全 文 ：第 29卷 ,第 2期 光　谱　实　验　室 Vol . 2 9 , No . 2
2 0 1 2年 3月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory March , 2 0 1 2
火棘果中总黄酮的含量测定①
① 贵州省科技创新人才团队建设项目 [黔科合人才团队 ( 2011) 4008 ] ;贵阳市科学技术计划项目 ( [2010 ]筑科计合同字
第 3-重 -1号 )
② 联系人 ,手机: ( 0) 13985028916; E-mail: alice9800@ sina. com; gxh 200719@ 163. com
作者简介:甘秀海 ( 1976— ) ,男 ,贵阳市人 ,讲师 ,硕士 ,主要研究方向为中药化学及中药质量控制。
周欣 ( 1962— ) ,女 ,贵阳市人 ,教授 ,博士 ,主要研究方向为中药、民族药质量控制 ,中药指纹图谱 ,中药新药开发工作。
收稿日期: 2012-01-28;接受日期: 2012-02-15
甘秀海　陈华国a　周 欣② a　赵 超a
(贵州师范学院化学与生命科学学院　贵阳市乌当区高新路 115号　 550018)
a (贵州师范大学天然药物质量控制研究中心　贵阳市宝山北路 116号　 550001)
摘　要　利用索氏提取法提取火棘果中总黄酮 ,以芦丁为对照品 ,紫外分光光度法测定其含量。 在波
长 418nm处芦丁在浓度 5— 30μg· mL- 1范围内具有良好线性关系 ,其相关系数 r= 0. 9997。 该方法简便、
重现性好 ,可作为火棘中总黄酮含量测定的一种方法。
关键词　火棘果 ;芦丁 ;总黄酮 ;紫外分光光度法
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2012) 02-1223-04
1　引言
火棘 [Pyracantha fortuneana( M axim. ) Li ]为蔷薇科火棘属植物 ,异名赤阳子、救军粮、火把果
等。其果实具有很高的食用价值和药用保健价值 ,也是一种重要的天然色素、果胶及饲料资源。 火
棘果提取物具有抗氧化、增强免疫力、增强体力、降血脂等作用 ,具有健脾消食 ,收涩止痢 ,止痛的功
效 [1, 2 ]。其化学成分主要有槲皮素、芦丁等黄酮类化合物 [ 3— 7]。
黄酮类化合物具有抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性 ,因而被广泛应用于医药、食品等领域。目前
多数文献 [8, 9 ]以芦丁为对照品 ,紫外分光光度法来测定总黄酮时以 NaNO2-Al( NO3 ) 3-NaOH为显色
剂 ,但此法较繁琐 ,且干扰较大。为了寻求一种快速测定火棘果中总黄酮含量的方法 ,本文建立了以
AlCl3 -NaAc为显色剂的紫外分光光度测定法 ,并测定了不同产地火棘果中总黄酮的含量。 该法简
便可行、重现性好 ,可作为火棘中总黄酮含量测定的一种方法。
2　实验部分
2. 1　实验样品
12批火棘果样品采自贵州省 ,经贵州师范大学陈华国副研究员鉴定为蔷薇科火棘属植物
Pyracantha fortuneana( Maxim. ) Li的果实。
2. 2　仪器与试剂
UV -2450型紫外可见分光光度计 (日本岛津仪器有限公司 ) ; AL204型电子分析天平 (瑞士梅
特勒-托利多公司 ) ; KQ-50B型超声波清洗机 (昆山市超声波仪器有限公司 ) ; Direct-Q3型超纯水制
备系统 (美国密理博有限公司 ) ; HH-8型电热恒温水浴锅 (上海梅香仪器有限公司 ) ; XFB-200型中
药粉碎机 (长沙市中南制药机械厂 ) ; ZF-2三用紫外分析仪 (陕西盛华能源技术开发有限公司 )。 芦
丁对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号为 111521-200303,供含量测定用 ) ;无水乙醇、石油醚、
正丁醇、冰醋酸、三氯化铝、醋酸钠等所用试剂均为分析纯。实验用水为重蒸水。
2. 3　实验方法
2. 3. 1　对照品溶液的制备
称取干燥的芦丁对照品 0. 0125g ,置于 50mL烧杯中 ,加适量 80%乙醇溶解并转至 100mL容
量瓶中 ,用少量 80%乙醇洗涤烧杯 3次 ,并转至容量瓶中定容至刻度 ,摇匀 ,得 125μg· mL- 1的芦
丁对照品溶液。
2. 3. 2　样品溶液的制备
称取干燥后的火棘果粉末约 2g ,加入 100mL石油醚 ,采用索式提取器回流提取至无色 ,回收
石油醚后 ,再加入 100mL 80%乙醇索式提取器回流提取 4h,趁热过滤 ,冷却 ,置于 100mL容量瓶中
用 80%乙醇溶液定容至刻度 ,摇匀 ,即得样品溶液。
2. 3. 3　样品的定性实验
吸取适量对照品溶液和样品溶液分别点于同一硅胶 GF254薄层板上 ,以正丁醇∶冰醋酸∶水
( 4∶ 1∶ 5,V /V /V )为展开剂进行展开 ,晾干后 ,喷以 1%三氯化铝乙醇溶液显色后 ,在三用紫外分
析仪下观察到同一水平线上有黄色荧光斑点 ,说明以上样品溶液中含黄酮类化合物。
2. 3. 4　样品的测定
参照文献 [10, 11 ]略有改进 ,取 2. 3. 2制备的样品溶液 2mL置于 25mL容量瓶中 ,加入 AlCl3
溶液 2mL及 NaAc溶液 3mL,摇匀后在 25℃环境中显色 5min,再以 80%乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,在
波长 418nm处测定吸光度。
3　结果与讨论
3. 1　测定波长的选择
取对照品溶液及样品溶液各 2mL,按 2. 3. 4项下的方法 ,以 80%乙醇溶液作空白对照 ,在
200— 800nm波长范围内进行紫外可见分光光度法扫描 ,结果发现对照品溶液和样品溶液在
418nm处均有最大吸收 ,故选定 418nm为测定波长。
3. 2　校准曲线的绘制
准确吸取对照品溶液 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0、 6. 0mL于 25mL容量瓶中 ,按 2. 3. 4项下方法 ,
以 80%乙醇溶液作空白对照 ,于 418nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标 ,浓度为横坐标绘制校准
曲线 ,进行回归分析 ,得回归方程: A= 36. 215C- 0. 006, r= 0. 9997(n= 6) ,结果表明 ,芦丁浓度在
5— 30μg· mL- 1范围内呈良好的线性关系。
3. 3　精密度实验
准确吸取对照品溶液 2mL,共 6份 ,按 2. 3. 4项下的方法测定其吸光度 ,结果 RSD= 0. 56% ,
表明该方法精密度良好。
3. 4　重现性实验
准确称取 6份同批样品按 2. 3. 2项下的方法制备样品溶液 ,再按 2. 3. 4项下的方法测定其吸
光度 ,结果 RSD值为 0. 86% ,表明该方法重现性良好。
1224 光谱实验室 第 29卷
3. 5　稳定性实验
准确吸取按 2. 3. 2项下方法制备的样品溶液 ,按 2. 3. 4项下的方法测定其吸光度 ,每隔 30min
测定 1次 ,连续测定 6次 ,结果 3h内 RSD值为 1. 2% ,表明样品溶液在 3h内基本稳定。
3. 6　回收率实验
取已知含量的火棘果样品 ,准确称定 ,分别加入一定量的芦丁对照品 ,按 2. 3. 2项下方法制备
样品溶液 ,按 2. 3. 4项下方法测定吸光度 ,计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　芦丁回收率实验 (n= 9)
编号 取样量
( g)
原有量
( mg)
加入量
(mg )
测得量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 2. 0092 8. 56 6. 20 14. 62 97. 7
2 2. 0781 8. 85 6. 20 14. 88 97. 3
3 2. 0876 8. 89 6. 20 15. 29 103. 2
4 2. 0670 8. 81 7. 10 15. 72 97. 3
5 2. 0395 8. 69 7. 10 15. 66 98. 2 98. 1 2. 6
6 2. 0998 8. 95 7. 10 15. 77 96. 1
7 1. 9978 8. 51 8. 30 16. 92 101. 3
8 2. 0065 8. 55 8. 30 16. 65 97. 6
9 1. 9756 8. 42 8. 30 16. 27 94. 6
　　由表可知该方法回收率良好 ,可用于火棘果中总黄酮的测定。
3. 7　样品含量测定
准确称取 12批不同产地火棘果样品 ,按 2. 3. 2项下方法制备样品溶液 ,按 2. 3. 4项下方法测
定其吸光度 ,由回归方程计算得到不同产地火棘果中总黄酮的平均含量为 0. 76% ,含量最高为
1. 12% ,最低为 0. 41% ,由此可知不同产地火棘果样品中总黄酮的含量具有明显的差异。
4　结论
本文首次以 AlCl3 -NaAc为显色剂 ,采用紫外分光光度法测定了不同产地火棘果中总黄酮的含
量 ,该方法具有简便可行、重现性好等特点 ,可作为火棘中总黄酮含量测定的一种方法。
参考文献
[1 ]江苏新医学院 .中药大辞典 [M ] .第 2版 .上海 ,上海科学技术出版社 , 2005, 1446— 1447.
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[5 ]王军宪 ,牛娟芳 ,尤晓娟 .火棘果化学成分研究 [ J ].西北药学杂志 , 1994, 9( 6): 253— 255.
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[7 ]王磊 ,陈庆富 .喀斯特山区不同居群火棘果实黄酮含量研究 [ J] .北方园艺 , 2011, ( 19): 8— 10.
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132— 136.
1225第 2期 甘秀海等:火棘果中总黄酮的含量测定
Determination of Total Flavonoids in Fruit
of Pyracantha fortuneana(Maxim. ) Li
GAN Xiu-Hai　 CHEN Hua-Guoa　 ZHOU Xina　 ZHAO Chaoa
( The School of Chemistr y and Lif e Science, Guizhou Normal College, Guiyang 550018, P. R. China )
a ( The Research Center for Quality Control o f Natural Medicine, Guizhou Normal University, Guiyang 550001, P. R. China )
Abstract　 The total f lav onoids in the f ruit of Pyracantha f ortuneana( Maxim. ) Li were ex t racted
by Soxhlet ex t raction method and determined by UV spect ropho tometry with rutin as reference
standard. The rutin had a good linear relationship in the concentration range of 5— 30μg· mL- 1 , and
the correlation coef ficient was 0. 9997 at 418nm. The method is simple and accurate w ith good
reproducibili ty, and can be used to determine the content of total flavones in Pyracantha fortuneana
( Maxim. ) Li.
Key words　 Frui t of Pyracantha fortuneana ( Maxim. ) Li; Rutin; To tal Flavonoids; UV
Spect rophotometry
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1226 光谱实验室 第 29卷