全 文 ：育苗技术　Seedling Cultivation
22　 PR ACTICAL FORES TRY TECHNOLOGY
二〇〇八年第三期　林业实用技术
红 檵 木 的 组 织 培 养
叶添谋　王羽梅
(韶关学院英东生物工程学院　广东　韶关　512005)
表 1　不同外植体愈伤组织的诱导情况
外植体种类 培养基 调查外植体块数
愈伤组
织块数
愈伤组织
诱导率/ %
叶　片 B5+2 , 4-D1.0 40 16 40
幼嫩茎段 B5+2 , 4-D1.0 40 29 73.0
花　蕾 B5+2 , 4-D1.0 40 0 0
第一作者简介:叶添谋(1972-), 男 , 广东
汕尾人 ,在读博士研究生 ,讲师 ,主要从事植物
组织培养 、植物天然化学产物工程研究。
[ 摘 要 ] 　 以 红 檵 木 (Loropetalum
chinensis var.rubrumy ien)的幼叶 、幼嫩茎
段 、花蕾为外植体进行愈伤组织诱导研
究 ,试验结果表明:外植体诱导愈伤组织
由易到难排序为幼嫩茎段 、幼叶 、花蕾;最
佳诱导培养基配方是:B5+2 , 4 -D 2.0
mg/ L , 诱导率为 97.5%;配合使用不同浓
度的生长素与细胞分裂素 , 诱导红檵木愈
伤组织分化不定芽有显著差异 ,其中以 B5
+6-BA1.0 mg/ L +蛋白胨(0.1 mg/ L)
效果最好 ,诱导率达 70%。
[ 关键词] 　红檵木　外植体　组织培养
　愈伤组织
红檵木(Loropetalum chinensis
var.rubrumyien)金缕梅科檵木属 ,
红色花系花红叶红的常绿灌木或小
乔木 。红檵木适应性强 , 栽培管理
条件粗放 ,耐-10 ℃低温 ,树型好 ,
枝叶紧凑 ,生长强健;叶片圆厚 ,富
有光泽 ,上下两面均为红色 ,即使在
炎热的夏季或阴暗的条件下 , 叶片
和花均为红色 ,春秋两季花开不断 ,
广泛应用于园林 、道路及盆景 。近
年来 , 红檵木在长沙 、株洲快速发
展 ,栽培面积不断扩大 ,估计湖南省
栽培面积已达 533.33 hm2 , 年产小
苗 1亿株 ,成品球 2 000 万株 ,盆景
若干 ,远销到台湾 、香港 、澳门 ,新加
坡和日本等地 。浙江 、江苏 、四川 、
江西 、湖北等省也大量引进。红花
檵木已成为园林绿化的首选彩色树
种。目前该树种主要以嫁接 、扦插
为繁殖方法。笔者则采用组织培养
繁殖方式 , 加速了红檵木的种苗培
育 ,以满足红檵木不断扩大的市场
需求[ 1 , 3] 。
1　材料和方法
材料采自广东省韶关学院校园
内的红檵木 ,选择生长健壮 、无病虫
害的幼嫩茎段 、叶片和花蕾作为外
植体 。
我们设计了 8种诱导愈伤组织
的培养基:
(1)B5 +NAA0.5 mg/L;
(2)B5+NAA1.0 mg/L;
(3)B5+NAA1.5 mg/L;
(4)B5+NAA2.0 mg/L;
(5)B5+2 , 4-D 0.5 mg/L;
(6)B5+2 , 4-D 1.0 mg/L;
(7)B5+2 , 4-D 2.0 mg/L;
(8)B5 +2 , 4 -D 4.0 mg/L。
蔗糖 2%,琼脂 0.76%, pH 值 5.6 。
将所有用于接种的相关材料 、
培养基和用具都要经过高压蒸汽灭
菌锅灭菌 。外植体选用茂盛茁壮的
红檵木枝条 ,取大约 8 ～ 10 cm ,尽量
取靠茎端部位。将采摘回来的枝条
用清水冲洗干净 ,接着将其多余的
叶片和茎剪去(只留 2 ～ 3片 ,整个
枝条只留 3 ～ 5 cm)。
将经初步处理的外植体和接着
工具放到超净工作台之前 , 先用
75%的酒精清洁双手和对外植体进
行初步消毒。接着用紫外灯灭菌 20
min ,然后再净通风 10 min。将初步
处理过的外植体用 75%酒精消毒约
15 s 后 , 用 0.1%升汞消毒 6 ～ 7
min ,再用无菌水清洗 1 min ,反复 3
～ 5次 。然后将材料放在培养皿切
成 1.5 ～ 2 cm 长的小段备用 。接种
好后 ,将材料置于光照 1 000 ～ 1 500
lx 、光照 10 ～ 12 h/d 、温度 25 ℃环
境中进行培养 ,每天观察。各个处
理重复 3次实验 ,取平均数[ 2] 。
2　结果与分析
2.1　不同外植体的选择
为了确定诱导红檵木产生愈伤
组织的最合适的外植体 ,以 B5为基
本培养基 ,加入 2 , 4—D ,观察不同
外植体 ,即叶片 、茎段 、花蕾出现愈
伤的情况 ,结果见表 1。从表 1中可
见:幼嫩的茎段最容易诱导出愈伤
组织 ,在接种的 40块外植体中 ,除
了 1块污染以外 , 其余的都出现了
愈伤组织 ,其诱导率达 73.0%,且愈
伤生长速度快而多 ,活性强;叶片的
诱导率相对较低 ,愈伤速度慢而少 。
2.2　茎段愈伤组织的诱导
在确定合适外植体的情况下 ,
笔者设计了 8 种不同培养基配方 ,
以 B5为基本培养基 ,在此基础上加
入不同种类和浓度的激素[ 2] , 观察
对幼嫩茎段愈伤组织的诱导情况
(见表 2)。
表 2 表明 , 加入 2 , 4 -D 比
NAA 对于诱导愈伤组织效果比较
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二〇〇八年第三期　林业实用技术
好 ,B5+ 2 , 4-D 2.0效果最好 ,愈
伤组织的诱导率达 97.5%。
外植体接种后 3 ～ 5 d长出愈伤
侧芽 、顶端部位为出愈伤组织的主
要部位。所诱导出的愈伤组织较多
较弱 ,结构松散 ,颜色偏暗红;较老
的茎段愈伤组织生长速度慢 , 愈伤
组织较少但结构较紧密 ,颜色偏鲜
红。愈伤组织生长早期 ,颜色暗红 ,
颗粒细小 ,结构松散 ,不规则。愈伤
组织长到 15 ～ 25 d后 ,其结构和外
观开始发生变化 。颜色变浅 ,为桃
红色 ,颗粒变大而圆 ,结构紧密。这
样的愈伤组织可继代培养或诱导出
芽。若再培养 5 ～ 10 d ,愈伤组织又
回到早期的形态 ,颜色变暗红 ,颗粒
细小而松散 ,整个愈伤继续增长。
表 2　不同激素配比对幼嫩茎段愈伤组织的诱导情况
序号 培养基和激素配比(mg/ L)
调查茎段外
植体块数
愈伤组
织块数
愈伤组织
诱导率/ %
1 B5+NAA 0.5 40 5 12.5
2 B5+NAA1.0 40 10 25.2
3 B5+NAA1.5 40 21 52.5
4 B5+NAA2.0 40 15 37.5
5 B5+ 2 , 4-D 0.5 40 14 34.5
6 B5+ 2 , 4-D 1.0 40 29 73.0
7 B5+ 2 , 4-D 2.0 40 39 97.5
8 B5+ 2 , 4-D 4.0 40 25 62.5
　　注:以上为重复 3 次的平均数。
表 3　不同细胞分裂素对红檵木茎段愈伤组织诱导不定芽的情况
序号 培养基和细胞分裂激素(mg/ L)
被调查愈伤
组织块数
产生不定
芽块数
不定芽诱导
率/ %
1 B5 +6-BA1.0+NAA0.5 50 25 50
2 B5+6-BA1.0 +NAA1.0 50 15 30
3 B5+6-BA1.0 + NAA2.0 50 10 20
4 B5+6-BA1.0+蛋白胨 0.1 50 35 70
5 B5+NAA1.0+蛋白胨 0.05 50 23 46
6 B5+NAA0.5+蛋白胨 0.1 50 18 36
7 B5+2 , 4-D 1.0+蛋白胨 0.1 50 20 40
8 B5+2 , 4-D.05+蛋白胨 0.1 50 13 26
　　注:以上为重复 3 次的平均数。
2.3　不定芽的诱导
表 3 表明:不同浓度的生长素
与细胞分裂素配合使用 ,诱导红檵
木愈伤组织分化不定芽有显著差
异 ,其中以 B5+6-BA1.0 mg/L +
蛋白胨(0.1 mg/L)效果最好 , 达
70%。
从表 3 中可见 ,加入蛋白胨 ,有
利于不定芽的诱导 , 其机理尚不清
楚 ,可能的原因是提供氮源或者提
供某些必须的氨基酸 ,具体原因有
待于进一步研究 。
愈伤组织在继代培养 15 ～ 25 d
后 ,愈伤结构越来越紧密 ,颜色越来
越淡 ,桃红色慢慢淡化 ,直至出现一
层薄薄的白色。这样再过 10 ～
20 d ,白色的表层越长越厚 ,且渐渐
转绿 ,等绿色的表层越长越厚 ,便出
绒毛 ,这样就开始出丛生芽了 。
3　小结和讨论
3.1　小结
从以上实验结果中可以初步得
出以下成果:
(1)红檵木外植体诱导愈伤组
织由易到难排序为幼嫩茎段 、幼叶 、
花蕾;
(2)诱导红檵木愈伤组织的最
佳培养基配方是:B5 + 2 , 4 -
D 2.0 ,诱导率达 97.5%;
(3)不同浓度的生长素与细胞
分裂素配合使用 ,诱导红檵木愈伤
组织分化不定芽有显著差异 ,其中
以 B5+6-BA 1.0+蛋白胨 0.1 效
果最好 ,诱导率到 70%。
3.2　讨论
在外植体的选择上 ,以幼嫩的
茎段作为外植体完全可以满足愈伤
组织诱导的需要 , B5+ 2 , 4-D 2.0
诱导愈伤出现的速度快 ,最多 5 d就
可以出现大量愈伤组织 ,出现愈伤
的最初部位是茎尖或者腋芽 ,这说
明愈伤组织最容易发生于具有很强
分化能力的部位。在本实验中表
明 , 2 ,4-D对于红檵木愈伤组织的
诱导效果很好 , NAA 效果不佳 ,这
于其他植物种类的愈伤组织诱导的
情况类似[ 1 , 3] 。
在不定芽的诱导上 ,发现 6—
BA 和蛋白胨配合使用可以提高不
定芽诱导的效率 , 这可能是蛋白胨
为不定芽的生长提供氮源或者是某
些必需氨基酸的缘故 。具体原因有
待于进一步研究。本实验找到了一
种快速产生愈伤组织和不定芽诱导
的方法 , 为红檵木的快速繁殖和扩
大生产提供了可能 ,具有较好的应
用价值[ 2] 。
参考文献:
[ 1] 　许桂芳 , 张朝阳.红檵木的花器构
造与花粉生活力的研究[ J].吉林农
业大学学报 , 2003 , 25(5):520-522.
[ 2] 　林紫玉 , 李贞霞 , 张建伟.红檵木的
组织培养技术研究[ J] .安徽农业
科学 , 2005 , 33(5):842.
[ 3] 　袁德政 , 付爱华.浏阳红檵木产业
现状和发展趋势探讨[ J] .湖南林
业科技 , 2003 , 30(1):80-81.★