全 文 ：(0． 006 g /kg)对正常小鼠小肠推进有更强的促进作用。枳壳黄
酮苷成分在对正常小鼠小肠推进实验中，柚皮苷和新橙皮苷单独
给药的药效不明显，但是将柚皮苷和新橙皮苷配伍后，与空白对
照组比较，各剂量组均有较显著的小肠推进作用，这在一定程度
上表明新橙皮苷和柚皮苷是枳壳的药效物质。有文献报道，大鼠
灌胃给药后，枳实总黄酮提取物中柚皮苷与新橙皮苷存在相互促
进吸收的作用，而枳实总黄酮提取物中其他成分协同促进两者的
吸收［6］，这与本实验的结论相符合。但枳壳促进胃肠运动的作
用机制还有待进一步的研究，在后续的实验中，将对枳壳中柚皮
苷和新橙皮苷配伍后胃肠吸收的变化，以及配伍后胃肠推进作用
增强的机制作进一步的考察，为枳壳的药效物质基础提供科学依
据。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京:中国医药科技出版社，
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的大鼠药代动力学［J］．中国药科大学学报，2013，44(2) :161．
收稿日期:2014-04-02; 修订日期:2014-09-01
基金项目:国家自然科学基金(No． 81102782)
作者简介:郭依俐(1987-) ，女(汉族) ，湖北天门人，中山大学肿瘤防治中
心药师，硕士学位，主要从事中药有效成分分析工作．
* 通讯作者简介:赵志敏(1978-) ，女(朝鲜族) ，河北泊头人，中山大学讲
师，博士学位，主要从事天然产物的化学成分及其药理活性机制研究工
作．
山莓叶成分的高效液相色谱 －串联质谱分析
郭依俐1，2，黄红兵1，刘 韬2，唐青涛3，赵志敏1*
(1．中山大学药学院天然药物与中药研究所，广东 广州 510006;
2．中山大学肿瘤防治中心药学部，广东 广州 510006;
3．无限极中国有限公司，广东 新会 529156)
摘要:目的 分析湘西常用于医治腹泻的苗药山莓叶的成分。方法 采用高效液相色谱 －串联质谱(HPLC － MS /MS)联
用技术分析山莓叶甲醇提取物，根据紫外光谱、负离子模式下的一级和二级质谱信息，与文献数据和部分对照品对照，推
测化合物的结构。结果 推测了山莓叶中 7 种化合物的结构，其中 3 种为黄酮苷类化合物。结论 对山莓叶化学成分有了
进一步认识，为山莓叶资源的开发提供了依据。
关键词:山莓叶; 成分; 高效液相色谱 －串联质谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 02． 010
中图分类号:R284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)02-0280-02
山莓 Rubus corchorifolius L． f．是蔷薇科悬钩子属植物，别名高
脚菠、龙船泡、牛奶泡、树莓、泡儿刺、刺葫芦等［1］，广泛分布在我
国除东北、内蒙古、新疆、西藏以外的其他地区，尤以长江流域的
野生资源最为丰富［2］。山莓叶在湘西地区常用于治疗腹泻，近
年来，对该植物化学成分的研究已经取得了一定进展。张敏［3］
和陈香雪等［4］分别从其中分离得到 2 个和 3 个二萜化合物，邬美
玉［5］分离得到 3 个黄酮化合物，陈炳华等［6］从其茎和叶中分离
得到一种香豆素成分。目前，尚未见到采用 HPLC － MS /MS联用
技术对山莓叶成分全面研究的报道。
为了更好的开发利用山莓这一资源丰富的野生植物，以及为
开发新型天然抗腹泻药物提供科学依据，本文采用 HPLC － MS /
MS联用技术，对山莓叶甲醇提取物进行了全面分析。
1 材料与仪器
1． 1 材料与试剂 药材山莓叶于 2012 年 9 月采自广东省广州市
大学城冕山，经中山大学天然药化与生药学实验室杨得坡教授鉴
定为蔷薇科悬钩子属植物山莓 Rubus corchorifolius L． f．的干燥叶
片，其标本保存于中山大学药学院天然药化与生药学实验室。咖
啡酸、绿原酸、槲皮素、芦丁及山萘酚对照品购于中国药品生物制
品检定所;色谱纯甲醇购于瑞典 O ＆ pudtion公司;纯化水为实验
室自制;其余试剂均为分析纯。
1． 2 仪器 Thermo Finnigan TSQ 三重四级杆液相色谱质谱联用
仪，包括二元高压梯度泵、二极管阵列检测器(DAD)、柱温箱、自
动进样器、电喷雾三重四级杆质谱仪及 Xcalibur 1． 2 质谱工作
站。色谱柱为 Agilent Zorbax C18色谱柱(4． 6 mm × 250 mm，5
μm)。
2 方法
2． 1 样品处理 取干燥的山莓叶粉末 1． 7 g，用 30 ml 甲醇超声
提取 30 min后，上清液用 40 ml 正丁醇分两次萃取，再取上层溶
液 1 ml在 15000 r·min －1的转速下离心 10 min，用 0． 22 μm微孔
滤膜过滤后待用。
2． 2 HPLC － MS /MS 分析条件 液相色谱条件:流动相为甲醇
(A)－ 1%乙酸水(B) ;梯度洗脱:0 min(10% A)～ 60 min(100%
A) ;柱温 25 ℃;DAD 检测波长范围:200 ～ 600 nm，记录 270 nm
色谱图;流速 1． 0 ml·min －1;进样量 10 μl。
质谱条件:分流比 3 ∶ 1，即实际进入质谱的流动相流速为
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250 μl·min －1;电喷雾电离(ESI)负离子模式;毛细管温度 350
℃;喷雾电压 4． 0 kV;鞘气(N2)流速为 20 arb;辅助气(N2)流速
为 5 arb;碰撞气(Ar)压力 1． 5 torr;离子源裂解(CID)碰撞能量为
20 V;质量扫描范围:m/z 50 ～ 1000。
3 结果
用 HPLC － MS /MS技术分析山莓叶甲醇提取物成分时，采用
的是负离子检测方式。对照品质谱测定数据见表 1。山莓叶甲
醇提取物在负离子模式下的总离子流图和检测波长 270 nm处的
色谱图见图 1，各色谱峰所对应的最大紫外吸收波长(λmax)、质谱
数据列于表 2，与相关文献进行比较，推测鉴定了 7 个化合物。
李斌［7］研究发现，负离子模式下黄酮苷类化合物有如下裂
解规律:(1)C － 3＇－ O －糖苷主要丢失糖分子，只产生［苷元 －
H］－离子，不产生［苷元 － 2H］－离子;(2)C － 7 － O －糖苷丢失
糖分子，二级质谱中除了［苷元 － H］－离子外还可以观察到［苷
元 － 2H］－离子，但后者强度明显降低;(3)C － 3 － O －糖苷分别
发生丢失糖分子和糖苷键均裂的裂解，同时产生［苷元 － H］－离
子和自由基［苷元 － 2H］－ ．离子，且两者强度相近。黄酮苷元为
山奈酚和槲皮素的黄酮类化合物，二级质谱中会分别产生 m/z
285 和 m/z 301 离子;糖基连在苷元 3 号位的 C上时，山萘酚苷元
进一步裂解产生 m/z 255［M － H － CH2O］
－，槲皮素苷元进一步
裂解产生 m/z271［M － H － CH2O］
－;以槲皮素作为苷元的化合物
还可以产生碎片离子 m/z 255、m/z 151 和 m/z 179。
化合物 1 的色谱和质谱信息与本实验前期研究过的同属植
物粗叶悬钩子叶中成分花青色素一致［8］，推测为花青色素。
化合物 2 的一级质谱为 m/z 401，二级碎片 m/z 341 为［M －
H － CH3COOH］
－，m/z 179 为［M － H － CH3COOH － Hexoside］
－，
m/z161 为［M － H － CH3COOH － Hexoside － H2O］
－，推测为咖啡
酰己糖苷。
化合物 3 的一级质谱为 m/z 191，二级碎片 m/z 176 为［M －
H － CH3］
－，m/z 148 为［M － H － CH3 － CO］
－，最大紫外吸收波
长为 240、295 和 330 nm，与参考文献［9］中东莨菪内酯的质谱和
光谱数据一致，并且陈炳华等［6］山莓茎叶中已分离出东莨菪内
酯，因此推测化合物 3 推测为东莨菪内酯。
化合物 4 的二级碎片中有槲皮素的特征碎片 m/z 301、m/z
179 和 m/z 151，紫外光谱也和黄酮类化合物的紫外光谱图相似，
推测为槲皮素衍生物。二级碎片 m/z 301 为［M － H － 146 －
176］－，即失去一个鼠李糖基和一个葡萄糖醛酸基，并且二级碎
片中没有出现［苷元 － 2H］－即 m/z 300，根据黄酮苷类化合物的
裂解规律［7］，推测化合物 4 为槲皮素 － 7 － O －鼠李糖基葡萄糖
醛酸苷。
化合物 5 的二级碎片 m/z 179 和 m/z 161 为咖啡酸的特征碎
片，m/z 191 为奎宁酸的特征碎片，依据参考文献［10］，推测化合
物 5 为二咖啡酰奎宁酸。
化合物 6 和 7 的二级质谱中含有山萘酚的特征碎片 m/z
285、284、225 和 227，推测为山萘酚衍生物。这两个化合物的二
级质谱中均出现碎片［苷元 － 2H］－即 m/z 284，参照黄酮苷化合
物的裂解规律［7］，推测这两个化合物均为 C － 3 － O －糖苷。化
合物 6 的二级碎片 m/z 285 为［M － H －162］－，即失去一个己糖，
推测为山萘酚 － 3 － O －己糖苷。化合物 7 的二级碎片 m/z 285
为［M － H －308］－，推测为山萘酚 － 3 － O －芸香糖苷。
表 1 对照品质谱测定数据
编号
No
一级质谱
［M － H］－
二级质谱
MS /MS
对照品
1 301 179，151 槲皮素
2 609 301，300，271 芦丁
3 285 255，227 山萘酚
4 179 135 咖啡酸
5 353 191，179 绿原酸
图 1 山莓叶甲醇提取物的总离子流图(A)
和检测波长 270 nm下的色谱图(B)
表 2 推测鉴定的 7 个化合物最大紫外吸收波长及质谱数据
峰号
No
保留时间
tR /min
最大紫外吸收波长
λ /maxnm
一级质谱
［M － H］－
二级质谱
MS /MS
化合物 参考文献
1 11． 96 280 577 407，289，361 花青色素# ［11］
2 16． 05 240，280，330 401a 341，179，161 咖啡酰己糖苷# ［12，10，13］
3 25． 32 240，290，335 191 176，148 东莨菪内酯＊＊ ［14，9］
4 26． 47 255，355 623 301，179，151 槲皮素 － 7 － O －鼠李糖基葡萄糖醛酸苷# ［9］
5 31． 52 235，290，340 515 323，191，161，179 二咖啡酰奎宁酸# ［10］
6 34． 37 245，280，325 447 285，284，255，227，179 山萘酚 － 3 － O －己糖苷# ［15］
7 39． 68 240，280，325 593 284，285，255，227 山萘酚 － 3 － O －芸香糖苷# ［15］
1)“＊＊”表示本植物中已报道的化合物;2)“#”表示虽未完全鉴定但未在本植物中报道的化合物;3)“a”表示［M + CH3COOH］－
4 讨论
本文采用 HPLC － MS /MS 技术初步分析了山莓叶甲醇提取
物，发现该提取物主要为黄酮苷和咖啡酰衍生物，而黄酮苷类化
合物可能是山莓叶抗腹泻作用的物质基础［3］。通过紫外光谱、主
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL． 26 NO． 2 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 2 期
要离子和碎片离子的质谱信息，对其中 7 种化合物进行了结构推
测，为更好的利用 HPLC － MS /MS技术定量分析山莓叶中黄酮苷
和咖啡酰衍生物奠定了基础。由于此方法能有效跟踪检测黄酮
苷及咖啡酰衍生物，因此可将其与其它分离手段结合，有针对性
的分离山莓叶中的化合物，减少分离的盲目性，为山莓叶资源的
开发利用提供指导。
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收稿日期:2014-10-17; 修订日期:2015-01-10
基金项目:湖北省自然科学基金(No． 2013CFA013)
作者简介:郑亚男(1988-) ，女(汉族) ，湖北宜昌人，中南民族大学药学院
在读硕士研究生，学士学位，主要从事中药药理方面的研究工作．
* 通讯作者简介:梅之南(1970-) ，男(汉族) ，湖北麻城人，中南民族大学
药学院教授，博士学位，主要从事民族药物药效物质基础研究工作．
独一味不同有效部位抗炎镇痛作用比较
郑亚男，杜文杰，尹雪霏，梅之南*
(中南民族大学药学院，湖北 武汉 430074)
摘要:目的 研究独一味的不同有效部位的镇痛、抗炎作用。方法 采用醋酸致小鼠扭体反应和热板测痛法观察不同有效
部位镇痛活性;二甲苯致耳廓肿胀法和角叉菜胶致大鼠足跖肿胀法观察不同有效部位抗炎活性。结果 环烯醚萜苷类
(400 mg /kg)能明显降低醋酸所致小鼠扭体次数，增加小鼠热板痛阈值，与模型组比较具有显著性差异(P ＜ 0． 05) ，黄酮
类和苯乙醇苷类作用较弱且与环烯醚萜苷类比较有显著性差异(P ＜ 0． 05) ;环烯醚萜苷类(400，200，100 mg /kg)能明
显抑制二甲苯引起的耳廓肿胀和角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀，与模型组比较具有显著性差异(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01) ，
黄酮类(400，200，100 mg /kg)能抑制二甲苯引起的耳廓肿胀，与模型组比较具有显著性差异(P ＜ 0． 05) ，而苯乙醇苷类
的作用较弱且与环烯醚萜苷类比较有较显著差异性(P ＜ 0． 05)。结论 独一味中环烯醚萜苷类抗炎镇痛效果较好，是独
一味的主要药效成分。
关键词:独一味; 有效部位; 抗炎; 镇痛
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 02． 011
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)02-0282-03
独一味 Lamiophlomis rotata (Benth．)kudo 是我国藏、蒙、纳
西等民族常用药材，具有止血、镇痛消肿、活血化瘀、抗菌消炎、增
强免疫力等功效［1］。作为市场上诸多止血、镇痛中成药的主药
之一，人们对它的研究较多。但大多数是对其止血作用的研究，
对各有效部位抗炎镇痛作用的比较未见报道，所以本次实验将探
究独一味药材的抗炎镇痛作用，对分离纯化得到的环烯醚萜苷
类，黄酮类，苯乙醇苷类三个有效部位分别进行抗炎、镇痛活性比
较，为今后的药效机制研究提供依据。
1 材料与仪器
1． 1 药材 独一味药材由西藏奇正藏药股份有限公司提供，由张
樱山高级工程师鉴定为唇形科独一味属独一味 Lamiophlomis ro-
tata (Benth．)kudo的干燥地上部分。
1． 2 动物 昆明种小鼠，雌雄兼用，体重 18 ～ 22 g;SD 大鼠，雄
性，体重 160 ～ 180 g。合格证号为 SCXK(鄂)2008 － 0005，均购于
湖北省实验动物研究中心。
1． 3 仪器和试剂 阿司匹林肠溶片(拜耳医药保健有限公司生
产，批号 BJ10446) ;冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司，批号
T20110818) ;二甲苯(国药集团化学试剂有限公司，批号
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL． 26 NO． 2