全 文 ：［收稿日期］ 20140115(016)
［基金项目］ NSFC-河南人才培养联合基金(U1304826)
［第一作者］ 杨浩，本科，实验师，从事药物分析及中药分析，
Tel:0371-23880680，E-mail:yanghao@ henu． edu． cn
［通讯作者］ * 蒲晓辉，博士，副教授，从事药物新剂型及其质
量研究工作，Tel:0371-23880680，E-mail:pgh425@
163． com
HPLC等度洗脱法快速测定瓦松中槲皮素和山萘素的含量
杨浩，赵辉，蒲晓辉* ，武晓红，袁琦
( 河南大学药学院，河南 开封 475004)
［摘要］ 目的:建立用高效液相色谱法同时测定中药瓦松中槲皮素和山萘素的方法。方法:采用 Thermo C18(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)色谱柱，流动相甲醇-醋酸盐缓冲液(53∶ 47)，体积流量 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 360 nm，进样体积
为 20 μL。结果:槲皮素和山萘素分别在 3. 92 ～ 11. 76 mg·L －1(r = 0. 999 8)，10. 03 ～ 30. 09 mg·L －1(r = 0. 999 9)线性关系良
好。平均回收率分别为 99. 85%，100. 07%;ＲSD(n = 9)分别为 0. 78%，1. 05%。结论:该方法简便快速，结果准确，重复性好，
可用于瓦松药材的质量控制。
［关键词］ 瓦松;槲皮素;山萘素
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)12-0099-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014120099
Determination of Quercetin and Kaempferol in Herba Orostachgdis Fimbriati
by HPLC Isocratic Elution
YANG Hao，ZHAO Hui，PU Xiao-hui* ，WU Xiao-hong，YUAN Qi
(Pharmaceutical College of Henan University，Kaifeng 475004，China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method for determination quercetin，kaempferol in Herba
Orostachgdis Fimbriati． Method:The separation was performed on Thermo C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)
column． The mobile phase consisted of methanol-acetate buffer solution (53∶ 47)with the flow rate of 1. 0 mL·
min －1，the column temperature was 30 ℃，and the detection wavelength was 360 nm，sample size was 20 μL．
Ｒesult:The quercetin，kaempferol were linear in the ranges of 3. 92-11. 76 mg·L －1 (r = 0. 999 8)，10. 03-
30. 09 mg·L －1 (r = 0. 999 9)，respectively． The average recoveries were 99. 85%，100. 07% (n = 9) ，
respectively． ＲSDs were 0. 78%，1. 05%，respectively． Conclusion:The method is simple，accurate and
reproducible，and can be used for the quality control of Herba Orostachgdis Fimbriati．
［Key words］ Herba Orostachgdis Fimbriati;quercetin;kaempferol
瓦松为景天科植物，全国各地均有分布。《新
修本草》描述瓦松气微、味酸，具有清热解毒、凉血
止血、利湿、消肿等功效，用于血痢、疟疾、痔疮、湿
疹、痈毒、便血，疮口久不愈合等症［1］。现代药理研
究表明，该植物具有抗癌、抗炎、抗菌、强心、镇痛、抗
病毒和免疫调节等作用［2-3］。瓦松中富含黄酮类化
合物，槲皮素、山萘素为其主要活性成分［4］，近年来
研究发现槲皮素对乳腺癌、结肠癌、肝癌及肺癌等多
种恶性肿瘤具有良好的抗癌功效［5-7］。2010 年版
《中国药典》一部在测定瓦松中槲皮素和山萘素的
含量时，由于在提取的过程中加入了 25%的盐酸溶
液［8］，使得供试品溶液的酸度较大，本实验探讨了
多种提取过程，流动相采用甲醇-醋酸盐缓冲溶液，
以减少对色谱柱的损伤。该方法为瓦松药材的质量
控制提供了一定的依据。
·99·
第 20 卷第 12 期
2014 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 12
Jun．，2014
1 材料
1. 1 仪器 Agilent 1200 系列高效液相色谱仪(美
国 Agilent 公司)，BP211D 型电子天平 (德国
Sartorius公司)，UV-1600 型紫外-可见分光光度计
(北京瑞利分析仪器公司)。
1. 2 试药 槲皮素(批号 100081-200907)，山萘素
(批号 110861-200304)对照品购自中国食品药品检
定研究院;甲醇为色谱纯，娃哈哈纯净水，盐酸、醋酸
铵均为分析纯，所有溶剂浓度均为体积比。瓦松
(批号 120106，购于精华制药亳州康普有限公司)，
经河南大学药学院中药教研室鉴定为景天科瓦松属
植物瓦松 Orostachysfimbriatus(Turcz．)Berg．。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Thermo ODS 色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm);流动相甲醇-醋酸盐缓冲液
(53∶ 47)，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长360 nm，柱
温 30 ℃，进样体积 20 μL。按照此色谱条件进行测
定，结果槲皮素和山萘素的理论塔板数均不低于
3 500，分离度、对称因子均符合要求。结果见图 1。
A. 混合对照品;B. 样品溶液;1. 槲皮素;2. 山萘素
图 1 瓦松 HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 取槲皮素、山萘素对照品
适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每 1
mL含槲皮素 98. 0 μg、山萘素 250. 8 μg的对照品混
合溶液，即得。
2. 3 供试品溶液的制备 瓦松药材研细，过 30 目
筛。取约 1 g，精密称定，置 250 mL 烧瓶中，加入含
5%盐酸的 80%甲醇溶液适量，回流提取 1 h，滤过，
滤液挥干，加水适量，用乙酸乙酯萃取 3 次，合并有
机相，用水 30 mL洗涤，弃去水液，挥干有机相，用甲
醇定容至 50 mL。即得。
2. 4 线性关系考察 分别精密量取对照品混合溶
液，用甲醇定量稀释至槲皮素 3. 92，5. 88，7. 84，
9. 80，11. 76 mg·L －1，山萘素 10. 032，15. 048，
20. 064，25. 08，30. 096 mg·L －1，注入高效液相色谱
仪进行测定，记录峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，
对照品浓度 X(mg·L －1)为横坐标进行线性回归，槲
皮素和山萘素的回归方程分别为 Y = 79. 923 X +
36. 02，(r = 0. 999 8) ;Y = 86. 804X + 35. 56(r =
0. 999 9)。结果表明槲皮素在 3. 92 ～ 11. 76 mg·L －1，
山萘素在 10. 03 ～ 30. 09 mg·L －1 呈良好的线性
关系。
2. 5 精密度试验 取对照品混合溶液(槲皮素
7. 84 mg·L －1，山萘素 20. 064 mg·L －1)，重复进样 5
次，按 2. 1 项下色谱条件测定，结果槲皮素和山萘素
峰面积的 ＲSD分别为 0. 6%，0. 27%。
2. 6 重复性试验 取样品适量，按 2. 3 项下的方法
平行制备 6 份供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件测
定，结果槲皮素和山萘素含量的 ＲSD分别为 1. 3%，
1. 3%。
2. 7 稳定性试验 取样品适量，按 2. 3 项下的方法
制备供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，12 h 进行测
定，结果槲皮素、山萘素的峰面积的 ＲSD 分别为
1. 14%，1. 32%，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
2. 8 加样回收试验 取已知含量的样品约 0. 5 g，
精密称定，精密加入不同浓度的对照品混合溶液各
3 份，按 2. 3 项下供试品溶液制备方法制备 9 份样
品，按 2. 1 项下色谱条件测定，计算回收率，结果见
表 1。
2. 9 样品测定 取样品约 1 g，精密称定，按 2. 3 项
下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进行
测定，记录色谱图，计算槲皮素、山萘素的质量分数
分别为 0. 284，0. 803 mg·g －1。
3 讨论
在 190 ～ 400 nm 波长内，分别对槲皮素和山萘
素对照品进行扫描，结果两者在 270，360 nm处都有
较大吸收。通过对两波长下的高效液相色谱图比较，
发现在 360 nm处槲皮素和山萘素色谱峰分离良好，
且灵敏度较高，故选择 360 nm作为检测波长。
为了降低样品溶液的酸度探讨了不同的提取方
法，方法一:用含 5%盐酸的 80%甲醇溶液，回流提
取，旋转蒸干，乙酸乙酯萃取，旋转蒸干，甲醇定容;
方法二:纯甲醇回流提取，旋转蒸干，用 20%的盐酸
回流，冷却，石油醚萃取，旋转蒸干，甲醇定容［9］;方
·001·
第 20 卷第 12 期
2014 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 12
Jun．，2014
表 1 瓦松中两种成分的加样回收率试验
成分
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
槲皮素 0. 142 6 0. 113 3 0. 254 9 99. 15 99. 85 0. 78
0. 142 5 0. 113 3 0. 256 8 100. 85
0. 142 5 0. 113 3 0. 255 8 100. 00
0. 142 2 0. 141 6 0. 281 9 99. 36
0. 142 1 0. 141 6 0. 285 5 101. 27
0. 142 2 0. 141 6 0. 283 8 11. 00
0. 142 8 0. 169 9 0. 312 3 99. 77
0. 142 4 0. 169 9 0. 310 5 98. 92
0. 142 7 0. 169 9 0. 311 5 99. 36
山萘素 0. 403 4 0. 313 1 0. 720 3 101. 20 100. 07 1. 05
0. 403 0 0. 313 1 0. 716 9 100. 25
0. 403 0 0. 313 1 0. 713 9 99. 30
0. 402 2 0. 391 4 0. 800 3 101. 70
0. 402 0 0. 391 4 0. 789 3 98. 96
0. 402 2 0. 391 4 0. 796 3 100. 70
0. 404 0 0. 469 7 0. 872 2 99. 68
0. 402 9 0. 469 7 0. 874 0 100. 30
0. 403 7 0. 469 7 0. 866 4 98. 50
法三:65%的甲醇回流提取，浓缩定容，续滤液加
4. 0 mol·L －1的盐酸 80 ℃水浴回流提取，冷却［10］，乙
酸乙酯萃取，旋转蒸干，甲醇定容;方法四:80%的甲
醇回流提取，续滤液加 25%的盐酸 85 ℃水浴水解，
冷却［11］，乙酸乙酯萃取，旋转蒸干，甲醇定容;方法
五:甲醇-醋酸(40∶ 10)混合溶液回流提取，过滤，甲
醇定容;方法六:甲醇回流提取，旋转蒸干，再用
25%的盐酸回流，旋转蒸干，甲醇定容。以槲皮素和
山萘素峰面积为测定指标，经比较方法一的峰面积
最大，峰形较好，无干扰峰，且保留时间适中，故本文
采用方法一制备供试品溶液。
本试验试用了多种系统流动相进行色谱图比
较，如甲醇-醋酸盐缓冲溶液(53∶ 47)，(50 ∶ 50) ，
(55∶ 45) ;甲醇-0. 2%磷酸溶液(55 ∶ 45)［11］;甲醇-
0. 5%磷酸溶液(55 ∶ 45)［12］;乙腈-0. 1%甲酸溶液
(40 ∶ 60)［13］;甲醇-乙腈-0. 4% 磷酸溶液(3 ∶ 27 ∶
70)［14］。均有不错的分离效果，因考虑到样品酸度
较大，缓冲溶液可使其变温和从而减小对色谱柱的
危害。故本文采用甲醇-醋酸盐缓冲溶液(53∶ 47)作
为流动相。
据文献报道，槲皮素、山萘素在瓦松中主要以苷
的形式存在，须经过水解以后才能检测［7］。另考虑
到槲皮素和山萘素在强酸和高温条件下易氧化分
解，故本试验以槲皮素和山萘素峰面积为测定指标，
考察了提取溶剂的酸度(含不同浓度盐酸的 80%甲
醇水溶液，如 2. 5%，5%，7. 5% 盐酸)、回流时间
(0. 5，1，2 h)、水解温度(80，100 ℃)对酸解程度的
影响。结果表明，以含 5%盐酸的 80%甲醇溶液为
酸解剂，水解温度 100 ℃，回流 1 h 的提取效果
最好。
［参考文献］
［1］ 赵建国，曲伟江．瓦松的现代研究进展［J］．时珍国医
国药，2007，18(10):2430.
［2］ 郑万金，张萍，仲英． 瓦松属植物的研究进展［J］．齐
鲁药事，2008，27(3):161.
［3］ 周燚，刘暑艳，邹丽芳． 几种野生植物提取物抑菌作
用研究［J］．中国野生植物资源，2004，23(2):30.
［4］ 郑万金，仲英，孙敬勇，等．瓦松的化学成分研究［J］．
中草药，2009，40(6):859.
［5］ Chou C C，Yang J S，Lu H F，et al． Quercetin-
mediated cell cycle arrest and apoptosis involving
activation of a caspase cascade through the mitochondrial
pathway in human breast cancer MCF-7 cell［J］． Arch
Pharm Ｒes，2010，33(8) :1181.
［6］ 顾远晖，李一平，李安强，等． 槲皮素对人肝癌
SMMC-7721 细胞生长的抑制及细胞凋亡的诱导作用
［J］．兰州大学学报:医学版，2010(3):9.
［7］ Kuhar M，Sen S，Singh N． Ｒole of mitochondria in
quercetin-enhanced chemotherapeutic response in human
non-small cell lung carcinoma H-520cells ［J］．
Anticancer Ｒes，2006，26 (2A) :1297.
［8］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典．一部［S］．北
京:中国医药科技出版社，2010．
［9］ 罗君，张丽艳，万明香，等． ＲP-HPLC法测定八莲属植
物中槲皮素及山奈酚的含量［J］． 中国中药杂志，
2010，35(22):3021．
［10］ 陈娟，师彦平，HPLC 测定萹蓄中槲皮素和山柰素的
含量［J］．中国中药杂志，2009，14(4):423.
［11］ 吴怀恩，甄汉深，韦志英，等． ＲP-HPLC法同时测定侧
柏叶炭中槲皮素和山柰素的含量［J］． 中国药房，
2009，20(12):934.
［12］ 邾枝花，蒋大圆，倘余乐． HPLC测定芙蓉膏水解产物
中槲皮素的含量［J］．安徽医药，2009，13(11):1350.
［13］ 潘馨，陈森鸿． HPLC 法测定土荆芥中槲皮素和山柰
素的含量［J］．药物分析杂志，2008，28(9):1500.
［14］ 高雷，张平，程钢． HPLC测定不同产地黄蜀葵花药材
中槲皮素的含量［J］．安徽医药，2008，12(5):411.
［责任编辑 顾雪竹］
·101·
杨浩，等:HPLC等度洗脱法快速测定瓦松中槲皮素和山萘素的含量