全 文 ：347※分析检测 食品科学 2009, Vol. 30, No. 20
独根草不同部位多糖含量的测定
李文芳，晏 丽，银 伟，李 望
(吉首大学城乡资源与规划学院，湖南 张家界 427000)
摘 要：采用水提 -醇沉法对独根草根、茎、叶中的有效成分多糖进行提取，经蒽酮 -硫酸显色后，在 624nm波
长处比色测定。结果独根草根、茎、叶中的多糖含量分别为 6.28%、10.47%、3.29%。结果表明独根草茎是独
根草全株以多糖为主的重要活性部位。
关键词：独根草；多糖；测定
Determination of Polysaccharides in Different Parts of Oresitrophe rupifraga Bge
LI Wen-fang，YAN Li，YIN Wei，LI Wang
(College of Resources of Planning Sciences, Jishou University, Zhangjiajie 427000, China)
Abstract ：Bioactive components of polysaccharides were extracted from roots, stems, and leaves of Oresitroph rupifraga Bge
using water extraction-ethanol precipitation. Meanwhile, the contents of polysaccharides were determined at 624 nm by
anthrone-sulfuric acid method. The contents of polysaccharides in roots, stems and leaves of Oresitrophe rupifraga Bge were
6.28%, 10.47%, and 3.29%, respectively. These results indicated that stems of Oresitrophe rupifraga Bge are the major locations
of bioactive polysaccharides.
Key words：Oresitrophe rupifraga Bge；polysaccharide；determination
中图分类号：Q539　　 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)20-0347-03
收稿日期：2009-07-22
作者简介：李文芳(1962－)，女，高级实验师，本科，主要从事植物有效成分分析研究。E-mail：liwenfang624@sina.com
独根草(Oresitrophe rupifraga Bge) 为虎耳草科独根草
属多年生草本植物，又名岩花、小岩花、山苞草等[ 1 ]。
主要分布于河北、山西、湖南桑植等地，生于阴湿处
及石隙间。具有耐旱、耐盐碱、耐寒、耐荫、吸收
二氧化碳能力强、人工驯化栽培管理简便，易繁殖等
特点 [ 2 ]；还有补肾、强筋功效，用于治疗肾虚、腰膝
冷痛、阳痿遗精、神经官能症等[ 3 ]，既是观赏植物又
可全草入药。
多糖是一类天然高分子化合物，是由醛糖或酮糖通
过苷键连接在一起的多聚物。多糖在自然界分布极广，是
构成生命的四大基本物质之一，且具有多种生理活性[4]。
20世纪 70年代以来，科学家发现植物多糖类化合物在
防治疾病方面具有独特的功能和很低的毒副作用，尤其
是在抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等方面，显示出越发广
阔的应用前景，成为当今新药研究开发的热门[ 5 ]。
虽然有记载独根草可以全草入药，但关于其有效成
分的研究报道较少。本实验采用水提醇沉法提取了独根
草有效成分多糖，用蒽酮比色法对其不同部位多糖进行
含量测定，确定独根草不同部位多糖的含量，为独根
草的综合利用和质量评价提供科学依据。同时也为生产
时原料部位的选择和临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器
独根草于2006年8月在湖南张家界市仙人溪采集 (海
拔 681m，地理位置为N33°04.586″、E110°23.426″)。
将采集的样品去除黄、腐部分，洗净，分部位为根、
茎、叶于 6 0℃烘箱中烘干，粉碎过 6 0 目筛，备用。
石油醚、乙醇、三氯甲烷 、正丁醇、双氧水、
丙酮、乙醚、葡萄糖、蒽酮、硫酸均为 A R 试剂。
AG-340万分之一天平、BM-400旋转蒸发仪、LDJ-
2A冷冻高速离心机、2K-82B真空干燥箱、UV-160紫外
可见光分光光度计。
1.2 方法
1.2.1 独根草多糖的提取与精制[6]
称取粉碎好的独根草样品根、茎、叶各 35.00g，置
于索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)150ml，在 70℃水
浴加热回流 2次，每次 3h，取出样品，挥干试剂。再
加入 80%的乙醇 150ml于 80℃进行回流 2次，每次 3h，
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过滤。挥干试剂后，样品放入 500ml 的烧杯中，加蒸
馏水 250ml，于沸水浴中提取 2h，抽滤，滤渣再加入
100ml蒸馏水再次于沸水浴中提取 1h，抽滤，合并滤
液，滤液浓缩到 50ml左右，加入三氯甲烷与正丁醇(5:1，
V/V)的混合溶液进行脱蛋白，反复进行，直到无蛋白为
止(紫外分光光度计 280nm波长处检测)，将脱去蛋白的
液体用浓氨水调至 pH值为 9，再加入等量的双氧水在 80
℃的热水中共热 30min，将样品液浓缩到 50ml，加入无
水乙醇，使乙醇体积分数达 80 %，放入冰箱中静置过
夜，过滤，滤渣先后用 8 0 % 乙醇、无水乙醇、丙酮、
乙醚多次冲洗，于真空干燥箱中干燥，即得独根草根、
茎、叶多糖。
1.2.2 标准曲线的绘制[6]
用万分之一天平精密称取 105℃干燥至恒重的葡萄
糖标准品 0.0501g定容于 100ml容量瓶中，摇匀，得到
0.5mg/ml的标准液。精密吸取此溶液10ml再定容于100ml
容量瓶中，摇匀，得到 50μg /m l 的标准溶液。
精密吸取该标准溶液 0 .1、0 .2、0 .4、0. 6、0 .8、
1.0ml于试管中，加水补至 1.0ml，将试管置于冰水浴中
加入 4ml恩酮 -硫酸试剂，摇匀，沸水浴中加热 10min，
立即用流动自来水冷却至室温，静置 10min。以试剂空
白为参比，用紫外分光光度计于 624nm波长处测定吸光
度，绘制标准曲线。
1.2.3 换算因子的测定[6]
采用葡萄糖工作曲线测定独根草多糖，测定了独根
草多糖与葡萄糖含量之间的换算因子。
精密称取独根草根、茎、叶多糖各 20mg左右，加
蒸馏水溶解定容于 100ml 容量瓶中，摇匀，得独根草
根、茎、叶多糖贮备液。精密吸取该储备液 1 . 0 ml 于
具塞试管中，按照 1.2.2节的方法测定吸光度，根据回
归方程计算独根草多糖溶液中葡萄糖的浓度，换算因子
f=W/(C×D)(W为称取多糖的质量，mg；C为精制独根
草根、茎、叶多糖贮备液的浓度，mg /m l；D 为多糖
的稀释因素)，计算出换算因子 f。
测得其根的换算因子 f＝ 2.939；茎的换算因子 f＝
3.410；叶的换算因子 f＝ 2.453。
1.2.4 待测液的制备[6]
精密称取粉碎好的独根草根、茎、叶各 1 . 000 g，
分别置于索氏提取器中，加入 80%乙醇 40ml，80℃水
浴回流 1h，取出趁热抽滤，滤渣用 80%的乙醇洗 3次，
将滤纸连同滤渣一并放入烧杯中，加蒸馏水 100ml，置
于沸水中加热 1h，抽滤，滤渣用热蒸馏水冲洗，合并
滤液，4000r/min离心 30min，上清液定容到 100ml容量
瓶中，摇匀、待测。
2 结果与分析
2.1 标准曲线的绘制
以浓度为横坐标(x)、吸光度(A)为纵坐标绘制标准
曲线(图 1)，得到回归方程为：Y＝ 0.0205x＋ 0.013，R2
＝ 0.9994。
2.2 显色液稳定性实验
取待测液 1.0ml于试管中，按 1.2.2节操作。每间
隔 0.5h测定一次吸光度，共测定 5 次，测定结果见表
1。稳定性随着时间的延长逐步降低，但在 2.5h内基本
稳定，相对标准偏差(RSD)为 1.26%。
时间(h) 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 RSD(%)
A 0.769 0.766 0.757 0.749 0.744 1.26
表1 稳定性实验结果
Table 1 Evaluation for stability of polysaccharide determination
2.3 精密度实验
取待测液 1.0ml分别于试管中，按1.2.2节方法操作，
测定结果见表 2。RSD为 0.88%，说明此方法精密度较
好 。
样品号 1 2 3 4 5 RSD(%)
A 0.764 0.767 0.749 0.758 0.753 0.88
表2 精密度实验结果
Table 2 Precision for 5 replicate determinations
2.4 加标回收率实验
样品号 本底值(mg) 加标值(mg) 测定值(mg) 回收率(%) RSD(%)
1 1.047 0.25 1.289
2 1.047 0.25 1.293
3 1.047 0.25 1.295 97.52 1.28
4 1.047 0.25 1.286
5 1.047 0.25 1.291
表3 回收率实验结果
Table 3 Recovery rates of polysaccharide in spiked Oresitrophe
rupifraga Bge stem samples
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
y=0.0205x+0.013
R2=0.9994
吸
光
度
浓度(μg/ml)
0 10 20 30 40 50 60
图1 葡萄糖标准曲线
Fig.1 Standard curve of glucose
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称取独根草茎样品 5份各 1.00g，分别加入独根草
茎多糖 0 .25mg，进行加样回收率测定。由表 3 可见，
加样回收率为 97.60%，RSD为 1.28%。
2.5 不同部位独根草多糖含量的测定
取 1.2.4节中的待测溶液 1.0ml于试管中，按照 1.2.2
节的方法测定，由回归方程计算样品液中葡萄糖浓度，
按下式计算样品中独根草多糖的含量。

C×D× f
多糖含量(%)＝—————× 100

W
式中：C 为样品液中葡萄糖的浓度；D 为稀释因
素；f 为换算因子；W 为样品质量。
部位 根 茎 叶
含量(%) 6.28 10.47 3.29
RSD(%) 1.37 1.96 1.12
表4 独根草不同部位多糖含量(n=5)
Table 4 Polysaccharide contents in different parts of Oresitrophe
rupifraga Bge (n=5)
3 讨论与结论
由于受到原料、时间等因素的限制，本实验只做
了初步研究，未做最佳提取条件的选择，而溶剂、温
度、提取时间等因素对实验结果均会产生很大的影响。
独根草多糖的提取与精制过程较为繁琐，操作过程
中有不同程度的损失。
独根草全株以茎多糖的含量最高，达 10.47%，根
其次为 6.28%，叶最少为 3.29%，均有一定的药用价值。
如能将独根草药用与观赏价值相结合，净化与美化环境
之功能于考虑，将独根草人工驯化栽培，作为一种雅
俗共赏的净化室内空气的大众花卉进行开发、利用，前
景广阔。
参考文献：
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由表 4得知，独根草茎多糖的含量最高，达 10.47%，
根其次为 6.28%，叶最少为 3.29%。