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中外医疗
CHINA FOREIGN MEDICAL TREATMENT 中外医疗
2008 NO.31
CHINA FOREIGN MEDICAL TREATMENT基础医学
中药治疗肝肿瘤和乙肝有很大的潜力和实用价值。我们根据肿
瘤病人和乙肝患者免疫功能低下、抗氧化能力降低的特点,采用垂盆
草提取液进行试验,对慢性乙肝及其导致的肝硬化,今后将有效抑制病
毒的药物与中草药制剂联合应用,在延缓慢性肝炎发展为肝硬化的进
程中以及降低肝细胞癌的发生率方面可望获得更为满意的临床效果。
垂盆草为景天科多年生草本植物,其提取的成分主要为三萜及黄
酮类等,有研究资料表明,垂盆草提取液中的三萜和黄酮类等成分具有
抗肝损伤的作用[1],本文旨在研究垂盆草提取液对环磷酰胺所致免疫抑
制小鼠的免疫功能及D-半乳糖(D-gal)所致急性肝损伤小鼠的抗氧化
能力的改善作用,以期发挥该药对肝病及肝癌的辅助治疗作用,并为其
临床应用进一步提供参考。
1　材料与方法
1.1　动物
ICR小鼠,体重(20±2)g,雌雄兼用,由扬州大学实验动物中心提
供,合格证为SYXK(苏)2002-0009。
药品与试剂垂盆草提取液主要为三萜类化合物(中国药科大学生
药教研室制备);环磷酰胺(上海第十二制药厂),临用前生理盐水稀释;
地塞米松;左旋咪唑:上海延安制药厂产品,批号:200802,配制成
40mg/mL的储存于4℃冰箱中备用;维生素E:RPMI1640培养基、
植物血凝素(PHA)(sigma公司);MTT[3-(4,5-dimethylthiazol-z-
yl)-2,5-diphenytetrazolium](瑞士Fluka公司);小牛血清
(newbornbovineserum,NBS);Hanks液,常规配方,临用时加
10%NBS;RPMI1640细胞培养液,临用前加Hepes2mmol﹒L-1,谷氨
酰胺0.5g﹒L-1,青霉素100U﹒mL-1,链霉素100ug﹒mL-1,10%小
牛血清(灭活),二甲基亚砜(国产分析醇);D-半乳糖(国产分析醇);超氧
化物歧化酶(SOD)测定试剂盒及丙二醛(MDA)测定试剂盒(南京聚力生
物医学工程研究所产品)。
1.2　主要仪器
UV755型紫外分光光度计(上海第三分析仪器厂);电热恒温水浴
锅(北京医疗设备厂);D60-2F电动搅拌机(江苏保庆分析仪器厂);CO2
培养箱(SANYO);酶标仪(DG5031型,华东电子管厂);Olympus生物显
微镜。
1.3　对小鼠淋巴细胞增殖和吞噬功能的影响
对淋巴细胞增殖的影响,取体重(20±2)gICR小鼠30只,随机分为
5组,每组6只,雌雄各半,即空白对照组(NS20mL﹒kg-1,ig,每天1
次);阳性对照组(左旋咪唑4mg﹒kg-1,每天1次);垂盆草提取液Ⅰ组
(17.5mg﹒k-1,ig,每天1次);垂盆草提取液Ⅱ组(35mg﹒kg-1,ig,
每天1次);环磷酰胺组(100mg﹒k-1,ig,每天1次×3d)。连续给药
10d,给药后第6天,除空白对照组外,均皮下注射环磷酰胺100mg﹒
kg-1,于第10天末次给药后2h处死小鼠,取出脾脏制备脾细胞悬液(2
垂盆草提取液对小鼠免疫和抗氧化功能的研究
孙卫东1 胡海涛1 钱山青1 戴小军2 王德俊2
(1.扬州市中医院; 2.扬州大学医学院 江苏扬州 225001)
【摘要】目的 研究垂盆草提取液对实验性急性肝损伤小鼠免疫和抗氧化功能的影响。方法 通过注射环磷酰胺(CP)抑制小鼠的
免疫细胞,达到降低淋巴细胞增殖水平和网状内皮系统的吞噬功能,观察药物对小鼠免疫功能的调节作用;给小鼠注射D-半乳糖(D-gal),
造成实验性急性肝损伤模型,测定血清及肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)浓度,观察垂盆草提取液对小鼠抗氧化能力的
影响。 结果 垂盆草提取液能明显促进免疫抑制状态小鼠的淋巴细胞增殖及网状内皮系统的吞噬功能,垂盆草提取液对D-gal所致小
鼠急性肝损伤模型具有提高SOD活性和降低MDA浓度的作用。 结论 垂盆草提取液对免疫功能低下的小鼠具有增强作用,同时能提高
实验性肝损伤小鼠的抗氧化能力。
【关键词】垂盆草提取液 免疫调节 抗氧化功能
【中图分类号】R949 【文献标识码】A 【文章编号】1674-0742(2008)11(a)-0019-03
Research of Sedum Sarmentosum Bunge Exract on Immune
and Antioxidative Functions in Mice
【Abstract】 Objective To investigate the immune and antioxidative effect of Sedum sarmentosum Bunge Exract on experimental acute
hepatic damage in mice. Methods I jection of cyclophosphamide(Cy) inhibited the immune cellular activity of mice,and phagocytic
function of the reticuloendothelial and proliferation of lymphocytes were depressed.The immunologic effects of the drugs was observed.
Superoxide dismetase(SOD) and malondialdehyde(MDA) of blood and liver were recorded in mice with injection of D-galactosidase
induced acute hepatic damage,The antioxidative effects of the drugs was observed. Results Sedum sarmentosum Bunge Exract can
enhance the proliferation of lymphocytes and the phagocytosis of the reticuloendothelial in mice with immunosuppression.And can
enhance SOD activity,but lowered MDA concentrations. C nclusion Sedum sarm osum Bunge Exract can enhance immuofuctions of
immunosuppressed mice and increase antioxidative functions of mice with acute hepatic damage.
【Key Words】Se um sarmentosum Bunge Exract;Immune Adjest;Antioxidative function
DOI:10.16662/j.cnki.1674-0742.2008.31.025
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×106个),取10μL加入96孔细胞培养板/孔,加入0.5%PHA100μ
L,放置37℃5%CO2孵育箱培养48h,弃上清加入0.5%MTT溶液100
μL振荡15min,再次放入37℃5%CO2孵育箱培养48h,每孔加二甲亚
砜150μL振荡5min,用酶标仪630nm处检测OD值。PHA体内法刺
激小鼠淋巴细胞转化实验[1]。
1.4　对小鼠细胞吞噬功能及胸指、脾指的影响
取体重(20±2)gICR小鼠50只,随机分为5组,每组10只,雌雄
各半,对照组igNS20mL﹒kg-1,阳性对照组4mg﹒kg-1,试验组分别
垂盆草提取液17.5mg﹒kg-1、35mg﹒kg-1,地塞米松组10mg﹒
kg-1×5d,其余各组连续8d,每天1次,第8天给药30min后每鼠尾静
脉注射1:5稀释的印度墨水0.1mL/10g,于2min、20min分别从眼眶
静脉取血20μL,加入2mL0.1%NaCO3溶液中摇匀,用UV755B型分
光光度计在680nm下测光密度,计算出廓清指数K,此后取小鼠肝、
脾、胸腺称重计算吞噬活性α,并计算脾指数及胸腺指数[2］。
1.5　对D-gal所致的急性肝损伤小鼠血清及肝脏中SOD活性及
MDA含量的影响
动物分组:选用健康ICR小鼠60只,体重(20±2)g,雌雄=1/1,随
机分为5组,每组12只,分别为:(1)对照组:NS20mL﹒kg-1,ig,每天
1次;(2)肝损伤组:NS20mL﹒kg-1,ig,每天1次;(3)阳性组:维生素E,
50mg﹒kg-1,每天1次;(4)垂盆草提取液Ⅰ组:17.5mg﹒kg-1,ig,每天1次;
(5)垂盆草提取液Ⅱ组:35mg﹒kg-1,ig,每天1次。
造模及给药:上述各组除对照组小鼠灌胃等量NS外,其余各组均
按上述分组ig给药,连续7d。第6天给药后2h,除对照组外每组小鼠
均腹腔注射D-氨基半乳糖(在无菌条件下,用生理盐水配制浓度为5g
﹒L-1的D-gal,以50mg﹒kg-1﹒d-1的剂量,造成小鼠急性肝损伤
模型。于末次给药1h后,摘眼球取血,制备血清;并立即处死动物,取
出肝脏,冰NS冲洗,用滤纸吸干后称重,在冰浴条件下,用NS制备
10%匀浆,离心3500r﹒min-1,30min,取上清液,用SOD测定试剂盒
方法测定血清及肝组织匀浆SOD活性,用MDA测定试剂盒方法测定
血清及肝组织匀浆MDA含量[3]。
1.6　数据处理
所有数据以均数±标准差(±s)表示,采用Excel统计软件进行
数据分析,统计方法采用方差分析(F检验)及t检验。
2　结果
2.1　对小鼠淋巴细胞增殖和吞噬功能的影响
对淋巴细胞增殖的影响:结果表明,垂盆草提取液大剂量组对小鼠
淋巴细胞增殖有明显的增加作用,见表1。
表1　垂盆草提取液对小鼠淋巴细胞增殖的影响( ±s,n=10)
注:与NS对照组比较，*P<0.05;**P<0.01
表3　垂盆草提取液对小鼠血清和肝脏中SOD活性及MDA含量的影响( ±s,n=12)
表2　垂盆草提取液对小鼠细胞吞噬功能及胸、脾指数的影响( ±s，n=10)
注：与生理盐水组比较,*P<0.01；**P<0.001
注：与D-gal组比较,*P<0.05;**P<0.01
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对小鼠细胞吞噬功能及胸指、脾指的影响:结果表明,垂盆草提
取液高剂量组对小鼠细胞吞噬功能有明显的增强作用,见表2。
2.2　对D-gal所致的急性肝损伤小鼠血清及肝脏中SOD活性及
MDA含量的影响
D-gal肝损伤组与NS对照组比较血清及肝脏SOD活性明显降低
(P<0.05),肝脏中MDA含量显著升高(P<0.01),血清中MDA含量变
化不显著,而阳性对照组及垂盆草提取液不同剂量组与肝损伤组比较
均能提高血清及肝脏SOD活性(P<0.05),显著降低肝脏MDA含量(P
<0.01),这些结果提示垂盆草提取液可能通过抑制体内脂质过氧化而
发挥抗肝损伤作用,见表3。
3　讨论
环磷酰胺可以损伤机体,抑制和损害造血组织及免疫活性细胞,本
试验用环磷酰胺、和地塞米松可以抑制机体的免疫功能,还可引起脾
脏和胸腺的损伤,使胸腺淋巴细胞明显减少,脾和胸腺指数降低,实验
结果表明,中药垂盆草提取液具有增强免疫抑制状态下的小鼠的淋巴
细胞增殖功能,具有保护脾脏和胸腺等免疫器官、促进受损免疫器官
的恢复,对小鼠细胞吞噬功能有明显的增强作用,该作用可增强机体免
疫功能、在肿瘤治疗过程中发挥辅助作用[4]。
D-氨基半乳糖所致肝损伤模型的肝组织病理学特征与人类病毒
性肝炎极为相似,且有极好的重现性。D-氨基半乳糖通过在细胞内与
尿苷二磷酸(UDP)结合形成复合物,致使UDP耗竭,从而导致RNA和
蛋白质的合成障碍,最终导致肝细胞坏死。本研究表明,灌胃给予垂盆
草提取液能显著提高小鼠肝组织和血清中抗氧化酶活性,增强清除自
由基的能力,抑制脂质过氧化,减少脂褐素类物质在肝组织的堆积,从
而起到保护肝脏等组织,对抗半乳糖所致的损伤作用。综上所述,垂
盆草提取液可增强小鼠的抗氧化功能,改善,增强其免疫功能,特别当
免疫功能处于抑制状态时有显著的增强作用,是一种具有应用价值的
新药[5]。另一方面,D-氨基半乳糖引起肝细胞内Ca2+增多和Mg2+减
少,Ca2+增多会抑制线粒体的呼吸功能,激活磷脂酶,分解膜磷脂,破坏
溶酶体膜,使蛋白水解酶释放,并使黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化
酶,加速氧化自由基产生,从而使肝损伤加速。同时活性基团可阻止或
减少肝脏脂质过氧化物丙二醛(MDA)的生成,另外活泼的双键很容易
与自由基发生加成反应,这样就减少其对肝脏的损害,增强解毒作用,
还可促进肝细胞再生,使坏死区迅速修复。总之,抗肝细胞损伤作用的
机理一方面是提高细胞色素P450系统,使肝脏对毒物的代谢增强而起
到保护肝脏作用;另一方面还具有抗脂质过氧化物对细胞膜损伤的能
力。因此垂盆草提取液是治疗急性肝炎、延缓慢性肝炎发展为肝硬化
及降低肝细胞癌发生率的有效药物。
参考文献
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【收稿日期】2008-09-08
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7、图片要清晰，注明图号。