全 文 ：乳苣总黄酮的提取及抗氧化作用研究
高义霞1 ,周向军1 ,张　继1 ,2
(1.天水师范学院 生命科学与化学学院 ,甘肃 天水 741001;2.西北师范大学 生命科学学院 ,甘肃 兰州 730070)
　　摘要:通过乙醇回流提取乳苣中的黄酮类化合物 ,利用分光光度法测定总黄酮的含量 , 并分析了对羟基自由基的清除作用和总
抗氧化能力。结果表明 ,乳苣中总黄酮含量为 16.8%, 具有较好的抗氧化能力。
关键词:乳苣;总黄酮;抗氧化
中图分类号:R284　　文献标志码:A　　文章编号:1005-8141(2010)03-0206-02
Study on Extraction of Flavonoids from Mulgedium Tataricum L.and Its Antioxidant Effects
GAO Yi-xia1 , ZHOU Xiang-jun1 , ZHANG Ji1 , 2
(1.School of Life Science and Chemistry , Tianshui Normal College , Tianshui 741001 , China;
2.College of Life Science , Northwest Normal University , Lanzhou 730070 , China)
Abstract:The compounds of Mulgedium tataricum L.were extracted by alcohol refluxing extraction , the content of total flavones was determined
by spectrophotometry , and total antioxidant capacity and the scavenging effect on hydroxyl radicals were analyzed.The results showed that the content
of total flavones was 16.8%, which had good antioxidant capacity.
Key words:Mulgedium tataricum L.;total flavonoids;antioxidant activity
　　收稿日期:2010-01-25;修订日期:2010-02-13
第一作者简介:高义霞(1982-),女 ,甘肃省白银人 ,助教 ,硕士 ,研
究方向为资源植物学。
　　乳苣(Mulgedium tataricum L.),又名蒙山莴苣 、紫
花山莴苣 、苦菜等 ,多年生草本植物 ,分布在俄罗斯 、欧
洲印度 、伊朗 、阿富汗及我国各省。甘肃也有广泛分
布 ,生长在海拔 1200—4300m 的地区 ,常生长在湖边 、
草甸 、田边 、河滩 、固定沙丘以及砾石地[ 1] 。民间作为
野菜采食 ,有抗菌 、消炎 、止痛等功效。关于乳苣的研
究报道 ,国内外均较少 。王晓雄等从乳苣全草中分离
到三萜类和倍半萜类化合物 ,并确定了其结构[ 2-4] 。
而天然的黄酮类化合物具有抗心脑血管疾病 、抗炎镇
痛 、免疫调节 、降血糖 ,治疗骨质疏松 ,它能清除自由
基 、超氧化物和羟基自由基 、抑制脂质过氧化及抗癌 、
抗病毒 、抗氧化 、抗衰老 、抗辐射等作用[ 5 , 6] 。关于乳
苣总黄酮提取与抗氧化作用方面的研究 ,笔者尚未见
国内外有报道。在此条件下 ,本研究通过回流提取乳
苣总黄酮 ,测定其含量并考察其抗氧化作用 ,为综合开
发乳苣资源提供参考 。
1　材料与方法
1.1　材料
乳苣(Mulgedium tataricum L.)采自甘肃省白银市
靖远县农田和水渠边 ,经天水师范学院生命科学与化
学学院汪之波老师鉴定为菊科乳苣属植物 Mulgedium
tataricum L.。乳苣全草 ,室温干燥 ,粉碎 ,过 80目筛 ,
备用 。
1.2　主要试剂及仪器
芦丁标准品购自南京替斯艾么中药技术研究所。
乙醇 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢氧化钠等均为国产分析纯
试剂 。主要仪器为电子天平(北京赛多利天平有限公
司),RE—52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)和
SHZ—D循环水式真空泵(河南开封宏兴科教仪器
厂)。
1.3　实验方法
乳苣总黄酮的制备:称取干燥的乳苣粉末 10g ,用
40倍量 70%的乙醇在 90℃条件下水浴浸提 2h ,过滤 ,
滤渣再重复提取 2次 ,合并 3次滤液 ,用石油醚萃取两
次 ,取下层液在旋转蒸发仪上浓缩至干得到乳苣总黄
酮粗提物 ,将此固形物用乙醇溶解并定容至 100ml备
用。
总黄酮含量的测定:精密称取经 120℃干燥至恒
重的芦丁对照品 25mg ,置于 100ml容量瓶中 ,加 75%
乙醇至刻度 ,摇匀 ,得对照品液(0.25mg/ml)。吸取 0 、
2ml 、3ml 、4ml 、5ml 、6ml 、7ml ,分别放置 25ml容量瓶中 ,
加5%亚硝酸钠 1ml摇匀放置 6min ,加 10%硝酸铝 1ml
摇匀放置 6min ,加4%氢氧化钠 10ml ,用75%乙醇释至
刻度 , 放置 15min 后以空白试剂为参比液 , 在波长
510nm测其吸光度[ 7-9] 。以吸光度为纵坐标 ,芦丁标
准液浓度为横坐标 ,绘制标准曲线(图 1)。吸取 1ml
上述乳苣提取液在 25ml比色管中 ,按上述标准曲线的
操作方法测定吸光度 Y值 ,并通过标准曲线的回归方
程换算成浓度 X(mg/ml)。
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·实验与技术·　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　资源开发与市场 Resource Development &Market 2010 26(3)
图 1　芦丁标准曲线
体外抗氧化活性测定:采用邻二氮菲-Fe2+氧化
法和普鲁士兰法分别测定其羟自由基和总抗氧化能
力:①提取物对羟自由基的清除作用。采用邻二氮菲
-Fe2+氧化法[ 10] ,吸取 4ml的 pH7.4 磷酸盐缓冲液 ,
加入 1.5ml的 5mmol/L 邻二氮菲 ,充分混匀;加入 1ml
的7.5mmol/L FeSO4 溶液 ,立即混匀;加入一定体积的
某一浓度样液 ,立即混匀;再加入 1.5ml双蒸水 ,以补
充体积;最后加入 1.0ml的 1%H2O2 溶液 ,轻轻混匀;
37℃水浴中保温 60min , 510nm测定吸光度。·OH清除
率(%)=A加药-A损伤/A未损-A损伤×100。式中 ,A加药
为加入样品(抗氧化剂)和 H2O2时测得的吸光度;A损伤
为加 H2O2 而不加抗氧化剂时测得的吸光度;A未损为不
加样品和H2O2 时测得的吸光度。 ②提取物的总抗氧
化能力。采用普鲁士兰法[ 10] ,取一定体积的样液 ,加
pH6.6的磷酸盐缓冲液 2.5ml 和 1%铁氰化钾溶液
2.5ml ,混合后在 50℃放置 20min ,加入 10%三氯乙酸
溶液 2.5ml混合 ,取混合液 2.5ml ,加入 2.5ml蒸馏水
和0.1%三氯化铁溶液 2.5ml ,混匀 , 静置 10min ,在
700nm处测定吸光度(A),以试剂代替试样作为空白对
照吸光度 A0 ,则总抗氧化能力可以用 ΔA 来表示(ΔA
=A-A0)。
2　结果与分析
2.1　乳苣总黄酮得率计算
按前述方法 ,测定不同浓度的标准芦丁溶液的吸
光度 ,得到芦丁标准溶液的标准曲线(图 1),用最小二
乘法进行线形回归 ,得到芦丁溶液浓度 Y(mg/ml)与吸
光度值 X 关系曲线的回归方程式:Y =11.988X
-0.0037 ,其相关系数 R2 =0.9997。由回归方程及样
品吸光度计算出样品中黄酮的含量 ,计算总黄酮得率
为16.8%。
2.2　乳苣粗提液总抗氧化能力的测定
通过观察在粗黄酮存在时 ,用 Fe3+-Fe2+的转移
来检测其还原能力 ,因为一种物质的总抗氧化能力与
它潜在的抗氧化活性有十分密切的关系[ 11 , 12] 。由图 2
看出 ,随着提取液体积的增加 ,其总抗氧化能力增加 ,
并呈现明显的浓度依赖关系 ,说明乳苣总黄酮提取液
具有良好的抗氧化能力。
图 2　不同体积提取液对总抗氧化能力的影响
2.3　乳苣粗提液羟自由基清除率的测定
研究表明 ,自由基与机体的许多功能障碍和疾病
的发生有关 ,因此研究自由基的检测方法并探讨物质
对自由基的清除作用具有重要意义[ 13] 。由图 3可见 ,
乳苣黄酮提取液对由 Fenton体系产生的羟自由基有一
定的清除作用 ,且随着黄酮浓度增加 ,清除率逐渐上
升 ,并呈现明显的浓度依赖关系 ,说明乳苣总黄酮提取
液具有良好的清除羟自由基的能力 。
图 3　不同体积提取液对羟自由基清除率的影响
3　结论
研究表明 ,乳苣中的黄酮类化合物含量较高 ,其粗
提液对羟基自由基有较好的清除作用 ,且随着提取液
体积的增加 ,其总抗氧化能力增加 ,并呈现明显的浓度
依赖关系。乳苣资源丰富 ,具有广泛的食用价值和药
用价值 ,因此对其化学成分值得进一步深入研究 ,并加
以开发利用。
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·207·
资源开发与市场 Resource Development &Market 2010 26(3)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　·实验与技术·
(4.97%)。
图 1　提取液挥发油成分的总离子流图
表 1　刺猬紫檀挥发油提取液的化学成分鉴定结果
峰号 保留时间(min) 化合物名称 CAS编号 分子式
相对含
量(%)
1 5.175 2-苯异丙醇 000617-94-7 C9H12O 0.96
2 8.746 4-甲氧基-3-甲基苯乙酸 004513-73-9 C10H12O3 4.97
3 8.918 橙花叔醇 1000285-43-6 C15H26O 0.70
4 11.861 邻苯二甲酸-异丁基十一烷基酯 1000308-97-3 C23H36O4 1.70
5 12.653 棕榈酸 000057-10-3 C16H32O2 1.56
6 12.754 邻苯二甲酸二丁酯 000084-74-2 C16H22O4 2.11
7 12.942 棕榈酸乙酯 000628-97-7 C18H36O2 0.36
8 14.296 反式-13-十八碳烯酸 000693-71-0 C18H34O2 1.91
9 14.492 亚油酸 000060-33-3 C18H32O2 0.72
10 14.536 E-11-十六碳烯酸乙酯 1000245-71-9 C18H34O2 0.55
11 14.680 棕榈酰胺 000629-54-9 C16H33NO 1.10
12 14.876 3-十八烯 007206-19-1 C18H36 0.82
13 15.681 6-甲基十八烷 10544-96-4 C19H40 0.54
14 16.426 油酸酰胺 000301-02-0 C18H35NO 2.05
15 16.976 3, 4-二甲氧苯甲基丙酮 000776-99-8 C11H14O3 1.86
16 17.197 2 , 2 -亚甲基双(4-甲基-6-叔丁基苯酚) 000119-47-1 C23H32O2 5.88
17 18.083 茴香偶姻 000119-52-8 C16H16O4 72.22
　　茴香偶姻又称二甲氧基安息香胶或烷异英 ,属于
苯偶姻衍生物 ,其结构式见图 2。苯偶姻衍生物是具
有酮基和醇基的 2-酮醇 ,该基易进行氧化 、还原 、卤
化等反应 ,是合成各种化合物的原料 ,尤其能够合成带
有α-二苯基的噻唑 、咪唑 、口恶唑等杂环化合物 。在医
药上 ,是具有咪唑 、口恶唑 、三嗪 、三唑等杂环的消炎镇痛
剂 、杀菌剂的原料;在聚合物原料方面 ,可用作具有良
好耐热性的聚苯基喹口恶啉的原料 、近红外吸收颜料聚
合物树脂包囊原料的前驱体等[ 6 , 7] 。
图 2　茴香偶姻的结构式
2 , 2′-亚甲基双(4-甲基-6-叔丁基酚)俗称抗
氧剂 2246 ,是低毒 、低污染 、热稳定性好的受阻酚类抗
氧剂 ,广泛用在天然橡胶 、合成橡胶 、胶乳以及其它合
成材料和石油制品中[ 8-10] 。4-甲氧基-3-甲基苯
乙酸除自身具有抗炎活性和抑制血清蛋白变性 、促进
血纤维蛋白溶解作用外 ,同时也是合成多种具有特异
生物活性物质的重要中间体[ 11 ,12] 。
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