全 文 ：良好的流化状态 ,同时可降低操作成本 ,减少环境污
染 ,保证生产安全 〔4〕。
参 考 文 献
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(2007 -04-23收稿)
大孔吸附树脂法分离纯化垂盆草提取物的研究
许玲玲 ,李群力＊ ,麻佳蕾
(金华学院医学院 ,浙江金华 321007)
　　摘要　目的:研究 D101型大孔树脂分离纯化垂盆草提取物的工艺条件及参数。方法:以异鼠李素的含量为指
标 , 采用大孔树脂法分离纯化垂盆草提取物。结果:大孔树脂法分离纯化垂盆草提取物的最佳工艺为:提取物浓度
为 0.01 g/ml, 以 2 ml/min的流速上样 ,药量与树脂(湿重)比为 1∶7, 先用 4BV的水洗脱 , 再用 6BV的 75%乙醇洗
脱 , 洗脱流速 2ml/min, 75%乙醇洗脱液减压浓缩至干 ,即得垂盆草纯化物。结论:经大孔树脂分离纯化后 , 异鼠李
素的含量可达到 1.2876%。该方法分离纯化垂盆草提取物可行。
关键词　大孔树脂;纯化;垂盆草提取物;异鼠李素
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)12-1603-03
作者简介:许玲玲(1980-),女,硕士 ,主要从事药学教学与研究;Tel:0579-8232801, E-mail:xlinglingxl@sohu.com。＊通讯作者:李群力 ,女 ,副教授 ,主要从事药学教学与研究。
　　垂盆草系景天科植物垂盆草 Sedumsarmentosum
Bunge新鲜或干燥的全草 ,味甘 、淡 ,性凉 ,具有清
热解毒 、利尿消肿 、排脓生肌之效。垂盆草主要含有
糖类 、黄酮类 〔1〕、生物碱类〔2〕、氰苷类成分 〔3〕。垂盆
草具有抑制炎性渗出 ,减少肝细胞损伤的作用 ,能显
著降低肝炎患者血清谷丙转氨酶 ,临床广泛用于急
性肝炎 、迁移性肝炎及慢性肝炎活动期的治疗 。
大孔吸附树脂是一类新型高分子化合物 ,近年
来在天然药物精制研究中应用日益广泛。本实验研
究大孔吸附树脂分离纯化垂盆草提取物的工艺条件
及参数 。
1 　材料和仪器
垂盆草药材 (杭州惠远实业有限公司 , 批号:
060331);甲醇为色谱纯 ,乙醇 、石油醚 、磷酸 、盐酸
等均为分析纯;异鼠李素对照品(中国药品生物制
品检定所 ,批号:110860-200407);D101型大孔吸附
树脂(上海医药工业研究院)。
1004型电子天平(上海天平仪器厂);高速药材
粉碎机(浙江金华华盛实业有限公司);BC-R501旋
转蒸发器(上海贝凯生物化工设备有限公司);Wa-
ters2487高效液相色谱仪 , 2487紫外检测器 , Breeze
色谱工作站。
2　方法与结果
2.1　HPLC法测定异鼠李素的含量
2.1.1 　色谱条件:色谱柱:DiamonsilC18(150 mm
×4.6 mm, 5 μm);流动相:甲醇 -0.4%磷酸 (55∶
45);流速:1.0 ml/min;检测波长:360 nm;灵敏度:
0.5AUFS;进样量:20 μl。理论塔板数按异鼠李素
计不低于 5 000。
2.1.2 　对照品溶液的制备:精密称取异鼠李素对
照品 14.1 mg,置于 250 ml容量瓶中 ,加甲醇溶解 ,
定容至刻度 ,摇匀 ,即得 。
2.1.3 　供试品溶液的制备:精密称取 0.2 g干浸
膏 ,加入甲醇 20 ml和 50%盐酸 5 ml,加热回流提取
1.5 h,过滤 ,置于 50 ml容量瓶中 ,再用甲醇定容至
刻度 ,摇匀 ,即得。进样前用 0.45 μm微孔滤膜过
滤。
2.1.4 　标准曲线的制备:精密量取一定量对照品
溶液 , 分别用流动相配制成浓度为 2.82、 5.64、
11.28、14.10、22.56、28.20 μg/ml的对照品溶液 ,进
·1603·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2007.12.041
样 ,测定。以峰面积(A)对浓度(C)绘制回归曲线 ,
得回归方程:A=83709C+10181, R2 =0.9999,线性
范围为 2.82 ～ 28.20 μg/ml。
2.1.5　样品测定:分别精密吸取对照品溶液与供
试品溶液各 20 μl,注入液相色谱仪 ,测定 。
2.2 　大孔吸附树脂纯化垂盆草提取物的工艺考察
2.2.1　大孔吸附树脂的预处理和再生:将 D101型
大孔吸附树脂用无水乙醇浸泡 24 h后湿法装柱 ,待
树脂装好后 ,用乙醇洗脱树脂柱 ,洗至流出液与蒸馏
水(1∶1)混合不产生白色浑浊 ,再用蒸馏水冲洗至
无乙醇味;然后用 2倍体积 5%的盐酸以 2.5 ml/
min流速通过树脂层 ,并浸泡 2 ～ 4 h,用蒸馏水以同
样的流速洗至流出液 pH值呈中性;最后用 2倍体
积 2%氢氧化钠溶液以 2.5 ml/min流速通过树脂
柱 ,并浸泡 2 ～ 4 h后 ,用蒸馏水以同样流速洗至流
出液 pH呈中性 。
2.2.2　上柱样品液的制备:称取垂盆草药材粉末
(过 60目筛)400 g,加入 7倍量的 70%乙醇 ,加热回
流提取 2次 ,每次 1.5 h,提取液浓缩至干 ,即得垂盆
草提取物。将提取物置于索式提取器中 ,加入 5倍
量的石油醚 ,连续回流提取 5 h,药渣挥干 ,加入适量
的水溶解 ,配制不同浓度的药液 ,备用 。
2.2.3　大孔吸附树脂对垂盆草提取物静态吸附率
的考察:取树脂 1.00 g(干重),置于 500 ml具塞磨
口锥形瓶中 ,精密加入垂盆草提取液 450 ml,药液比
为 1∶150(g∶ml),磁力搅拌 1 h后 ,静置 24 h,过滤 ,
滤液蒸干 ,称重 ,测定吸附前后溶液中异鼠李素的浓
度 ,计算大孔树脂在室温下的饱和吸附量 。饱和吸
附量公式为:Q=(C0 -Cr)×V/W,式中 Q为饱和吸
附量(mg/g), C0为吸附前异鼠李素的浓度 (mg/
ml), Cr为吸附后异鼠李素的浓度(mg/ml), V为溶
液体积(ml), W为树脂质量(g)。计算得大孔树脂
在室温下的饱和吸附量为 3.2 mg/g。
树脂经静态吸附饱和后 ,树脂用水洗过 ,加入
95%乙醇 200 ml,磁力搅拌 1 h后 ,静置 24 h,过滤 ,
滤液减压浓缩至干 ,称重 。测定滤液中异鼠李素的
浓度。根据下式计算树脂的解吸率(%)。解吸率
(%)=C×V×100/(Q×W),式中 C为解吸液中异
鼠李素的浓度(mg/ml), V为洗脱液的体积(ml), Q
为树脂吸附量 (mg/g), W为所用树脂的质量 (g)。
计算得树脂的静态解吸率为 34.8%。
2.2.4　大孔树脂纯化条件的考察:为了考察上样
液的浓度 、药液的吸附流速 、树脂柱的径高比和洗脱
剂的洗脱流速对 D101型树脂吸附垂盆草提取物的
影响 ,采用正交设计方法(见表 1)对提取物进行纯
化 ,先用水洗脱至无明显颜色 ,再用 95%乙醇洗脱
至无明显颜色 , 95%乙醇洗脱液浓缩至干 ,用 HPLC
法测定纯化后异鼠李素的含量 ,并进行方差分析。
结果及方差分析见表 2、3。
　表 1 　因素水平表
水平 A药液比(g∶ml)
B药液吸附流速(ml/min)
C药量与树脂(湿重)比(g∶g)
D洗脱流速(ml/min)
1 1∶100 0.5 1∶5 2
2 1∶50 1 1∶7 3
3 1∶30 2 1∶10 4
　表 2 　L9(34)正交试验表及结果
试验号 因素A B C D
含量(%)
1 1 1 1 1 1.1819
2 1 2 2 2 1.3045
3 1 3 3 3 1.1515
4 2 1 2 3 0.9231
5 2 2 3 1 1.0266
6 2 3 1 2 0.9398
7 3 1 3 2 0.6079
8 3 2 1 3 0.3981
9 3 3 2 1 0.7254
K1 3.6379 2.7129 2.5198 2.9339
K2 2.8895 2.7292 2.9530 2.8522
K3 1.7314 2.8167 2.7859 2.4726
R 1.9065 0.1038 0.4333 0.4613
SS 0.6151 0.0021 0.0318 0.0404
　表 3 　方差分析表
方差来源 SS DF MS F值 P值
A 0.6151 2 0.3076 295.9249 <0.01
B(误差项) 0.0021 2 0.001 - -
C 0.0318 2 0.0159 15.3138 >0.05
D 0.0404 2 0.0202 19.4313 <0.05
　　方差分析表明 ,因素 A对实验结果有极显著的
影响 ,因素 D对实验结果有显著的影响 ,因素 B、C
对结果无显著影响 ,最佳条件为 A1B3C2D1 ,即上样
前药液比为 1∶100(g∶ml),药液吸附流速为 2 ml/
min,大孔树脂柱的径高比为 1∶7,洗脱剂洗脱流速
为 2 ml/min。
水洗用量的考察:取三根大孔吸附树脂柱 ,将药
液比为 1∶100的垂盆草提取物溶液 ,按 2 ml/min流
速上样 ,药量与树脂(湿重)比为 1∶7,分别用 2、4、
6BV的水洗脱 , 水洗脱流速为 2 ml/min, 然后用
95%乙醇洗脱至无明显颜色 ,洗脱流速 2 ml/min,
·1604· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月
95%乙醇洗脱液浓缩至干 ,测定异鼠李素的含量 。
结果表明:用 4BV的水洗脱时 , 95%乙醇洗脱液中
异鼠李素的含量较高 。因此 ,采用 4BV的水洗脱 。
乙醇浓度的考察:取三根大孔吸附树脂柱 ,将药
液比为 1∶100的垂盆草提取液 ,按 2 ml/min流速上
样 ,药量与树脂(湿重)比为 1∶7,先用 4BV的水洗
脱 ,然后分别用 75%、85%、95%的乙醇洗脱至无明
显颜色 ,洗脱流速 2 ml/min,乙醇洗脱液浓缩至干 ,
测定醇洗脱液中异鼠李素的含量。结果表明:75%、
85%、95%乙醇洗脱液所含的异鼠李素的含量差异
不明显 。考虑经济成本等因素 ,选用 75%的乙醇洗
脱为宜 。
乙醇用量的考察:取三根大孔吸附树脂柱 ,将药
液比为 1∶100的垂盆草提取液 ,按 2 ml/min流速上
样 ,药量与树脂(湿重)比为 1∶7,先用 4BV的水洗
脱 ,再分别用 2、4、6BV的 75%乙醇洗脱 ,洗脱流速
2 ml/min,乙醇洗脱液浓缩至干 ,测定异鼠李素的含
量 。结果表明:6BV的 75%乙醇洗脱液所含的异鼠
李素的含量较高 。因此 , 采用 6BV的 75%乙醇洗
脱 。
2.2.5　垂盆草提取物纯化工艺的确定:将垂盆草
提取物置于索式提取器中 ,加入 5倍量的石油醚 ,连
续回流提取 5 h,药渣挥干 ,加入 100倍量的水溶解 ,
配成药液比为 1∶100(g∶ml)的垂盆草提取物溶液
(即药液的浓度为 0.01 g/ml),按 2 ml/min流速上
样 ,药量与树脂(湿重)比为 1∶7,先用 4BV的水洗
脱 ,再用 6BV的 75%乙醇洗脱 ,洗脱流速 2 ml/min,
75%乙醇洗脱液减压浓缩至干 ,即得垂盆草纯化物 。
2.2.6 　垂盆草提取物纯化工艺的验证:按上述确
定的工艺条件制备 3批样品 ,测定纯化物中异鼠李
素的平均含量为 1.2876%, RSD为 2.8%。说明该
工艺方法稳定可行 。
3　讨论
本研究采用大孔吸附树脂法对垂盆草提取物的
纯化工艺进行考察 ,结果表明垂盆草提取物经过大
孔树脂纯化后 ,许多水溶性杂质被除去 ,大孔树脂能
够有效地对垂盆草提取物进行富集 ,使有效成分异
鼠李素的含量明显增加 。本工艺稳定 ,切实可行 ,为
垂盆草制剂的研究奠定了基础。
参 考 文 献
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(2007 -06-05收稿)
微波法提取龙胆多糖的工艺研究
刘桓宇 1, 2 ,袁金田 1 ,孙国峰1 ,张连学 1＊ ,张春红 1
(1.吉林农业大学中药学院 ,吉林长春 130118;2.辽宁省食品药品检验所 ,辽宁沈阳 110023)
　　摘要　目的:优化微波法提取龙胆多糖的工艺条件。方法:以龙胆多糖的得率为指标 , 对微波功率 、溶剂量 、提
取时间三个影响微波法提取龙胆多糖得率的因素进行考察。结果:在三个因素中溶剂量对提取率的影响最大 ,提
取时间次之 , 微波功率对结果的影响最小。其中溶剂量及提取时间对龙胆多糖收率的影响均具有显著性意义(P<
0.05)。结论:微波法提取龙胆多糖的最佳工艺条件为:微波功率 450W, 14倍量水提取 4 min。
关键词　微波提取法;龙胆多糖;正交实验
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)12-1605-03
基金项目:国家自然科学基金项目(NO.30370159)作者简介:刘桓宇(1982-),女,硕士研究生 ,研究方向:中药质量评价;Tel:13504057445, E-mail:lhy jili@yahoo.com.cn。＊通讯作者:张连学 ,男 ,博士 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向:中药 GAP规范化种植 、中药质量评价及中药活性成分研究。
　　中药龙胆为龙胆科(Gentianaceae)植物条叶龙
胆 GentianamanshuricaKitag.、龙胆 Gentianascabra
Bge.、三花龙胆 Gentianatriflorapal.或坚龙胆 Gen-
tianarigescensFranch.的干燥根及根茎。具有清热
·1605·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月