 [ 5] , 使
得垂盆草苷难以用于垂盆草药材和中成药的质量控制。事实
上 , 垂盆草及含垂盆草的制剂的国家标准均没有用垂盆草苷
作为含量控制指标。潘金火等研究了垂盆草中异鼠李素-3,
7-二葡萄糖苷的含量 [ 6]及保肝降酶作用 [ 7] , 证明垂盆草中的
黄酮类成分是保肝降酶的药效成分。因此 , 以垂盆草中的总
黄酮含量为指标来控制垂盆草药材及其制剂的质量可能更为
合理。用卢丁作对照品 ,利用显色反应测定中药材中的总黄
酮已有报道 [ 8, 9] , 但未见垂盆草总黄酮的研究报道。本文研
究了垂盆草总黄酮的提取 、分离条件 , 参照文献 [ 8]的显色方
法 , 建立了垂盆草中总黄酮测定方法。实验表明 , 本法简便 、
准确 , 可以作为垂盆草及其制剂的质量控制方法。
1　仪器与试药
1.1　仪器　Agilent8453紫外可见分光光度计(安捷伦科技
有限公司), KQ-500B型超声波清洗器(500W, 昆上市超声仪
器有限公司), TDL-40B型台式离心机(265W, 上海安亭科学
仪器厂制造)。
1.2　试药　对照品:芦丁对照品(中国药品生物制品检定
所),垂盆草药材(购自重庆众景中药饮片有限公司 ,符合《中
　　作者单位:430074 武汉 , 中国地质大学材料科学与化学工程学
院(贾苒);重庆医药工业研究院有限责任公司(刘泽荣　付晓泰)
华人民共和国药典》 2005年版垂盆草项下规定);试剂:甲醇 、
乙醇 、亚硝酸钠 、硝酸铝 , 氢氧化钠均为分析纯 , 水为纯化水;
层析用聚酰胺(30 ～ 60目 , 上海警备区后勤部综合厂)。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备　对照品溶液的制备 精密称取 120℃减压
干燥至恒重的芦丁对照品 24.0 mg, 置 50 ml容量瓶中 ,加入
60%的乙醇使溶解并稀释至刻度 , 摇匀。
供试品溶液的制备 精密称取垂盆草粗粉(24目)约 4.0 g
(可根据总黄酮含量适当增减),置具塞锥形瓶中, 加入 50%乙
醇 40ml浸泡 1 h后 ,超声提取 3次(40 ml×3), 每次提取 40
min,离心 ,合并上清液 ,浓缩 , 滤过 ,加 50%乙醇稀释至 50 ml,
得提取液。精密移取提取液 15ml,置小烧杯中 ,水浴浓缩至约
5ml,转移至聚酰胺玻璃层析柱(层析柱的制备:取 3 g聚酰胺 ,
采用湿法装于 1.8 cm×30cm的玻璃柱中, 用 50 ml甲醇和 60
ml水依次冲洗即可),先用 60 ml水洗脱 ,弃去水洗脱液。再用
250 ml50%乙醇洗脱 ,收集洗脱液 ,浓缩至约 40 ml, 转移至 50
ml量瓶 ,用 50%乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶液。
2.2　测定方法　取供试品溶液及对照品溶液适量 , 置 10 ml
量瓶中 , 精密加入 0.7 mol/L亚硝酸钠溶液 0.3 ml, 摇匀 , 放
置 6 min, 加入 0.5 mol/L硝酸铝溶液 0.3 ml, 摇匀 , 放置 6
min, 再分别加入 1 mol/L的氢氧化钠溶液 4 ml, 分别用水稀
释至刻度 , 摇匀 ,显色 15 min。取相同量的供试品溶液不加显
色剂(亚硝酸钠和硝酸铝溶液), 其他同法操作得到的溶液作
为参比溶液。按紫外-可见分光光度法测定吸光度。
2.3　紫外检测波长的选择　取供试品溶液 、芦丁对照品溶
液 , 按 2.2方法显色后 , 以不显色的溶液为参比 , 进行扫描。
供试品溶液总黄酮显色产物和芦丁显色产物在 510 nm波长
·84· 中国实用医药 2007年 12月第 2卷第 36期　ChinaPracMed, Dec2007, Vol.2, No.36
处均有最大吸收(见图 1、图 2), 且溶剂空白和未显色的样品
溶液在 510 nm处无干扰。
图 1　垂盆草总黄酮显色产物的吸收光谱图
1.未显色的样品溶液　　2.显色后样品溶液
图 2　芦丁对照品和试剂空白的吸收光谱图
1.芦丁　　2.试剂空白
2.4　线性关系考察　精密量取对照品溶液 0.0、 0.5、 1.0、
1.5、2.0、2.5、 3.0、3.5 ml置于 25 ml容量瓶中 , 各加 60%的
乙醇溶液使成 3.5 ml, 精密加入 0.7 mol/L亚硝酸钠溶液
0.75 ml,摇匀 , 放置 6min,在各加 0.5 mol/L硝酸铝溶液 0.75
ml,摇匀 ,放置 6 min,再分别加入 1 mol/L的氢氧化钠溶液 10
ml,分别用水稀释至刻度 , 摇匀 , 显色 15 min后 , 以第一瓶溶
液为空白 , 在 510 nm的波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐
标 , 浓度为横坐标 , 绘制标准曲线 , 得回归方程:A=0.011
3C-0.011 (R=0.999 8, n=7)。结果表明:芦丁对照品在 10
～ 68 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。
2.5　精密度试验　精密移取同一供试品溶液 6份 , 每份 4.0
ml,分置 10ml容量瓶中 ,按 2.3的方法显色后测定吸收度。
6份溶液的吸光度值的 RSD为 1.32%,表明该方法的精密度
良好。
2.6　溶液的稳定性试验　精密移取供试溶液液及对照品溶
液 , 按照测定方法显色后 ,每隔 5 min测定吸光度一次。考察
供试品溶液和对照品溶液的吸光度的变化。结果表明 ,在显
色 60 min内对照品溶液比较稳定 , RSD为 0.29%(n=7);供
试品溶液随放置时间的增长略有下降 , RSD为 1.5%(n=7)。
表明显色后的溶液不宜长时间放置 , 应在 60 min内完成
测定。
2.7　回收率试验　采用加样回收法 ,精密称定已知含量的垂
盆草粗粉(批号:040802)6份 , 定量加入芦丁对照品 , 按供试
品溶液制备和测定方法进行操作 , 以外标法计算总黄酮的含
量 , 计算回收率 , 结果如下表 1。 本法的回收率在 95.1% ～
96.9%,平均回收率为 95.8%, RSD为 0.84%(n=6), 可以满
足中药材和中成药定量分析的要求。
表 1　加样回收率测定结果(n=6)
编号 样重(g) 总黄酮的量(mg) 加入芦丁(mg) 测得量(mg) 回收率(%) RSD(%)
1 2.007 1 5.70 4.31 9.81 95.4
2 1.996 1 5.67 4.31 9.79 95.6
3 2.052 8 5.83 5.74 11.37 96.5 0.84
4 1.964 7 5.58 5.74 11.04 95.1
5 1.986 9 5.64 7.18 12.59 96.9
6 2.079 0 5.90 7.18 12.74 95.3
2.8　重复性试验　取一批样品(批号:040802), 制备 5份供
试品溶液 , 按照测定方法测定吸收度 , 以外标法计算总黄酮含
量。试验表明 , 总黄酮的平均含量为 2.84 mg/g, 相对标准偏
差 RSD为 0.63%,表明该方法的重复性良好。
2.9　样品测定　取三批垂盆草样品 ,照上述方法测定 , 其总
黄酮(以无水芦丁(C27H30O16)计)的结果见表 2。表 2　垂盆草中总黄酮测定结果
批号 总黄酮含量(mg/g) RSD(%)
040802 2.84(n=5) 0.63
040804 2.78(n=3) 1.60
040805 2.90(n=3) 1.40
3　讨论
3.1　提取条件的选择　比较了超声法 、回流法 、索氏法 3种
提取方法对总黄酮的提取效率 , 结果表明以超声法的提取效
率最高 , 故采用超声法进行提取。还考察了用水 、20%、40%、
50%、60%、70%、 80%、90%的乙醇的提取效果 , 其中以 50%
的乙醇提取效果最佳。进一步比较了不同的提取时间(20、
40、60、80、 100 min)、提取次数及提取溶剂用量对提取效果的
影响 , 结果显示以 10倍量溶剂每次提取 40min,提取 3次后 ,
总黄酮的提取率达到 97%以上。
3.2　聚酰胺层析分离条件选择　实验研究了聚酰胺用量 、不
同的洗脱剂及洗脱剂用量对供试品溶液制备的影响。研究表
明 , 3.0 g聚酰胺可吸附总黄酮 6mg,且用 250ml的 50%乙醇
洗脱黄酮类成分的洗脱率达到 97%以上。考虑到样品的总
黄酮含量会有变化 , 故实际的药材取用量为 4 g, 总黄酮上柱
量约为 3.5mg,保证了方法的耐受性。
3.3　结论　本法简便 、专属 、测定结果准确 , 且重复性好 , 能
满足垂盆草药材及其制剂质量控制的要求 。
参考文献
1　何爱民 ,王明时.垂盆草中的黄酮类成分.中草药 , 1997, 28(9):
517-522.
2　何爱民 ,郝红艳 ,王明时,等.垂盆草中的甾醇化合物.中国药科大
学学报 , 1997, 28(5):271-274.
3　吕湘林 ,曹秀玲 ,张叔良,等.垂盆草及其制剂的分析研究.药学学
报 , 1984, 19(2):914-920.
4　潘金火 ,欧阳臻.多花景天中垂盆草甙类成分的定性定量分析.南
京中医药大学学报 , 1996, 12(4):26-27.
5　潘金火 ,何满堂 ,罗兰 ,等.垂盆草药材质量控制方法的研究.成都
中医药大学学报 , 2002, 25(1):44-45.
6　潘金火 ,杨建平.垂盆草药材质量控制方法的研究.南京中医药大
学学报 , 2002, 18(2):103-104.
7　潘金火 ,薛春余 ,严娟 ,等.异鼠李素-3, 7-二-O-β-D-葡萄糖苷的保
肝降酶试验.时珍国医国药 , 2002, 13(12):714-715.
8　陈健 ,姚成.野马追中总黄酮的测定.南京师范大学学报(工程技
术版), 2004, 4(2):16-18.
9　邱雯 ,焦海胜 ,王彦恒.复方小叶批把水煎液中总黄酮和黄芩苷含
量测定.中国药房 , 2004, 15(1):46-48.
·85·中国实用医药 2007年 12月第 2卷第 36期　ChinaPracMed, Dec2007, Vol.2, No.36