全 文 ：第 3 8卷 第 6 期
19 0 8年 1 2月
化 学 学 报
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3 8
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6
D e e e m b e r
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1 98 0
垂 盆草 化 学 成 分 的 研 究
n
. 垂盆草贰的气相层析 *
叶 淳 渠 李 静 芳
(中国科学院上海药物研究所 )
垂盆草贰是从景夭科多年生草本植物垂盆 草 ( eS 而二 aS r o e耐哪。 B u n ge ) 中分 离
得到的一个新的含氰葡萄糖贰化合物 〔1 〕, 其结构如下 :
临床证明它是降低血清谷丙转氨酶 (S GP )T 的有效成分 , 为 了摸索品种 、 季节 、 产地对其含
量的影响 〔幻 . 我们采用了气相层析法 , 将它转变成硅醚衍生物的形式 , 测定垂盆草全草中
垂盆草贰的含量 . 有关氰贰化合物的气相层析至今未见报道 , 而硅醚衍生物的制备条件
与样品的性质及所用的硅醚试剂有关〔3 ~ 6] . 为了得到单一尖峰进行定量分析 , 本文 试验
了制备衍生物的最佳条件 . 测定了垂盆草中垂盆草贰的含量 , 与薄层层析比较结果基本
一致 . 且前者操作简便 , 准确度高 , 绝对误差 < 3另 , 标准误差 < 士 2 . 1多 .
实 百拟练习卫乙
仪器 、 试剂 、 操作条件
仪器 : 上海分析仪器厂 1 0 一型气相层析仪 . 氢火焰检测器 . 反应管体 积 约 为 3 毫
升左右的样品管并用聚 乙烯盖密封 ,
试剂 : N , -O 双三 甲基硅烷基 乙酞胺 ( B S A ) , 上海试剂总厂产 品 . N , -O 双三 甲基硅
烷基三氟 乙酞胺 (B ST F A ) , M er ok 产品 . 三甲基氯硅烷 (T M C )S , 经重蒸处理 , 上海树脂
厂产品 . 六甲基二硅胺 (HM D )S , K 。 。」l e iL g h 七aL b or 时or i印 L记 产品 .
操作条件 ; 柱填料为 2 . 6界X E 一60 涂于经酸洗 、 硅烷化的 Chr o m os or b W (80 ~ 1 0
目)载体上 . 层析柱长 1 . 3 米 , 内径 3 毫米 U 形玻璃柱 (经硅烷化处理 ) . 柱温 2 0 o0 C , 氮
气流速 2 5 毫升 /分 , 进样 1 微升 .
样品的前处理
. 1 9 7 8 年 1 1 月 3 0 收到 .
6 02 化 学 学 报 3 8卷
垂盆草全草干粉叹20 克 )
l
于月旨肪提取器中丙酮力口热抽提至无色
丙酮溶液工蒸去丙酮
糖浆状物
{加少量水溶解
、 过滤
杏不溶物
(弃去 )滤 液l减压
、抽千
残留物
}用甲醇精确稀
释至 4 毫升
今— - - - - 一 一 丢2 毫升甲醇溶液 2 毫升甲醇溶液
2 克硅胶” 拌匀
0 7
.
~0 8
0
0 烘至恒重
硅胶柱层析”
用 8:3 ( V声 )的氯仿 :甲醇洗脱
精密吸出 0 .0 1~0 .0 9毫升移至反应管中 , 抽干 、 置于真空干燥器巾
3~ 4 小时
硅醚化杏气相层析妙卜标法定量 )份5 毫升) (1 0 毫升 ) ( 4 毫升 ) ( 1 0 毫升 )
硅胶薄层层析升
8 :3 (V / V )氯仿 : 甲醇展开喷 50 % 硫酸 l 0 0 C 加热 5 ~ 10 分钟显色
目测法定量
. 如分析垂盆草的制剂 “ 景垂片” , 可取 4 片 (0 . 3 克 /片) 碾碎 , 甲醇溶解搅成糊状 , 拌入 3克硅胶 , 在 7 0’ C 烘
2 小时 。
, . 硅胶是上海五四农场 、 80 目以下的层析用硅胶 . 层析柱尺寸为内径 1 . 5 厘米 , 柱长 25 厘米 .
衍生物的制备 、 标准曲线及含量测定
精确称取约 3 0 毫克的垂盆草贰纯品于 1 0 毫升容量瓶 中 , 用 甲醇溶解稀释至刻度 . 精
确吸取一定量的垂盆草贰 甲醇溶液 (每微升含 0 . 2微克 ~ 1 . 0 0微克)于反应管中 , 抽干 , 再
2
.
5
2
.
0
1
.
5
1
.
0
/
.
/
/
/
’
0
.
5
0 0
.
2 0
.
4 0
.
6 0
.
8 1
.
0 1
.
2
微克 /微升
ǎa兴国à彩巨奢琴名创
图 i 垂盆草试硅醚化衍生物的标准曲线—样品浓度与峰面积关系
认 (分)
图 2 “红星” 垂盆草全草干粉的气相层析
~ 垂盆草试硅醚衍生物
6 期 研 究 简 报 ` 6 03
置于真空干燥器中干燥 3、 4小时后 , 加入 70 微升 硅醚试剂 (B S A : T M C S 为 5 : Z V / V ) ,
盖紧塞子 , 于 6 o0 C 加热半小时至 1 小时 , 冷却后 , 直接取样进行气相层析 , 每次进样 1 微
升 . 以不同浓度的垂盆草贰和相应的峰面积作图 , 可得到通过原点的直线 , 作为定量标准
曲线见图 1 . 垂盆草全草 中垂盆草贰的含量测定 , 只要将 _ L述前处理好的样品 , 按上法制
备成硅醚衍生物 , 用外标法定量 . 图 2 系 “ 红星 ”地 区采集的垂盆草全草干粉的气相层析 .
结 果 和 讨 论
硅醚化条件的选择
不 同的硅醚化试剂的影响 垂盆草贰是一个多经基化合物 , 必须制成挥发性的衍生
物才能进行气相层析 , 为了获得单一尖峰
进行定量 , 采用了五种不同的硅醚化试剂
与垂盆草贰进行反 应 , 见 图 3 . a书 S A +
T M C S ( 5
: Z V / V) 70 微升 ; b一 S A 7 0 微
升 ; o书四 F A + T M C S ( 5 : ZV /V ) 7 0 微
升 ; d e B S T F A 70 微 升 ; -e H M D S + T M C S
(5
: Z V /V ) 70 微升均在 60 ℃ 反应 1 小时 .
结果采用 a 的混合硅醚试剂 , 能得到单一
尖峰 , 其它硅醚试剂未能获得满意结果 . 在
60 ℃ 反应 丈小时条件下 , T M C S 对获得单
一尖峰是不可少的 .
产缺à研尝牟
一 - - 一上一 -~ J - - 一~ J~ ~
_一 TM韶 量 (占咫 A 的 % )3 6 9 1 2 15 1 3 2 1 2 4 2 7
V t (分 )
图 3 垂盆草贰和不同硅醚化试剂的反应 ( 6 o0 C , 一小时 )
~
B S A + T M明; b一B 3 A ; c一 B ST F A 十 T MOS ;
d
es
. 卫名J生, A ; 己一刀M 一DS 十 T M浇
图 4 TM CS 量对生成垂盆草试硅醚
化衍生物的影响 (6 0 o C , 1 小时 )
化 学 学 报 3 8卷
TMC S量 、 反应温 度、 时间甘转化率的影响 在一定量的样品中 , 加入 TM C S 在 B S A
中占不同比例的 7 0微升的硅醚试剂 , 6 0o C反应 1 小时 ,图 4 结果表明与含 20 ~ 30 多T M C S
的硅醚试剂反应 , 生成的衍生物的转化率最大 . 2 o5 C 反应 1 小时结果偏低 .
填充柱的选择
按样品前处理中所述 : 将硅胶柱层析分离的 4 个组分 , 分别进行气相层析和硅胶薄
层层析对照 , 说明 2 , 6外 X E 一60 的填充柱能将垂盆草贰的硅醚衍生物从其它的组分中分
离开来 . 此外 5界 O V 一2 5 , 2界 O V we 210 填充柱也适用 , 但分析时间较 X E一 6 0 填充柱为
长 .
回收率及误差
取一定量的垂盆草贰含量极微 (可忽略不计 )按上述样品前处理的垂盆草全草的甲醇
溶液 , 加入已知浓度的垂盆草贰 . 按上法制备衍生物 , 进样 1 微升 , 结果见表 1 , 绝对误差
< 3界, 标准误差 < 士 2 . 1界 .
表 1 垂盆草贰的回收率及误差
加入垂盆草贰量
0
.
4 0 微克 /微升
。 . 6 1 微克 /微升
。 . 8 1 微克 /微升
测 定 值 % 绝 对 误 差 % 标 准 误 差 %
9 9
.
4 ( 9 7
.
5 ~ 1 0 0 )
9 7
.
1 ( 9 5
.
1 ~ 1 0 0 )
9 8
.
8 (9 7
.
5 ~ 1 0 1 )
一 0 . 6
一 2 . 9
一 1 。 2
士 1 . 1
士 2 . 1
士 1 . 5
两种方法的比较
表 2 表明气相层析和硅胶薄层层析的测定结果基本一致 , 但薄层层析样品处理复杂
又费时 , 条件必须严格控制才能获得较好的结果 , 目测法定量误差较大 . 气相层析法操作
简便 , 无须经柱层析分离 , 制成硅醚化衍生物后 , 可直接进入填充柱进行分离定量 , 准确度
优于薄层层析 .
表 2 垂盆草全草中垂盆草式的含量分析结果比较
产 地 季 节
方 法
气 相 层 析 % 薄 层 层 析 %
东山狭叶
东山侠叶
东山阔叶
东山杨弯
东 l工4红星
浙江丽水
天目山狭叶
天目山阔叶-
玉 屏
元 月
七月下旬
七月下旬
九 月
0
.
0 1 5
0
.
0 8 3
0
.
0 5 5
0
.
0 7 8
0
。
1 6
0
.
2 0
约 0 . 0 0 1 1
约 0 . 0 0 0 8
0
.
0 1 4
0
.
0 1 ~ 0
.
0 2
0
.
0 7 ~ 0
,
0 8
0
.
08 ~ 0
.
1 0
0
.
0 7~ 0
.
0 8
0
.
1 6 ~ 0
.
1 8
0
.
2 0
测不 出
测不 出
0
.
0 1 3 ~ 0
.
0 ] 5
月八六九
6 期 研 究 简 报 60 5
参 考 文 献
[ 1〕 方圣鼎 , 严修泉 , 李静芳 , 范芝芸 , 徐小异 , 徐任生 , 科学通报 24 , 4 3 1 ( 1;9’ 9) .
〔2 ] 李静芳 , 黄秀兰 , 叶淳渠 , 药 学通报 , 待发表 .
〔3 〕 E . M . hC a功 b a z , E . C , H叮 n in g , A 、 al . 刀倪心 h雌 . 3 0 , 7 (l 9 6 9 ) .
[ 4 ] 南原 利夫 , 梭藤 顺一 , 分析化学 2 3 , 7 0 4 ( 1 9 7 4 ) .
[ 5 ] .C C
.
S
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里ey
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. 及 n t」e y , M . M滋 i at , 从 r· W , W e l l s , J A姗犷 . C几己仍 . 名o e . 8弓, 2 4 9 7 ( 1 9 6 3) 。
[ 6 〕 J · D · N i c l l o lso n , A朴以尹右103 , 1 9 3 ( 1 9 7 8) .
S T U D I E S O N T H E C H EM IC A L C O N S IT T U EN T S O F
万石D以M S A R 俐吸N T O S U M B U N G E
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T h e o i ly l d毋 i v at i v e o b七a i n de fr o m 七h e e对 r a o t 15 a n a l y z e d o n a o o l u m n
。 f x 子6 0 。七 Z o o o c . T h 。 r 。。 u z七 ,。 q u a l i t a osv e zy i n 。罗。 e m二n七诫 t h , h a , 。 b饭 i n祖 ofr 。
切 i n l叮 e r ho r o m a七馆 r a p li 3厂 . H o w e v e r 七h e G C m e七h o d i。 。 im P l e , m o r e ar P i d a n d a况 u ·
r a t e , 七h e s协 n d a r d e r r o r 15 w i七h主n t h e r a n g e o f 士 2 . 1界 .