全 文 ：垂盆草总黄酮的酶法提取及其抑菌活性
公衍玲 ,黄　山 ,于慧荣(青岛科技大学化工学院药学系 ,山东 青岛 266042)
[作者简介 ] 　公衍玲(1975-),女 ,硕士研究生.Tel:(0532)84023884,
E-mail:hanyu ma@126.com.
　　[摘要 ] 　目的　研究垂盆草总黄酮的酶法提取工艺及其抑菌作用。方法　用酶解和煎煮相结合的方法 , 以总黄酮得率
为指标 , 通过正交实验优选出最佳提取工艺 , 用平板打孔法考察垂盆草总黄酮的抑菌作用。 结果　垂盆草总黄酮的最佳酶解
工艺条件是酶解温度 50℃,酶解 pH6.0, 酶用量 0.6%, 酶解时间 1.5 h, 其中酶解温度是显著影响因素。总黄酮得率可达
3.471%。垂盆草总黄酮提取液对大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草杆菌和产气杆菌都有不同程度的抑菌作用 , 对四联球菌作
用不明显。结论　该实验得到的垂盆草总黄酮的提取工艺合理可行 ,提取率高 , 提取得到的总黄酮具有一定的抑菌作用。
[关键词 ] 　垂盆草;总黄酮;酶法提取;抑菌作用
[中图分类号 ] 　R284.2　　　[文献标志码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1006-0111(2010)02-0114-03
EnzymaticextractionandantibacterialactivityoftotalflavonoidsfromSedum
sarmentosum
GONGYan-ling, HUANGShan, YUHui-rong(PharmaceuticalDepartment, ColegeofChemicalEngineering, QingdaoUniversityof
ScienceandTechnology, Qingdao266042, China)
[ Abstract] 　Objective　ToinvestigatethetechnologyoftotalflavonoidsinSedumsarmentosumextractedbyenzymaticmeth-
odanditsantibacterialactivity.Methods　TotalflavonoidsinSedumsarmentosumwasextractedbythemethodthatenzymatichy-
drolysiscombinedwithwaterdecocting.Theextractiontechnologywasoptimizedbyorthogonaldesignwiththecontentoftotalfla-
vonoidsyield.Theantibacterialactivityoftotalflavonoidswasdeterminedbystilettomethod.Theresultsreveledthattheoptimum
technologywastobehydrolyzedfor1.5 hby0.6% enzymeat50℃ inpH6.0.Thesignificantfactorwasthetemperatureofenzy-
matichydrolysis.Theyieldoftotalflavonoidswas3.471%.TotalflavonoidsofSedumsarmentosumwasbacteriostasisonE.coli,
Staphylococcusaureus, BacilussubtilisandBacillusgasoformans.ThebacteriostasisonBacilusaerogeneswasnotobvious.Theex-
tractiontechnologyobtainedinthisexperimentarereasonableandfeasiblewithhighextractionrate, andthetotalflavonoidshassome
antibacterialactivity.
[ Keywords] 　Sedumsarmentosum;totalflavonoids;enzymaticextraction;antibacterialactivity
　　垂盆草收载于《中国药典》2005年版一部 ,为景
天科多年生草本植物垂盆草 Sedumsarmentosum
Bunge的新鲜或干燥的全草 ,我国大部分地区均有
分布。该药味甘 、淡 、性凉 ,具有清热解毒 、利尿消
肿 、排脓生肌之功效 ,临床可用于湿热黄疸 ,小便不
利 ,痈肿疮疡 [ 1] 。药理学研究发现 , 垂盆草具有免
疫抑制 ,保护肝细胞 ,降低血清谷丙转氨酶 ,抗菌等
作用[ 2 ～ 4] 。近年来国内外学者已从垂盆草中分到了
多种化学成分 ,包括垂盆草苷 ,黄酮类成分 ,生物碱
类成分 ,三萜类成分等 [ 5 ～ 7] ,其中关于黄酮类成分的
研究较深入 ,但提取工艺的研究报道相对较少 ,酶法
提取尚未见报道 。本研究采用酶辅助提取的方法提
取垂盆草中的总黄酮成分 ,并对其体外抑菌活性进
行检测 ,以期为垂盆草总黄酮的提取提供一种更为
有效的方法 。
1　材料和方法
1.1　材料和仪器　垂盆草中药饮片(毫州徐重道
中药饮片厂),芦丁(中国药品生物制品检定所),纤
维素酶(夏盛实业集团有限公司),大肠杆菌 、金黄
色葡萄球菌 、枯草杆菌 、四联球菌 、产气杆菌(中国
药品生物制品检定所),其它试剂均为市售分析纯 。
UV762紫外 /可见分光光度计(北京普析通用
仪器有限责任公司), DHS-25型 pH计(上海精科雷
磁)。SW-CJ-1F型单人双面净化工作台(苏州净化
设备有限公司),人工气候箱(宁波江南仪器厂)。
1.2　实验方法
1.2.1　垂盆草总黄酮的水提法与酶法提取
1.2.1.1　水提法　准确称取垂盆草 20 g各 3份 ,
置电热套上微沸提取 2 h,过滤 ,浓缩至 1 g/ml。
1.2.1.2　酶法提取 　准确称取垂盆草 20 g各 3
份 ,浸泡 30 min,同时 0.08 g复合酶用 40 ℃温水活
化 5 ～ 10 min,调节温度到 50 ℃, pH值到 4.0,缓缓
114
药学实践杂志　2010年 3月 25日第 28卷第 2期
JournalofPharmaceuticalPractice, Vol.28, No.2, March25, 2010
加入酶液并轻轻搅拌 ,恒温酶解 2 h。酶解完后 ,在
电热套上微沸提取 2 h,过滤 ,浓缩至 1 g/ml。
1.2.2　总黄酮含量测定
1.2.2.1　芦丁标准曲线的制备　精密量取芦丁标
准溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml,分别置于 25 ml
容量瓶中 ,各加 30%乙醇 5 ml,再各精密加入 5%
NaNO2溶液 0.7 ml,摇匀 ,放置 6 min,然后再各精密
加入 10%Al(NO3)3溶液 0.7 ml,摇匀 ,放置 6 min,
最后再各精密加入 1 mol/L的 NaOH溶液 10 ml,分
别用 30%乙醇稀释至 25 ml,摇匀 ,放置 15 min后 ,
置比色皿中于 510 nm处测吸光度。以浓度为横坐
标 ,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。得回归方程 y
=12.388x-0.024 7 , R2 =0.998 5。
1.2.2.2　垂盆草中总黄酮的测定　取 1.2.1项下的
滤液 0.1 ml,按照 1.2.2.1项下的方法测吸光度 ,计
算总黄酮的质量 ,并计算总黄酮得率(总黄酮得率 =
提取液中总黄酮质量 /侧柏叶质量 ×100%)。
1.2.3　垂盆草总黄酮酶法提取的工艺优化　根据
预实验结果 , 本研究设计考察酶解温度 、酶解 pH
值 、酶用量 、酶解时间 4个因素 ,每个因素设 3个水
平 ,采用 L9(34)正交表安排实验 ,以确定垂盆草总
黄酮的最佳提取工艺条件 。
1.2.4　垂盆草总黄酮的体外抑菌活性的检测　参
考文献方法 [ 8] ,以大肠杆菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草
杆菌 、四联球菌 、产气杆菌为实验菌株 ,用平板打孔
法测量垂盆草总黄酮的抑菌圈大小。
2　结果与讨论
2.1　垂盆草总黄酮的水提法与酶法提取的比较　
结果见表 1。
表 1　垂盆草总黄酮水提法与酶法提取的比较
提取方法 总黄酮得率(%) 平均得率(%) RSD(%)
水提法 1.965 2.086 1.894 1.982 9.708
酶法提取 2.872 2.852 3.064 2.923 11.705
从表 1可以看出 ,酶法提取明显比单纯的水提
法总黄酮的得率要高 。植物药的有效成分往往被包
裹在细胞壁内 ,提取时细胞壁造成传质阻力 ,使提取
效果受到很大的限制 。传统的水提法受细胞壁主要
成分纤维素的阻碍 ,往往提取效率较低。酶技术是
近年来用于天然植物有效成分提取的生物工程技
术 ,选用适当的酶可使细胞壁疏松 、破裂 ,比较温和
地将植物组织分解 ,减小传质阻力 ,加速有效成分的
释放 ,从而提高其提取率。
2.2　垂盆草总黄酮酶法提取的工艺优化　正交试
验结果见表 2,正交试验方差分析结果见表 3。
表 2　正交试验直观分析表
实验号 酶解温度A(℃) pHB
酶用量
C(%)
酶解时间
D(h)
总黄酮得率
(%)
1 1(40) 1(4.0) 1(0.2) 1(1.5) 2.825 0
2 1(40) 2(5.0) 2(0.4) 2(2.0) 2.762 5
3 1(40) 3(6.0) 3(0.6) 3(2.5) 2.912 5
4 2(50) 1(4.0) 2(0.4) 3(2.5) 3.255 0
5 2(50) 2(5.0) 3(0.6) 1(1.5) 3.375 0
6 2(50) 3(6.0) 1(0.2) 2(2.0) 3.150 0
7 3(60) 1(4.0) 3(0.6) 2(2.0) 2.787 5
8 3(60) 2(5.0) 1(0.2) 3(2.5) 2.500 0
9 3(60) 3(6.0) 2(0.4) 1(1.5) 2.875 0
均值 1 2.833 2.956 2.825 3.025
均值 2 3.260 2.879 2.964 2.900
均值 3 2.721 2.979 3.025 2.889
极差 0.539 0.100 0.200 0.136
表 3　正交试验的方差分析表
因素 偏差平方和 自由度 F值 F临界值
酶解温度 0.485 2 30.3131) 19.000
pH 0.016 2 1.000 19.000
酶用量 0.063 2 3.938 19.000
酶解时间 0.034 2 2.125 19.000
误差 0.02 2
1)酶解温度 F值 >F临界值 ,对提取率有显著性。
由表 2可以看出 ,各因素对总黄酮提取效果影
响的顺序依次为酶解温度 >酶用量 >酶解时间 >酶
解 pH值 ,且酶解条件为酶解温度 50 ℃,酶解 pH
6.0,酶用量 0.6%(酶用量占药材量的质量分数),
酶解时间 1.5 h时 ,总黄酮的提取率最高。从表 3
可以看出 ,各因素中只有酶解温度的 F值大于 F临
界值 ,所以 ,酶解温度对提取率的影响具有显著性 ,
而其它因素都不具有显著性 。
2.3　验证试验　以酶解温度 50 ℃,酶解 pH6.0,
酶用量 0.6%(酶用量占药材量的质量分数),酶解
时间 1.5 h为酶解条件 ,酶法提取垂盆草中总黄酮 ,
重复 3组 ,试验结果见表 4。
表 4　验证试验结果
组号 总黄酮得率(%) 平均得率(%)
1 3.263
2 3.750 3.471
3 3.400
由表 4可知 ,总黄酮得率平均值为 3.471%,说
明试验结果真实可信。
2.4　垂盆草总黄酮的体外抑菌活性　垂盆草总黄
酮提取液对 5种细菌的抑菌圈直径见表 5。
(下转第 153页)
115
药学实践杂志　2010年 3月 25日第 28卷第 2期
JournalofPharmaceuticalPractice, Vol.28, No.2, March25, 2010
氟罗沙星注射液与注射用夫西地酸钠存在配伍禁忌
孙立光 (解放军第 425医院 , 海南 三亚 572000)
[作者简介 ] 　孙立光(1979-),男 , 大专 .Tel:13876765084, E-mail:
aguangsanya@qq.com.
　　[关键词 ] 　氟罗沙星注射液;注射用夫西地酸钠;配伍禁忌
[中图分类号 ] 　R969.2　　　[文献标志码 ] 　D　　　[文章编号 ] 　1006-0111(2010)02-0153-01
　　目前 ,临床上使用的药物比较多 ,很多药物的不
良反应 、配伍禁忌等信息在药品说明书及相关报道
资料中介绍相对欠缺 。笔者临床用药过程中发现 ,
氟罗沙星注射液与注射用夫西地酸钠出现配伍反
应 ,现报道如下。
1　临床资料
患者 ,男 , 33岁 ,因支气管炎 、肺部感染 ,在我院
就诊 ,医生应用消炎 、抗感染等对症治疗。在静脉滴
注完氟罗沙星注射液后 ,为患者继续静滴用生理盐
水稀释后的注射用夫西地酸钠溶液时 ,发现输液管
内出现白色混浊 ,即将输液管针头拔出并重新更换
输液管后 ,继续静脉滴注稀释后的注射用夫西地酸
钠溶液 ,静滴后患者无不适 。
　　实验将仅用无菌缓冲液稀释后的注射用夫西地
酸钠 5 ml直接用注射器注入氟罗沙星注射液瓶内
混合 ,发现混合液立即出现乳白色絮状物 ,且絮状物
浓度较高 ,放置 24 h后 ,絮状物不溶解。
2　讨论
本次使用的药品氟罗沙星注射液(规格:100 ml
：0.2 g),注射用夫西地酸钠(0.125 g)及其缓冲液
10 ml,均经卫生药检合格 ,两种药物的使用说明书都
未介绍两者存在配伍禁忌 ,但通过门诊患者静滴及实
验 ,证明此两种药物存在配伍禁忌 。因此建议临床使
用该两种药物时应间隔给药 ,或中间用生理盐水冲
管 ,以免发生用药不良反应 ,提高用药安全性。
[收稿日期 ] 　 2009-06-23
[修回日期 ] 　 2009-07-14
(上接第 115页)
表 5　垂盆草总黄酮的体外抑菌活性(抑菌圈直径 /mm)
加药量
(μl)
大肠
杆菌
枯草
杆菌
产气
杆菌 金葡菌
四联
球菌
50 9.5 9 8.25 10 -
100 12.25 9.33 9.25 11 -
150 13.75 11 9 13 -
200 14.25 12.20 9 15 -
从表 5可以看出 ,垂盆草总黄酮在体外对大肠
杆菌 、金黄色葡萄球菌 、枯草杆菌都有较强的抑制作
用 ,并且随着用量的增加 ,抑菌作用加强;垂盆草总
黄酮对产气杆菌的抑制作用相对较弱 ,且没有明显
的剂量依赖关系;对四联球菌没有明显的抑菌作用 。
3　结论
本研究首次采用纤维素酶酶解预处理与水提法
相结合的提取工艺提取垂盆草总黄酮 ,获得了较高
的提取率 ,为垂盆草总黄酮的提取提供了一种新的
方法。通过正交试验发现 ,各因素对总黄酮提取效
果影响的顺序依次为酶解温度 >酶用量 >酶解时间
>酶解 pH值 ,其中酶解温度为显著影响因素。优
选得到的最佳提取工艺为酶解温度 50 ℃,酶解 pH
6.0,酶用量 0.6%(酶用量占药材量的质量分数),
酶解时间 1.5 h,总黄酮得率高达 3.471%。提取获
得垂盆草总黄酮还具有较好的体外抑菌活性 。
【参考文献】
[ 1] 　中国药典 2005版 [ S] .一部.2005:148.
[ 2] 　潘金火 ,何满堂 ,罗　兰 ,等.垂盆草不同提取部位保肝降酶
试验 [ J] .时珍国医国药 , 2001, 12(10):888.
[ 3] 　KangTH, PaeHO, YooJC, etal.Antiproliferativeefectsofal-
kaloidsfromSedumsarmentosumonmurineandhumanhepatoma
cellines[J].Ethnopharmacology, 2000, (70):177.
[ 4] 　孙卫东 ,胡海涛 ,钱山青 ,等.垂盆草提取液对小鼠免疫和抗
氧化功能的研究 [ J].中外医疗 , 2008, 27(31):19.
[ 5] 　魏太明 ,阎玉凝 ,关昕璐 ,等.垂盆草的化学成分研究 [ J] .北
京中医药大学学报 , 2003, 26(4):59.
[ 6] 　蒋新龙 ,蒋益花.垂盆草总黄酮的提取工艺研究 [ J] .安徽农
业科学 , 2006, 34(18):4745.
[ 7] 　HyuncheolOH, KangDG, KwonJW, etal.Isolationofangio-
genesisconvertiongenzyme(ACE)inhibitoryflavonoidsfromSe-
dumsarmentosum[ J].BiolPharmBul, 2004, 27(12):2035.
[ 8] 　陈　奇.中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出版社 ,
1993:259.
[收稿日期 ] 　 2009-06-29
[修回日期 ] 　 2009-09-11
153
药学实践杂志　2010年 3月 25日第 28卷第 2期
JournalofPharmaceuticalPractice, Vol.28, No.2, March25, 2010