全 文 ：紫外分光光度法测定槭叶草中总黄酮的含量
张正海，李玉环，李爱民* (中国农业科学院特产研究所，吉林吉林 132109)
摘要 ［目的］建立槭叶草总黄酮测定方法，并测定槭叶草中总黄酮含量。［方法］通过比较 2种显色方法，选定三氯化铝作为显色剂，检
测波长为 270 nm，采用紫外 －可见分光光度法，测定槭叶草中总黄酮的含量。［结果］吸光度与质量浓度线性关系范围为 0． 000 ～ 0． 024
mg /ml，R =0． 999 8;槭叶草总黄酮含量为 11． 099 mg /g。［结论］该方法操作简便快速，具有较好的精密度、重现性和稳定性，适合槭叶草
中总黄酮的含量测定。
关键词 槭叶草(Mukdenia rossii (Oliv．)Koidz．);分光光度法;总黄酮
中图分类号 R284． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)05 －02630 －02
Determination of Total Flavonoids in Mukdenia rossii (Oliv．)Koidz． by Spectrophotometry
ZHANG Zheng-hai et al (Institute of Special Animal and Plant Sciences，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Jilin，Jilin 132109)
Abstract ［Objective］To establish a method for determining the content of total flavonoids in Mukdenia rossii(Oliv．)Koidz． ． ［Method］By
comparison of two color development methods，AlCl3 was chosen as the color-developing agent． With the detection wavelength at 270 nm，the
ultraviolet-visible spectrophotometry was adopted to determine the content of total flavonoids in M． rossii． ［Result］The mass concentration of
total flavonoids in M． rossii was linearly related to absorbance in the range of 0 to 0． 024 mg /ml with the correlation coefficient of 0． 999 8． The
content of total flavonoids in M． rossii was 11． 099 mg /g． ［Conclusion］The ultraviolet-visible spectrophotometry was a simple and fast method
with high precision，reproducibility and stability that is fitter to determine the content of total flavonoids in M． rossii．
Key words Mukdenia rossii (Oliv．)Koidz．;Spectrophotometry;Total flavonoids
基金项目 吉林省科技发展计划资助项目(201105034)。
作者简介 张正海(1981 － ) ，男，河南洛阳人，研究实习员，硕士，研究
方向为药用植物种质资源评价与利用，E-mail:hnauzh@ hot-
mail． com。* 通讯作者，E-mail:zuojialam@ 163． com。
收稿日期 2011-11-15
槭叶草(Mukdenia rossii (Oliv．)Koidz．)是虎耳草科
(Saxifragaceae)槭叶草属(Mukdenia)多年生草本植物，分布
于我国东北和朝鲜，以根状茎入药。其性平，味甘、微苦，入
心经，具有养心安神的功效，常用于补心阳和益心血。其根
状茎含有多种药效成分，其中槭叶草总黄酮是其主要药效成
分，对脑缺血损伤有良好的保护作用，且在降低血脂和降血
压方面有明显的疗效［1 －2］。试验采用紫外分光光度法对槭
叶草总黄酮含量进行测定，通过研究测定条件，建立槭叶草
总黄酮测定方法，以期为准确测定槭叶草总黄酮含量和对该
种资源进一步开发利用提供技术支撑。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。槭叶草(Mukdenia rossii (Oliv．)Koidz．) ，
于 2011年 4月中旬采自中国农业科学院特产研究所槭叶草
资源圃，室内自然阴干备用。
1． 1． 2 主要仪器。FW80型微型高速万能试样粉碎机，购自
天津市泰斯特仪器有限公司;KQ-300E 昆山超声仪，购自昆
山市超声仪器有限公司;HWS24 型电热恒温水浴锅，购自上
海一恒科学仪器有限公司;UV-2450 紫外分光光度仪，购自
日本岛津公司;Classic UVF MK2 纯水机，购自法国 Veolia
公司。
1． 1． 3 主要试剂。无水乙醇，购自北京化工厂;甲醇，购自
北京化工厂;AlCl3，购自天津市光复精细化工研究所;以上试
剂均为分析纯;对照品芦丁，购自中国药品生物制品检定所，
批号:10080-200707;槲皮素，购自中国药品生物制品检定所，
批号:100081-200907;超纯水，自制。
1． 2 方法
1． 2． 1 样品溶液的制备。取干燥槭叶草根茎，粉碎后经 50
℃鼓风干燥3 h。精密称取粉末2． 000 g，置具塞锥形瓶中，加
入 80 ml 浓度 95%乙醇溶液［3］，于 50 ℃超声(功率 300 W，
工作频率 40 kHz)提取。
1． 2． 2 标准品溶液的制备。精密称取芦丁标准品5． 0 mg于
25 ml 容量瓶中，用无水甲醇溶解，然后用无水甲醇定容至刻
度，摇匀，配成浓度为 0． 2 mg /ml的芦丁标准品溶液。
1． 2． 3 显色试剂的配置。精密称取 2． 68 g AlCl3 粉末，用无
水甲醇定容至 100 ml，配成浓度为 0． 2 mol /L的溶液。精密
称取 2． 72 gCH3COONa·3H2O，用超纯水溶解后并定容至
100 ml，配成浓度为 0． 2 mol /L的溶液。精密量取 1． 18 ml冰
醋酸，用超纯水稀释至 100 ml配成浓度为 0． 2 mol /L的醋酸
溶液。取79 ml浓度0． 2 mol /L的 CH3COONa·3H2O溶液与
21 ml浓度0． 2 mol /L醋酸溶液配制成100 ml pH为5． 2的缓
冲溶液。
1． 2． 4 测定方法的选择。
1． 2． 4． 1 直接测定法。分别取0． 5 ml槭叶草提取液、2． 5 ml
芦丁标准品和槲皮素标准品溶液于 3 个 25 ml 容量瓶中，用
无水甲醇定容至刻度，摇匀，于 10 min 后用双光束紫外分光
光度计在 200 ～500 nm 波长范围内进行扫描，以无水甲醇作
空白液。
1． 2． 4． 2 三氯化铝显色法。分别取 0． 5 ml 槭叶草提取液、
2． 5 ml芦丁标准品溶液和槲皮素标准品溶液各于 3 个 25 ml
容量瓶中，分别加入 12． 5 ml浓度 0． 2 mol /L的 AlCl3 甲醇溶
液和 2． 5 ml pH为 5． 2 的 NaAC-HAC缓冲溶液，用无水甲醇
定容，于 40 ℃水浴显色 10 min［4］，在 200 ～500 nm范围扫描，
以不加显色剂的溶液为空白。
1． 2． 5 方法学考察。①标准曲线的绘制。精确吸取 0． 0、
责任编辑 石金友 责任校对 李岩安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(5):2630 － 2631
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.05.016
0． 5、1． 5、2． 0、2． 5和 3． 0 ml浓度 0． 2 mg /ml 芦丁标液于 6 个
25 ml容量瓶中，加入 12． 5 ml 浓度 0． 2 mol /L 的 AlCl3 甲醇
溶液和 2． 5 ml pH为 5． 2 的 NaAC － HAC 缓冲溶液，用无水
甲醇定容，于 40 ℃水浴显色 10 min，以不加显色剂的溶液为
空白，于 270 nm 波长下测定吸光度，以吸光度对芦丁浓度作
线性回归。计算回归方程。②精密度试验。精确移取 0． 5
ml槭叶草样品液平行 5 份，按“1． 2． 4． 2”中测定方法测定吸
光度并计算 RSD。③重现性试验。精密称取 2． 000 g槭叶草
粉末 4份，按样品溶液制备方法处理，精确移取样品槭叶草
提取液各 0． 5 ml，按“1． 2． 4． 2”中测定方法测定吸光度并计
算 RSD。④稳定性试验。精确吸取槭叶草样品溶液 0． 5 ml
和芦丁标准溶液 0． 5 ml，按“1． 2． 4． 2”中方法显色，在室温条
件下放置 0、20、40、60、80 min，处理后在 270 nm处测定吸光
度并计算 RSD。⑤加标回收率试验。精确移取 0． 5 ml 的槭
叶草样品溶液平行 4份，分别加入不同量的芦丁标准品(0． 2
mg /ml) ，摇匀，按“1． 2． 4． 2”中测定方法测定吸光度，计算平
均回收率和 RSD。
1． 2． 6 总黄酮含量的测定。精确吸取 4 个重复的槭叶草样
品液各 0． 5 ml 于 25 ml 容量瓶，按“1． 2． 4． 2”中测定方法测
定吸光度，根据标准曲线，计算所取样液中总黄酮的含量。
槭叶草总黄酮含量的计算公式为:
X =(A － b)VFCm ;
其中 X—样品中总黄酮的质量浓度(mg /g) ;A—稀释后样品
吸光度;b—标准曲线截距;C—标准曲线斜率;V—测定吸光
度时样品提取液稀释体积(ml) ;F—样品提取液与测定吸光
度时吸取样品提取液体积比值;m—样品质量(g)。
2 结果与分析
2． 1 测定方法的选择
2． 1． 1 直接测定法。由图1可知，芦丁在214、257和360 nm
波长处有 3个最大吸收峰，槲皮素在 216、256和 375 nm波长
处有 3个最大吸收峰，样品在 218和 273 nm波长处有 2个最
大吸收峰。由试验结果可以看出，以无水甲醇为溶剂直接测
定法不适合槭叶草总黄酮的测定。
图 1 槲皮素、芦丁和样品均不加显色剂的紫外可见光谱图
2． 1． 2 三氯化铝显色法。由图 2 可知，芦丁在 217、269 和
398 nm波长处有 3个最大吸收峰，槲皮素在 218、266和 425
nm波长处有 3个最大吸收峰，样品在 220 和 270 nm波长处
有 2个最大吸收峰。由试验结果可以看出，加入显色剂后样
品和芦丁在 270 nm处吸收峰接近，经过比较，选用芦丁作为
测定时的标准品，以 270 nm为最大吸收波长。
图 2 槲皮素、芦丁和样品三氯化铝络合后的紫外可见光谱图
2． 2 方法学考察 ①标准曲线的绘制。计算得出芦丁的回
归方程为 Y =37． 875X + 0． 340 9，R = 0． 999 8，表面在 0． 000
～0． 024 mg /ml质量浓度范围为线性关系良好。②精密度试
验。计算出测定结果的 RSD 为 0． 67%，说明该仪器的精密
度较好。③重现性试验。计算出测定结果的 RSD为0． 96%，
说明该方法的重现性较好。④稳定性试验。计算出测定结
果的 RSD分别为 1． 72%和 1． 70%，说明吸光度值随时间的
变化基本保持不变，该方法稳定性较好。⑤加标回收率试
验。计算出平均回收率为 99． 67%，RSD为 0． 88%，表明该方
法操作简便快速，具有较好的精密度、重现性和稳定性，适合
槭叶草中总黄酮的含量测定。
2． 3 总黄酮含量的测定 根据标准曲线，计算出所取样液
中总黄酮含量为 11． 099 mg /g。
3 结论与讨论
对测定槭叶草总黄酮的三氯化铝和醋酸 －醋酸钠缓冲
体系的方法进行精密度、重现性、稳定性、加标回收率试验，
得出三氯化铝显色法的精密度的 RSD 为 0． 67%、重现性的
RSD为 0． 96%、样品和芦丁的稳定性 RSD 分别为 1． 72%和
1． 70%，加标平均回收率为 99． 67%，RSD 为 0． 88%;槭叶草
总黄酮的含量为 11． 099 mg /g，表明该方法操作较为简便和
快速，适合槭叶草总黄酮的含量测定。
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136240 卷 5 期 张正海等 紫外分光光度法测定槭叶草中总黄酮的含量