全 文 ：菥蓂子总黄酮含量的测定
成日青 钱 宇 郭慧卿 王来兵
(内蒙古医科大学药学院·呼和浩特 010110)
摘 要 目的:测定菥蓂子中总黄酮含量，为菥蓂子的药效物质基础研究及其综合开发利用提供依据。
方法:将菥蓂子用石油醚脱脂后，用 70%乙醇加热回流提取菥蓂子中的黄酮类成分，以芦丁为对照品，采
用比色法测定总黄酮含量。结果:菥蓂子中总黄酮含量为 5. 26mg /g。结论:菥蓂子中黄酮类成分的含量
较高，具有进一步研究和开发利用的价值。
主题词 菥蓂子 /分析 总黄酮
菥蓂子(籽)为双子叶植物十字花科菥蓂(Thlaspi ar-
vense Linn)的成熟种子。菥蓂又名遏蓝菜、苦芥子、败酱草、
野榆树、大荠、菥目，分布在我国大部分地区，主产于江苏、浙
江、安徽、湖南、甘肃等地，资源极为丰富，其全草、嫩苗、种子
均可入药。全草清热解毒、消肿排脓;嫩苗和中益气、利肝明
目［1］。菥蓂子于 5 ～ 8 月果实成熟时采收，晒干。菥蓂子属
常用蒙药材，蒙药名为恒日格一乌布斯，具有清热、滋补、开
胃、利尿、消肿之功效，用于治疗肺热、肝热、肾脉损伤、睾丸
肿坠、遗精、阳萎、腰腿痛、恶心等症［2］。
菥蓂子含有黑芥子苷、脂肪油、卵磷脂、蛋白质、芥子酶、
蔗糖及挥发油(芥子油) ，目前对菥蓂子的研究报道并不多，
从食用角度主要研究的是含量约在 34%的脂肪油成分［3］，
从药用角度主要研究的是菥蓂子所含的黑芥子苷［4］以及挥
发油［6］。有文献报道［7］，菥蓂全草中含有以异牡荆苷为主
要成分的黄酮类成分。
本研究采用乙醇回流法对菥蓂子中的黄酮类成分进行
了提取，并用分光光度法测定其含量。
1 实验材料
1. 1 仪器 TU － 1901 型双光束紫外可见光分光光度计:北
京普析通用仪器有限责任公司;AB135 － S型电子天平:瑞士
Mettler Toledo;恒温水浴箱、离心机、旋转蒸发仪、恒温鼓风
干燥箱等:均为国产仪器设备。
1. 2 药品与试剂 芦丁对照品:购自中国食品药品检定研
究院;菥蓂子:购自内蒙古药材公司，产地浙江，经本校药学
院生药学教研室渠弼教授鉴定为十字花科植物菥蓂(Thlaspi
arvense L．)的成熟种子。石油醚(60 ～ 90℃)、无水乙醇、甲
醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三氯化铝、氢氧化钾等均为
市售分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称定芦丁对照品适量，用
70%乙醇溶解完全，转移至 50ml 量瓶，用 70%乙醇定容，摇
匀，制得浓度为 0. 180mg /ml的芦丁对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备 将菥蓂子干燥，粉碎，过 40 目筛
备用。称取一定量的菥蓂子粉末，加入 10 倍量的石油醚(60
～ 90℃) ，置于 80℃水浴中加热回流脱脂 3 小时，趁热抽滤，
滤渣同法再脱脂 2 次，挥干溶剂得菥蓂子渣。
上述菥蓂子渣中加入 15 倍量(相对于菥蓂子粉末，下
同)的 70%乙醇常温浸泡 15 小时后，置于 90℃水浴中加热
回流提取 2. 5 小时，趁热抽滤，滤渣中加入 12 倍量 70%乙
醇，90℃水浴加热回流 2 小时，趁热抽滤，滤渣同法再提取 1
次。合并 3 次滤液，最后用少量的 70%乙醇多次洗涤滤渣，
洗涤液并入滤液中。滤液离心取上清液，定容至一定体积，
即得菥蓂子总黄酮供试品溶液。
2. 3 测定方法的选择
2. 3. 1 AlCl3 显色法波长扫描
［7］ 按 2. 2 项下方法制得菥
蓂子 70%乙醇提取液，浓缩回收溶剂，干燥，研磨制得菥蓂
子粗提物粉末样品。称取 25mg 粗提物样品，用适量甲醇溶
解完全，转移至 25ml量瓶，用甲醇定容。吸取该样品溶液和
芦丁对照品溶液各 2ml，分别置于 25ml 量瓶中，加入 2ml
0. 1mol /L的 AlCl3 甲醇溶液和 1ml pH为 5. 2 的 NaAc － HAc
缓冲溶液，用甲醇定容，摇匀，放置显色 15 分钟，以相应溶剂
为空白，用紫外可见分光光度仪，于 200 ～ 600nm范围内进行
波长扫描。另取 2ml粗提物样品溶液，用甲醇稀释至 25ml，
以甲醇为空白，进行波长扫描。结果芦丁对照品在 420nm
波长处出现最大吸收，而粗提物样品与芦丁对照品的紫外可
见吸收光谱有较大差别，且未经显色的粗提物样品在 420nm
波长处具有一定的吸收。
2. 3. 2 KOH显色法波长扫描 吸取芦丁对照品溶液和供
试品溶液各 2ml，分别置于 25 ml 量瓶中，加入 10% KOH 溶
液 1. 5ml，室温放置 5 分钟，用 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，
以相应溶剂为空白，于 200 ～ 600nm 范围内进行波长扫描。
另取 2ml供试品溶液，用 70%乙醇稀释至 25ml，以 70%乙醇
为空白，进行波长扫描。结果芦丁对照品在 412nm 波长处
出现最大吸收，而供试品的最大吸收出现在 382 nm处，且未
经显色的供试品在 412nm波长处具有一定的吸收。
2. 3. 3 NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH 显色法波长扫描 吸取
芦丁对照品溶液和供试品溶液各 2ml，分别置于 25 ml 量瓶
中，加入 5%亚硝酸钠溶液 1. 0 ml，放置 6 分钟，加 10%硝酸
铝溶液 1. 0 ml，放置 6 分钟，再加 4%氢氧化钠溶液 10 ml，加
水至刻度，摇匀，室温放置 5 分钟后，以相应溶剂为空白，于
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200 ～ 600nm范围内进行波长扫描。另取 2ml 供试品溶液，
用水稀释至 25ml，以相应溶剂为空白，进行波长扫描。结果
芦丁对照品在 503nm 处出现最大吸收，而未经显色的供试
品溶液在此波长处无吸收。
根据以上 3 种显色方法的波长扫描结果，本实验采用
NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH显色法，并以 503nm作为测定波
长。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察 精密吸取芦丁对照品溶液 2. 0、3. 5、
5. 0、6. 5、8. 0ml，分别置于 25 ml 量瓶中，按 2. 3. 3 项下方法
操作至室温放置显色 5 分钟后，以相应溶剂为空白，于
503nm处测定吸光度。以吸光度(A)对溶液浓度(C)进行线
性回归，得回归方程为 A = 12. 407C － 0. 0047，r = 0. 9997，结
果显示芦丁浓度在 0. 0144 ～ 0. 0576mg·ml －1范围内具有良
好的线性关系，数据见表 1。
表 1 芦丁对照品的浓度及其吸光度
对照品浓度(mg /ml) 0. 0144 0. 0252 0. 0360 0. 0468 0. 0576
吸光度 0. 175 0. 309 0. 443 0. 567 0. 716
2. 4. 2 精密度实验 吸取适量供试品溶液，按 2. 3. 3 项下
方法操作至加水定容，摇匀，5000r /min 离心 3 分钟，取上清
液，于 503nm 处连续测定吸光度 5 次，计算其 RSD 值为
0. 39%，表明该方法精密度良好。
2. 4. 3 重复性实验 吸取等量的 5 份同一供试品溶液，分
别按 2. 3. 3 项下方法操作至加水定容，摇匀，5000r /min离心
3 分钟，取上清液，于 503nm 处测定吸光度，计算其 RSD 值
为 1. 02%，表明该方法重复性良好。
2. 4. 4 稳定性实验 吸取适量供试品溶液，按 2. 3. 3 项下
方法操作至加水定容，摇匀，5000r /min 离心 3 分钟，取上清
液，自加水定容摇匀开始计时，分别于 5、10、15、20 分钟取样
测定吸光度，结果见表 2。与计时 5 分钟后的数据比较，20
分钟后吸光度下降了 4. 95%，表明供试品溶液经 NaNO2 － Al
(NO3)3 － NaOH显色后，吸光度下降较快，样品在 20 分钟内
基本稳定。
表 2 稳定性实验结果
时间(min) 吸光度
吸光度下降
百分比(%)
吸光度
RSD(%)
5 0. 323 －
10 0. 317 1. 86 2. 18
15 0. 312 3. 41
20 0. 307 4. 95
2. 4. 5 加样回收率实验 称取已知总黄酮含量的菥蓂子粉
末 6 份，每份 1. 0g，分别按 2. 2 项下方法脱脂后，加芦丁对照
品适量，继续按供试品溶液的制备方法和含量测定方法依法
操作，所得结果见表 3，其 RSD值为 1. 86%，平均加样回收率
为 98. 3%。
3 菥蓂子总黄酮含量的测定
按 2. 2 项下方法，平行制备 3 份菥蓂子总黄酮供试品溶
液，分别按含量测定方法依法操作，用回归方程计算出供试
品溶液的总黄酮浓度，再根据供试品溶液的稀释倍数和所取
菥蓂子粉末的质量，计算出菥蓂子中总黄酮含量，结果见表
4。
表 3 加样回收率实验结果
样品
取样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 1. 0051 5. 29 4. 02 9. 15 96. 0
2 1. 0030 5. 28 4. 18 9. 34 97. 1
3 1. 0012 5. 27 5. 08 10. 38 100. 6
98. 3 1. 86
4 1. 0053 5. 29 5. 21 10. 37 97. 5
5 1. 0033 5. 28 6. 15 11. 32 98. 2
6 1. 0010 5. 27 6. 09 11. 38 100. 3
表 4 菥蓂子总黄酮含量测定结果
样品 总黄酮含量(mg·g － 1) 平均值(mg·g － 1) RSD(%)
1 5. 14
2 5. 28 5. 26 2. 11
3 5. 36
4 讨论
4. 1 菥蓂子供试品溶液中加入 NaNO2 后出现轻度浑浊，且
浑浊程度随加样量的增加而增加。因不溶物对比色测定产
生影响，故在测定吸光度之前需离心取上清液进行测定。
4. 2 菥蓂子供试品溶液经 NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH显色
后，虽在 20 分钟内基本稳定，但吸光度随时间的下降速率较
快，为了减小测定误差，应控制好每个样品的显色反应时间。
本研究经多次试验，选定显色反应时间为 5 分钟。
4. 3 在选择测定方法时，还做了以木犀草素为对照品的
KOH显色法的方法学考察，结果加样回收率实验数据不符
合含量测定要求，故未选用该方法。
4. 4 本实验结果表明，菥蓂子(产地浙江)中的总黄酮含量
为 5. 26mg·g －1，折合成脱脂后的菥蓂子渣中的含量(菥蓂
子含油率按 34%计)为 8mg·g －1左右，黄酮类成分含量较
高，具有综合开发利用价值，下一步可继续对菥蓂子中的黄
酮类成分构成和提取工艺进行深入研究。
参考文献
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(收稿:2012 － 05 － 17)
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