全 文 ：第 35 卷第 4 期 通 化 师 范 学 院 学 报(自然科学) Vol． 35 №4
2014 年 8 月 JOUＲNAL OF TONGHUA NOＲMAL UNIVEＲSITY Aug． 201
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4
超声波辅助提取大叶子总黄酮工艺研究
*
李 明1，金 刚2，朱俊义3，徐 晶1
(1．通化师范学院 制药与食品科学学院，吉林 通化 134002;2．修正药业集团股份有限公司;
3．通化师范学院 生命科学学院，吉林 通化 134002)
摘 要:以大叶子总黄酮得率为指标，采用超声波辅助提取及单因素和正交试验的方法得出最佳提取工艺．结果为:超声时
间 15min、乙醇浓度 70%、料液比 1:60、提取温度 90℃、时间 80min，得率为 2． 53% ．
关键词:大叶子;总黄酮;提取;超声
中图分类号:Q946． 91 文献标志码:A 文章编号:1008 － 7974(2014)
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04 － 0012 － 03
大叶子(Astilboides tabularis)别名大脖梗子、山
荷叶，多年生草本，分布于吉林长白山和辽宁，生于
海拔 1000m 左右的林下． 朝鲜半岛也有分布． 大叶
子可食，民间常作为山野菜食用，且有收涩、固肠、止
泻的功效．中药化学成分为无色飞燕草素、无色矢车
菊素、槲皮素、没食子酸［1］． 大叶子是一种极具开发
潜力的药食两用植物．迄今为止，国内对大叶子的研
究还未见报道．本文主要研究大叶子总黄酮提取的
最佳工艺，以期为大叶子在保健食品开发方面的研
究提供依据．
1 材料与方法
1． 1 材料和仪器
大叶子，采集自吉林长白县，经通化师范学院于
俊林教授鉴定为大叶子;芦丁标准品，中国固体制剂
制造技术国家工程中心． 亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸
铝、乙醇等试剂均为分析纯．天平、真空干燥箱、粉碎
机、水浴锅、循环水式真空泵、可见分光光度计、超声
波清洗仪．
1． 2 方法
(1)原料处理．工艺流程:原料选取→清洗→烘
干→粉碎．选取大叶子鲜品，清洗后在真空干燥箱中
烘干，粉碎．
(2)总黄酮提取．工艺流程:大叶子干粉→加乙
醇超声提取→乙醇回流提取→过滤→测定总黄酮含
量．准确称取处理好的原料粉末 2g 于烧瓶中，加入
浓度 50%的乙醇溶液 95mL，在 500 W、40 KHz条件
下超声提取 5min后，在 80℃水浴中加热回流 30min
后抽滤，定容至 100mL．
(3)总黄酮含量测定［2］． 精密吸取 0． l mg /mL
的芦丁对照品溶液 0． 0、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、5． 0mL，
分别置于 10mL容量瓶中，加 30%乙醇使成 5mL．先
加 5%的 NaNO2 溶液 0． 3mL，混匀后放置 6min;再
加 10% 的 AI(NO3)3 溶液 0． 3mL，摇匀后放置
6min;最后加 4%的 NaOH 溶液 4mL，用蒸馏水稀释
到 10mL，摇匀，放置 15min，以第一管为空白，在
510nm波长处测定吸光度值，以吸光度值为横坐标，
芦丁对照品溶液浓度为纵坐标，绘制标准曲线． 从
100mL提取液中精密吸取 lmL 该溶液置于 10mL 容
量瓶中，加 30%乙醇使成 5mL，以下步骤同标准曲
线制作测定提取液中总黄酮含量．
(4)超声提取单因素试验设计． 准确称取处理
好的原料粉末各 2g 于烧瓶中，加入浓度为 50%的
乙醇溶液 95mL，在 500W、40KHz 条件下超声提取
5、10、15、20、30、35min 后，在 80℃水浴中加热回流
30min后抽滤，定容至 100mL．
(5)总黄酮回流提取单因素试验设计． ①乙醇
·21·
* 收稿日期:2014 － 04 － 24
作者简介:李明(1979 －) ，吉林通化人，硕士，实验师．
基金项目:通化师范学院校级项目(200951)．
浓度对得率影响．准确称取处理好的原料粉末各 2g
于烧瓶中，分别加入浓度为 10、30、50、70、90%的乙
醇溶液各 80mL，在 80℃水浴中加热回流 30min 后
抽滤，定容至 100mL．②提取温度对得率影响． 准确
称取处理好的原料粉末各 2g于烧瓶中，加入浓度为
50%的乙醇溶液 80mL，分别在 50、60、70、80、90℃
水浴中加热回流 30min后抽滤，定容至 100mL．③料
液比对得率影响．准确称取处理好的原料粉末各 2g
于烧瓶中，分别用 50% 的乙醇以物料比为 1:20、
l:30、l:40、1:50、1:60 混合，在 80℃水浴中加热回流
30min后抽滤，定容至 100mL．④提取时间对得率影
响．准确称取处理好的原料粉末各 2g 于烧瓶中，加
入浓度为 50%的乙醇溶液 80mL，在 80℃水浴中加
热回流 20、40、60、80、100min 后抽滤，定容至
100mL．⑤总黄酮提取正交试验设计．以单因素试验
为基础，选取乙醇浓度、提取温度、料液比、提取时间
四项作为考察因素，各取三个水平，进行 L9(3
4)正
交试验设计，以确定大叶子提取的最佳工艺条件，方
案见表 1．
表 1 正交试验因素水平
水平
因素
A
乙醇浓度(%)
B
温度(℃)
C
料液比(W/V)
D
时间(min)
1 30 70 1:50 80
2 50 80 1:60 90
3 70 90 1:70 100
2 结果与分析
2． 1 芦丁标准品溶液的标准曲线
采用二元线性回归法得到吸光度 OD值与芦丁
标准品浓度 mg /mL之间的回归方程为 y = 22． 31x，
r2 = 0． 996，标准曲线如图 1 所示．
图 1 芦丁标准品溶液的标准曲线
2． 2 超声单因素提取试验结果与分析
由图 2 可知，得率随时间延长而增加，但超过
15min后得率开始下降，原因可能是超声时间太长
会破坏黄酮类化合物的结构，导致得率下降．
图 2 超声时间对得率影响
2． 3 回流提取单因素试验结果与分析
(1)乙醇浓度对得率影响．由图 3 可知，乙醇浓
度在 50%时，总黄酮得率最高，故选择 50%乙醇提
取较合适．
图 3 乙醇浓度对得率影响
(2)提取温度对得率影响．由图 4可知，随温度的
升高，得率也在升高，90℃得率最高，但从 80℃开始曲
线趋于平缓，从能源角度考虑选择 90℃较合适．
图 4 提取温度对得率影响
(3)料液比对得率影响．由图 5 可知，随料液比
的增加，得率也在升高，1:60时得率最高． 曲线从
1:50开始趋于平缓，故从节约溶剂角度考虑料液不
宜选择过大，1:60 较合适．
图 5 料液比对得率影响
(下转第 54 页)
·31·
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(上接第 13 页)
(4)提取时间对得率影响．由图 6 可知，随提取
时间的延长，得率也随之升高，100min 时得率最高．
但从 80min 开始曲线趋于平缓，时间的延长对提高
得率的影响不大，故选择 100min较合适．
图 6 提取时间对得率影响
2． 4 正交试验优化结果与分析
以大叶子总黄酮得率为指标，选定四因素三水
平进行正交试验(见表 2)．由表 2 可知，影响大叶子
总黄酮提取因素的主次顺序为时间、乙醇浓度、料液
比、提取温度． 最优组合为 A3B3C2D1，即乙醇浓度
70%、提取温度 90℃、料液比 1:60、时间 80min，得率
为 2． 53% ．
表 2 正交试验结果
试验号 A B C D 得率(%)
1 1 1 1 1 1． 72
2 1 2 2 2 1． 82
3 1 3 3 3 0． 95
4 2 1 2 3 1． 56
5 2 2 3 1 1． 73
6 2 3 1 2 2． 03
7 3 1 3 2 1． 82
8 3 2 1 3 1． 74
9 3 3 2 1 2． 53
K1 4． 49 5． 10 5． 49 5． 98
K2 5． 32 5． 29 5． 91 5． 67
K3 6． 09 5． 51 4． 50 4． 25
Ｒ 1． 60 0． 41 1． 41 1． 73
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