全 文 ：〔实验研究〕
漏芦抽提剂(RHU)含药血清对人乳腺癌耐药株
MCF-7 ADR细胞 P170蛋白表达的研究
焦中华　山东中医药大学附属医院血液肿瘤科 (250011)
刘培民　山东中医药大学 2000级博士生 (250014)
李秀荣　山东中医药大学附属医院血液肿瘤科 (250014)
李　洁　山东中医药大学肿瘤实验室 (250014)
　　关键词:漏芦抽提剂　乳腺癌　蛋白表达　实验研究
　　祁州漏芦是一味临床常用中药 , 主产于东北 、华
北及西北等地 ,药源非常丰富 , 具备清热解毒 ,消痈散
结 ,通经下乳功效。《神农本草经》载为上品 , 记述其
功用谓:“下乳汁 , ……轻身益气 , 耳目聪明 , 不老延
年。”漏芦汤主治 瘕 、恶疮 , 应用漏芦汤加减治疗恶
性肿瘤取得了较好疗效。我们以 RHU抽提剂灌胃制
备的含药血清进行了体外培养细胞 P170 蛋白表达水
平的实验研究 ,结果汇报如下:
1　材料与方法
1.1　材料:细胞株系购自山东省医学科学院基础所
的人乳腺癌细胞耐阿霉素株 MCF-7 ADR ,MCF-7(人乳
腺癌细胞)和 MCF-7 ADR(耐阿霉素的人乳腺癌细
胞)。MCF-7 ADR细胞是由敏感的 MCF-7 细胞接触浓
度递增的 ADR诱导而来 , 已证实 MCF-7 ADR能稳定
过度表达 P-糖蛋白 , 具有典型的多药抗药性 , 在不含
ADR的培养基中培养 3 个月仍能维持 MDR的表型。
两株细胞株均常规培养于 DMEM培养基中 ,内加10%
胎牛血清 、青霉素 100IU ml和链霉素 100ug ml , 置于
37℃含 5%CO2 的孵育箱中培养。
RHU抽提剂的制备:应用根粉碎乙醇提取法 , 取
祁州漏芦 5kg , 干燥粉碎 , 用 95%的乙醇(5kg 乘 8 倍
量)热提 3～ 4 次 ,每次 3h ,回收乙醇 , 在70%乙醇热提
4 次 ,合并 , 减压 ,浓缩得到粗提物 ,控制溶液含漏芦生
药量分别为 4g ml、2g ml 、0.5g ml三种梯度浓度的浸
膏 , 4℃冰箱储存备用。
1.2　含药血清的制备:取健康大鼠 16 只 , 雄性 , 体重
250 克左右(购自山东中医药大学动物房), 随机分成
空白血清组 8只 , 含药血清组 8 只。含药血清组每日
给予 RHU抽提剂2g ml浓度 5ml 日灌胃 , 每日 1次 , 空
白血清组每日给予等量生理盐水灌胃 , 与给药第 6
天 ,最后 1 次灌胃后1 小时(灌药前禁食 12 小时 ,不禁
水)腹主动脉无菌采血 , 1500 转离心 10 分钟 , 无菌分
离血清 ,经 56℃、30分钟灭活处理 , 置-20℃冰箱保存
备用。
1.3　实验操作与分组:取对数生长期的 MCF-7 ADR
耐药细胞 ,经 0.25%胰酶消化 , 计数 , 以 2×105 ml的
量接种于小培养瓶中 , 37℃5%CO2 含 10%胎牛血清
的 DMEM 培养基中培养 48 小时 , 至细胞生长旺盛贴
壁后 , 去掉原培养液 ,分别加入以下各组不同浓度的
含药血清或含西药的细胞培养液于培养箱中继续培
养48 小时 , 然后分别离心 , 用 PBS 液洗涤 2 次 , 制成
细胞悬液 , 上机检测。共分 5 组 , 每组 4 瓶。分组如
下:1 组 10%正常大鼠血清组;2 组 10%含 RHU 鼠血
清组;3 组 20%含 RHU鼠血清组;4 组 10%含药 RHU
血清加 5μg ml ADM 组;5 组 5μg ml ADM 加 10%大鼠
血清组。
2　结果
各组 P170蛋白的表达水平情况如下:
组别 P170蛋白表达率(%) P
非特异性抗体荧光本底染色 0.17
10%正常大鼠血清组 72.37
10%含 RHU鼠血清组 30.52 <0.01
20%含 RHU鼠血清组 2.91 <0.01
10%含药 RHU血清加 5μg ml ADM 组 1.46 <0.01
5μg ml ADM 加 10%大鼠血清组 32.86 <0.01
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光明中医第 18卷第 108 期 2003 年第 5期
3　分析
Pgp是由 MDR-1基因编码的 、分子量为 170KD的
跨膜糖蛋白 , 即 P170 蛋白。 它是一种 ATP依赖性的
“药泵” , 能将疏水亲脂性的药物泵出细胞外 , 所以
P170 的过度表达能够使细胞产生耐药性。属于 P170
运输底物的化疗药物一般是天然来源的疏水性药物 ,
包括长春花碱类 、蒽环类抗生素(如顺铂 、阿霉素等)、
紫杉醇 、鬼臼树脂类 、米托蒽醌等。 P170 蛋白在多种
肿瘤中均有不同程度表达 , 我们的实验研究用 FCM
(流式细胞术)检测了 RHU含药血清处理多药耐药细
胞株MCF-7 ADR细胞 P170蛋白表达的改变。并与阿
霉素进行参照 ,结果显示:正常大鼠血清组 P170 蛋白
表达率最高 , 而阿霉素组和 10%RHU 含药血清组均
有不同程度的下降 ,下降幅度最大的是中药血清和阿
霉素共用组 , 而 20%RHU含药血清组也有突出表现。
分析原因有以下几方面:1.阿霉素可导致 MCF-7 ADR
细胞部分凋亡 , 因而也可出现 P170 蛋白表达下调;2.
中药低剂量血清组可能同时在诱导凋亡和促使细胞
转化方面起到一定的作用 , 因而 P170 蛋白表达下调;
3.20%RHU含药血清组 P170 蛋白显著下调 , 估计与
细胞凋亡过多有关 , 我们同时进行的细胞凋亡检测结
果证明与此结论完全相符;4.中西药并用组 P170 蛋
白表达最低 ,说明中药除了直接诱导细胞凋亡的作用
以外 , 对逆转细胞耐药 , 保持耐药细胞对化疗药重新
敏感具有显著疗效。通过以上几个方面的比较 , 可以
得出 RHU 不但在大剂量时可发挥直接抑瘤抗癌作
用 , 在小剂量时可发挥突出的逆转耐药作用 , 有助于
让已耐药的细胞株对化疗药重获敏感 , 因而在临床上
有广阔的应用前景。
(收稿日期:2003.06.29)
〔方药纵横〕
甘露消毒丹的临床应用
姜方伟　云南省景东县中医医院(676200)
　　关键词:甘露消毒丹　咳嗽　胃炎　胆囊炎
　　甘露消毒丹一名普济解疫丹 , 为《温热经纬》中
方 ,由黄芩 、连翘 、射干 、川贝母 、茵陈 、滑石 、木通 、藿
香 、石菖蒲 、白豆蔻 、茵陈 、薄荷组成 , 具有清热解毒 ,
化浊利湿之功效。主治湿温 ,热重于湿 ,身热肢酸 , 无
汗神烦 ,或有汗热不退 , 胸闷腹胀 , 呕恶 , 黄疸 ,尿赤便
秘 ,或泻而不畅 , 有热臭气者 ,笔者临床运用甘露消毒
丹治疗外感咳嗽 ,胃炎 , 胆囊炎收到满意的疗效。
1　外感咳嗽
张某 ,男 , 33 岁 , 2002 年 3 月14日初诊 ,咳嗽咽痛
痰多 1周 , 咽峡充血++,舌红苔灰黄 , 脉浮数。 证属
外感湿热郁闭上焦 ,治疗以清化湿热 ,宣肺止咳 , 以甘
露消毒丹加减:白豆蔻 7g , 藿香 15g , 茵陈 30g , 滑石
30g ,通草 15g ,石菖蒲 10g , 黄芩 15g ,连翘 20g , 浙贝母
20g ,射干 15g ,淡竹叶 15g , 蒲公英 20g , 桑皮 15g , 桔梗
15g ,前胡 20g , 虫退 10g , 僵蚕 20g , 车前子 15g , 甘草
10g 。4 剂 1日 1 剂 , 水煎温服。 3 月 20 日复诊 , 咳嗽
咽痛减轻 , 咯痰减少 , 咽峡充血 , 舌红苔灰 , 续原方加
减 4剂诸症痊愈。
按:本病属中医外感咳嗽 ,由于外感湿热邪气 ,由
口鼻而入 ,侵袭上焦肺经 , 肺气失宣 , 郁闭咽喉 , 则咳
嗽咽痛痰多 , 舌红苔灰黄 , 甘露消毒丹中白豆蔻 、藿
香 、茵陈 、滑石 、通草 、菖蒲 、黄芩 、连翘 、贝母 、射干具
有清化湿热 、解毒 , 加车前子 、蒲公英加强清利湿热 ,
消肿解毒 , 加桔梗 、前胡 、桑皮宣肺止咳 、加虫退 、僵
蚕 、疏风开结。 徐灵胎所谓:“治湿不用燥热之品 , 皆
以芳香淡渗之药 , 疏肺气而利膀胱 ,此为良法。”
2　胃炎
杨某 ,男 , 36岁 , 2002年 3 月 17日初诊 , 反复中上
腹灼热闷痛十年余 , 再发 1 周 , 伴纳差 , 多梦 , 全身烘
热 ,喉中有痰 , 少量鼻衄 ,舌红苔厚黄腻。 3 年前诊为
慢性胃炎。证属湿热蕴结中焦 ,治疗以清热解毒 , 化
浊利湿 ,用甘露消毒丹加减:白豆蔻 10g , 藿香 15g , 茵
陈 40g ,滑石 40g ,木通 20g ,石菖蒲 15g ,黄芩 15g , 浙贝
母 15g , 薄荷 15g , 苡仁 30g ,厚朴 20g ,淡竹叶 15g , 荷
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光明中医第 18卷第 108 期 2003 年第 5期