全 文 ：绢蒿浸液对雏鸡免疫功能的影响
段海丰，剡根强，王静梅，王荣，刑伟元，万鹏
(石河子大学动物科技学院，兽医免疫学实验室，新疆石河子 832000)
摘要:为探讨新疆石河子南山地区牧草绢蒿对雏鸡 T 淋巴细胞增殖与巨噬细胞吞噬活性的影响，试验采用称重法、MTT
法、菌落计数法、ANAE染色法及攻毒试验分别对小鼠的体重、T淋巴细胞增殖、T淋巴细胞数量、腹腔巨噬细胞吞噬功能及发
病率进行研究。结果表明，绢蒿浸液能不同程度的提高雏鸡体重、T淋巴细胞增殖能力及 T淋巴细胞 ANAE阳性率，降低吞噬
细胞吞噬性，减少感染大肠杆菌雏鸡的发病率，提高抗感染能力。提示，绢蒿浸液对正常雏鸡具有双向免疫调节作用。
关键词:绢蒿浸液;淋巴细胞;免疫调节;雏鸡
中图分类号:S854． 4+3 文献标识码:A 文章编号:1671-7236(2013)09-0151-03
绢蒿(Seriphidium(Bess)Poljak)系菊科(Com-
positae)植物，是 Poljakv 于 1961 年从原蒿属(Arte-
misia)中分出来的一个具有两性同型花的头状花序
属，全球约 130 余种，在欧亚与北美洲温带荒漠、戈
壁、草原地区广泛分布(DiTommaso 等，1989;Pandey
等，1992;Stebbins，1971;Karen 等，2002) ，蒿类半灌
木是新疆冷季草场家畜充饥、春季恢复体力、秋季抓
膘，富含粗蛋白质、脂肪等营养成分的一类牧草。研
究结果表明，青蒿植物含有丰富的萜类化合物，芳香
族化合物，醇、醛、酮类化合物，长链脂肪烃等成分
(滑艳等，2003;肖黎辉等，2011) ，与绢蒿成分相似;
青蒿主要成分青蒿素是中国第一个被 WHO认可按
西药研究标准开发的高效抗疟药，且具有免疫调节
作用(李覃等，2011)。青蒿素具有有效诱导淋巴细
胞增殖转化，调节巨噬细胞的吞噬功能等作用(Xu，
2003;舒贝等，2005;Wenisch 等，1997) ，但有关绢蒿
对机体免疫调节的作用鲜有报道。本试验用绢蒿浸
液喂服雏鸡，通过测定雏鸡 T 淋巴细胞增殖、巨噬
细胞吞噬活性、体重变化及对大肠杆菌的抗感染能
力，探索绢蒿对雏鸡免疫功能的影响，为研发新型植
物免疫调节剂奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 材料 1 日龄青花杂交肉雏鸡购自孵化市场;
收稿日期:2013-01-10
作者简介:段海丰(1987－) ，男，新疆人，硕士，研究方向:兽医技
术服务与指导。
通信作者:剡根强(1958－) ，男，甘肃人，博士生导师，教授，从
事动 物 传 染 病 诊 断 与 防 治 研 究。 E-mail:
1203053597@ qq． com
基金项目:石 河 子 大 学 科 学 技 术 研 究 发 展 计 划 项 目
(RCGB201105)。
6 月季绢蒿茎叶采自石河子南山;ConA 购自 Sigma
公司;胎牛血清购自北京鼎国昌盛生物有限责任公
司;鸡致病性大肠杆菌(O2)由石河子大学兽医免疫
学实验室分离并保存。RPMI-1640 购自 Gibco 公
司;酶标仪(power wave XS2)购自 Bio-Tek公司。
1． 2 方法
1． 2． 1 绢蒿浸液的制备 取绢蒿干草，经切片机粗
粉，粉碎机细粉后，于不锈钢锅中煎煮(陈奇，
1993)。
1． 2． 2 试验分组 试验分为 3 组，低、高浓度组分
别按 300 和 600 mg /kg 体重剂量给药，正常饮水的
为空白组。3 ～ 21 日龄，各组雏鸡均以相同方式饲
喂雏鸡精料，21 日龄之后改为雏鸡颗粒料。
1． 2． 3 用药方法与用药程序 用药方法:自由饮
水，每只鸡按日龄每天饮水量 2 mL，逐日增加。用
药程序:自 3 日龄开始，每天一次性投药，连用 7 d，
间隔 7 d后再用 7 d。分别在 17 和 26 日龄对雏鸡
各项免疫指标进行检测。
1． 2． 4 绢蒿浸液对雏鸡体重的影响 每隔 3 d 对
分组雏鸡进行称重。
1． 2． 5 T淋巴细胞转化试验 采用 ConA作为刺激
剂。制备脾淋巴细胞悬液，加入到 96 孔培养板，100
μL /孔，然后加入终浓度为 5 μg /mL的 ConA液，100
μL /孔，每个样设 3 个重复，且重复做 4 块细胞培养
板。将细胞板置 37 ℃、5% CO2 培养箱分别培养
24、48、72 和 96 h。培养过程中隔 3 ～ 8 h 振荡培养
板 1 次。MTT比色法检测细胞增殖情况，酶标仪测
D570 nm 值(刘民等，1999;郭曦等，2011)。
1． 2． 6 巨噬细胞吞噬功能检测试验 提前 3 d 腹
腔注射淀粉溶液刺激，参照 Maródi等(1983)介绍的
微量菌落计数方法进行计数。
·151·中国畜牧兽医 2013 年第 40 卷第 9 期 生理生化
1． 2． 7 绢蒿对 T 淋巴细胞数量的影响 心脏采集
雏鸡抗凝血，酸性 α-醋酸萘酯酶(ANAE)染色法染
色(朱辛为等，2003) ，油镜下计数。
1． 2． 8 大肠杆菌感染试验 35日龄点眼滴鼻感染大肠
杆菌，30亿活菌/只，观察并记录发病情况，回收细菌。
1． 2． 9 统计学处理 所有数据经 SPSS 13． 0 统计
学处理，数据以平均值±标准差表示，组间差异采用
t检验(朱辛为等，2003)。
2 结果与分析
2． 1 绢蒿浸液对雏鸡体重的影响 同一时期内雏
鸡体重比较结果显示，12 日龄开始，空白组、低浓度
组、高浓度组体重依次升高;高浓度组 9 和 18 日龄
体重均显著高于空白组(P＜0． 05) ，且 12、15、21、
24、27 和 30 日龄时体重均极显著高于空白组(P＜0．
01) ;低浓度组在 9 和 30 日龄体重均显著高于空白
组(P＜0． 05) ，且 12 日龄时体重极显著高于空白组
(P＜0． 01) (表 1)。
表 1 雏鸡体重增长情况(g)
日龄 空白组 低浓度组 高浓度组
3 46． 5±3． 719a 44． 8±4． 341a 43． 6±4． 789a
6 66． 4±4． 427a 65． 2±4． 185a 66． 6±3． 658a
9 96． 8±4． 733a 105． 3±5． 208b 104． 9±5． 109b
12 137． 0±5． 793Aa 144． 6±5． 441Bb 151． 6±4． 377Cc
15 198． 0±8． 327Aa 205． 0±7． 832ABa 214． 7±9． 006Bb
18 298． 1±18． 218a 306． 2±24． 408ab 320． 0±23． 022b
21 373． 6±21． 803Aa 383． 8±18． 978ABa 401． 5±10． 565Bb
24 443． 4±22． 979Aa 456． 1±17． 355ABab 472． 6±18． 656Bb
27 516． 5±18． 069Aa 531． 3±24． 111ABab 546． 6±25． 361Bb
30 590． 0±14． 252Aa 607． 7±14． 833ABb 623． 1±22． 053Bb
注:同行数据肩标不同小写字母者表示差异显著(P＜0． 05) ;肩
标不同大写字母者表示差异极显著(P＜0． 01) ;肩标相同字
母表示差异不显著(P＞0． 05)。
2． 2 第 1 次 17 日龄雏鸡 T 淋巴细胞增殖情况 3
组雏鸡的 T 淋巴细胞均在 48 h 开始增殖，且 108 h
增殖程度达到最大;3 个时间段各组间 T 淋巴细胞
增殖程度相比差异均不显著(P＞0． 05) (图 1)。
2． 3 第 2 次 26 日龄雏鸡 T 淋巴细胞增殖情况 3
个时间段各组间 T 淋巴细胞增殖程度比较结果见
图 2。由图 2 可知，高浓度组 T 淋巴细胞增殖程度
均高于空白组，且在 72 h差异显著(P＜0． 05) ;低浓
度组 T淋巴细胞增殖程度均高于空白组，但差异均
不显著(P＞0． 05)。
2． 4 雏鸡 T 淋巴细胞数量变化 17 和 26 日龄 2
次组间 T淋巴细胞数量比较结果见图 3。由图 3 可
知，2 次检测中，高浓度组雏鸡 T淋巴细胞 ANAE 阳
性率均极显著高于空白组(P＜0． 01) ;在第 1 次检测
中，低浓度组 ANAE 阳性率显著高于空白组(P＜0．
05) ，而在第 2 次检测中，低浓度组 ANAE 阳性率极
显著高于空白组 (P＜0． 01)。
图 1 第 1 次雏鸡淋巴细胞增殖情况
注:同一时间段内，与空白组相比，肩标不同小写字母表示差异
显著(P＜0． 05) ;肩标不同大写字母表示差异极显著(P＜
0． 01) ;肩标相同字母或无字母标注表示差异不显著(P＞
0． 05)。下同。
图 2 第 2 次雏鸡淋巴细胞增殖情况
图 3 雏鸡 T淋巴细胞数量情况
2． 5 雏鸡吞噬细胞吞噬细菌情况 17 和 26 日龄 2
次组间巨噬细胞吞噬细菌能力比较结果见图 4。由
图 4 可知，17 日龄时，低浓度组巨噬细胞吞噬能力
稍高于空白组，但差异不显著(P＞0． 05) ;高浓度组
巨噬细胞吞噬能力略低于空白组，但差异不显
著(P＞0． 05)。26 日龄时，3 组巨噬细胞吞噬能力依
次降低，差异均不显著(P＞0． 05)。
·251· 生理生化 中国畜牧兽医 2013 年第 40 卷第 9 期
图 4 雏鸡吞噬细胞的吞噬细菌情况
2． 6 大肠杆菌攻毒结果 各组雏鸡在适量浓度大
肠杆菌攻毒后第 2 天开始陆续出现发病症状，临床
表现为:精神萎靡、下痢、采食及饮水量明显减少、羽
毛蓬松。剖检病鸡可见腹腔内有少量纤维素性渗出
物，腹膜粗 糙。各 组 发 病 率 分 别 为:高 浓 度
组 14． 3%，低浓度组 20%，空白组 30%。1 周后病
鸡相继恢复正常，无死亡现象。比较结果发现，绢蒿
组雏鸡对大肠杆菌的抗感染能力高于空白组，且高
浓度组高于低浓度组。
3 讨论
不同浓度绢蒿浸液对雏鸡体重有不同程度的提
高，且高浓度组高于低浓度组，表明绢蒿能提高肉鸡
采食量、日增重和饲料转化率，这与温朗聪等
(2000)研究结果相似，为今后进一步研究绢蒿作为
一种新型饲料添加剂提供试验基础。
活化的 T 淋巴细胞在致有丝分裂原的刺激下
特异性的细胞克隆得到扩增，且大大增强了对特定
抗原的免疫应答(唐雪明等，1998)。绢蒿浸液对 T
细胞的转化能力具有上调作用，表明绢蒿具有提高
机体细胞免疫的作用。ANAE是成熟 T淋巴细胞的
标志。在一定条件下 ANAE 阳性率反映 T 淋巴细
胞数量上的变化，进而初步反映机体细胞免疫机能
的高低和评价抗病力的强弱(刘玉斌等，1989)。绢
蒿浸液能提高 T细胞的数量，表明绢蒿具有上调机
体细胞免疫的作用。
绢蒿浸液对巨噬细胞吞噬功能具有下调作用。
巨噬细胞在炎性反应过程中分泌不同的细胞因子
(IL-1、IL-6、IL-10、TNF)和趋化因子等，间接或直接
地参与各种炎性反应过程。绢蒿浸液对雏鸡的巨噬
细胞具有下调作用，表明绢蒿制剂可能具有缓解炎
性反应的作用。不同剂量绢蒿浸液对雏鸡免疫细胞
的作用结果有差异，这与多数免疫调节剂的特性相
似，表明绢蒿对机体免疫功能的影响具有剂量依赖
性和细胞选择性。
攻毒试验中，发病雏鸡表现临床症状但未见死
亡，可能与感染大肠杆菌的菌落数较低有关。绢蒿
组雏鸡抗感染能力强于空白组，表明绢蒿作为一种
饲料添加剂，能提高雏鸡抗感染能力，为今后绢蒿的
临床运用提供了理论依据。
参 考 文 献
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·351·中国畜牧兽医 2013 年第 40 卷第 9 期 生理生化
从黄芩毛状根中提取、纯化黄芩苷的研究
施春阳，齐香君，钱卫东
(陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西西安 710021)
摘要:本试验以黄芩苷质量浓度为指标，考察了影响大孔吸附树脂对黄芩毛状根中黄芩苷富集效果的相关因素，并利用
硅胶柱层析对其进行纯化。结果显示，LX-68 型大孔吸附树脂的富集效果最好，较优工艺条件为:上样浓度为 8． 69 g /L，吸附
流速为 6 BV /h，上样体积为 16 BV，树脂床径高比为 1 ∶ 14;洗脱剂为 70%乙醇，洗脱流速为 6 BV /h，用量为 10 BV;硅胶柱层
析洗脱剂条件为氯仿 ∶ 乙酸乙酯 ∶ 甲醇 ∶ 甲酸(7 ∶ 3 ∶ 1． 5 ∶ 0． 5)。在所确定的工艺条件下，该树脂可有效地提取黄芩毛状
根中的黄芩苷，黄芩苷吸附量达 131． 2 mg /g，黄芩苷的回收率超过 69． 1%，经纯化后黄芩苷纯度为 98． 45%。
关键词:黄芩苷;黄芩毛状根;大孔吸附树脂;纯化
中图分类号:S853． 7 文献标识码:A 文章编号:1671-7236(2013)09-0154-04
黄芩苷(Baicalin)是中国传统中药黄芩(Scutel-
laria baicalensis Georgi)的主要有效成分，具有抗氧
化、抗菌消炎、抗病毒和止血安胎等药理作用(国家
药典委员会，2005;胡世林等，2001;林红等，2009;延
卫东等，2002) ，在人药和兽药中应用广泛。黄芩苷
可有效防制猪支原体病、大肠杆菌病、沙门氏菌病等
细菌感染，也可有效促进母猪生殖系统和仔猪肠道
功能的改善。市场对黄芩苷和黄芩药材的需求不断
上涨，但其资源长期遭受过度开发和破坏，已出现资
源紧缺、供不应求的问题。齐香君等(2009，2010)
收稿日期:2013-02-04
作者简介:施春阳(1982－) ，男，浙江人，硕士，工程师，研究方
向:中药新资源、天然产物提取与修饰。
基金项目:国家自然科学基金青年项目(31100040) ;西安市未
央区科技计划项目(201310) ;陕西省教育厅专项科
研计划项目(11JK0624)。
研究结果表明，黄芩毛状根培养能有效积累主要成
分———黄芩苷，其质量浓度甚至超过了黄芩中药材。
因此，以黄芩毛状根为原料，利用大孔吸附树脂和硅
胶柱层析从中提取及纯化黄芩苷，可为黄芩药用成
分的提取及资源开发与保护开辟一条新途径。
1 材料与方法
1． 1 材料 黄芩毛状根经改良的液体培养基在通
氧和黑暗的条件下培养约 50 d，取出，蒸馏水洗涤残
留培养液数次，70 ℃烘至恒重，即得黄芩毛状根干
品。黄芩苷对照品(110715－201016)购自中国药品
生物制品检定所;各种树脂购自西安某科技有限公
司;柱层析硅胶 G 购自青岛某化工厂;其他试剂均
为分析纯。UV-9100 紫外可见分光光度计购自北京
瑞利;PHS-3C 酸度计购自上海精科;高效液相色谱
仪购自 Waters公司;AJ5800 电子输液泵购自上海安
洁电子。
櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅
Effects of the Steep of Seriphidium on Immunologic Function of Chicks
DUAN Hai-feng，YAN Gen-qiang，WANG Jing-mei，WANG Rong，XING Wei-yuan，WAN Peng
(College of Animal Science and Technology，Shihezi University，Shihezi 832000，China)
Abstract:To investigate the effects of Seriphidium in the Nanshan area，Shihezi，Xinjiang province on immunologic function of
chicks，the influence of the weight was studied by weighing method，the proliferation of T lymphocyte was studied by MTT method，the
phagocytic function of peritoneal macrophages was studied by colony counting method，the number of T-lymphocyte of peripheral blood
was studied by ANAE method，the death rate in chicks was studied by Escherichia coli tapping poison． The steep of Seriphidium could
levelly improve the chickens’weight，proliferation abilities of T lymphocyte and positive rates of T lymphocytes ANAE，and decrease
phagoeytosis ability to bacterium and the incidence of chicks to E． coli． The results showed that the steep of Seriphidium depended on
its doses had a two-way effect on the immunologic function of chicks．
Key words:steep of Seriphidium;lymphocyte;immunological regulation;chicks
·451· 生理生化 中国畜牧兽医 2013 年第 40 卷第 9 期