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超声提取辣木叶黄酮优化
及其抗氧化活性
岳秀洁，李 超，扶 雄*
(华南理工大学轻工与食品学院，广东广州 510640)
收稿日期:2015－04－13
作者简介:岳秀洁(1990－)，女，硕士研究生，研究方向:功能碳水化合物，E－mail:yxj67814@ 163.com。
* 通讯作者:扶雄(1971－)，男，博士，教授，研究方向:功能碳水化合物，E－mail:lfxfu@ scut.edu.cn。
基金项目:广州市科技计划项目(2013J4500036);广东省科技计划项目(2012B050500003)。
摘 要:采用响应面分析法对辣木叶黄酮的超声提取工艺进行优化。以乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度为考察因
素，总黄酮得率和氧自由基吸收能力(OＲAC)值为响应值，进行四因素三水平的 Box－Behnken实验设计，最优条件:乙醇
浓度 70%，料液比 1∶ 27(g /mL)，提取时间 46 min，提取温度 50 ℃，在此条件下，总黄酮得率为(48.93 ± 0.44)mg ＲE/g，
OＲAC值为(2747.17 ± 301.51)μmol TE /g，与预测值(49.23 mg ＲE /g，2853.99 μmol TE /g)的误差为 0.6%和 3.7%。采
用聚酰胺树脂对辣木叶黄酮粗提物进行纯化，纯化后黄酮含量为 65.89%，OＲAC值为(5923.48 ± 228.65)μmol TE /g，且
纯化前后均表现出较强的 DPPH和 ABTS自由基清除能力，其 EC50值分别为 0.45、0.10 g /mL 和 0.26、0.05 mg /mL。结
果表明超声提取是一种高效的提取辣木叶黄酮方法;聚酰胺树脂可有效提高辣木叶提取物中的黄酮含量并显著提高
其抗氧化性。
关键词:辣木叶，黄酮，超声提取，抗氧化
Optimization of ultrasonic extraction of flavonoids
from Moringa stenopetala leaves and their antioxidant activities
YUE Xiu－jie，LI Chao，FU Xiong*
(College of Light Industry and Food Sciences，South China University of Technology，Guangzhou 510640，China)
Abstract:Ｒesponse surface methodology(ＲSM)was firstly used to optimize ultrasonic－assisted extraction(UAE)of
total flavonoids from Moringa stenopetala leaves. Based on the yield and oxygen radical absorbance capacity
(OＲAC)of flavonoids，the four single factors including ethanol concentration，solid－ liquid ratio，ultrasonic time and
temperature were optimized.The optimal conditions were enthanol concentration 70%(v /v)，solid－ liquid ratio 1∶ 27
(g /mL) ，ultrasonic time 46 min and temperature 50 ℃.Under the condition，the yield and OＲAC value were(48.93
± 0.44)mg rutin equivalent(ＲE)/g and(2747.17 ± 301.51)μmol trolox equivalents(TE)/g，respectively，which had
no significant differences with the predicted values(49.23 mg ＲE/g，2853.99 μmol TE/g).The crude extract was
then purified by polyamide resin，the flavonoids content and OＲAC value were increased to 65.89% and(5923.48 ±
228.65)μmol TE/g.The crude and purified extracts showed strong DPPH and ABTS radical scavenging activities.
The EC50values of crude extract were 0.45 mg /mL and 0.10 mg /mL and the EC50 values of purified extract were
0.26 mg /mL and 0.05 mg /mL.These results demonstrated that UAE was a highly effective way to extract flavonoids
from Moringa stenopetala leaves and the polyamide resin could significantly increase flavonoids content and
antioxidant activity of flavonoids extract.
Key words:Moringa stenopetala leaves;flavonoids;ultrasonic－assisted extraction;antioxidant activities
中图分类号:TS255.1 文献标识码:B 文 章 编 号:1002－0306(2016)01－0226－06
doi:10． 13386 / j． issn1002 － 0306． 2016． 01． 037
辣木(Moringa oleifera Lam)，属辣木科辣木属植
物，广泛分布于亚洲、非洲的热带和亚热带地区。辣
木含有丰富的蛋白质、维生素、氨基酸、脂肪、碳水化
合物，其根、茎、叶、果、树皮、种子等常被用来治疗各
种疾病，因此又被称为“奇迹之树”。辣木含有许多
活性成分，具有多种生理活性，在医药保健行业具有
广泛的用途和前景。近年来，辣木在我国云南、广
东、福建、台湾等地得到了广泛的引种栽培，其药理
活性也引起了专家学者的广泛关注。研究表明辣木
的粗提物具有抗氧化［1－2］、抗肿瘤［3］、降血糖［4］、降血
227
脂［5］、抗病毒［6］、抑菌［7］等活性。
目前，黄酮的提取方法主要有溶剂法、超声法
和微波法。传统的溶剂提取耗时长、效率低，且长
时间的加热将会破坏黄酮化合物的结构，使其抗氧
化等生物活性显著下降。超声法是利用超声波的
粉碎、空化、搅拌等作用，促进黄酮等有效成分的溶
出，具有高效、经济等优势。本实验以乙醇浓度、料
液比、提取时间和温度为考察因素，总黄酮得率和
OＲAC 为响应值，对超声辅助提取工艺参数进行优
化;采用聚酰胺树脂对黄酮粗提物进行纯化，并比
较其纯化前后黄酮含量和抗氧化活性的变化，为辣
木叶黄酮高效提取及其抗氧化剂的开发利用提供
理论知识。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
辣木干叶 云南省云南三高辣木科技有限公
司;AAPH (2，2 － Azobis (2 － amidinopropane)
Dihydrochloride);芦丁;荧光素(FL);Trolox(6 －
Hydroxy－2，5，7，8－ tetramethylchromane－2－ carboxylic
acid) ;维 生 素 C;DPPH (1，1 － diphenyl － 2 －
picryhydrazyl)和 ABTS (2，2 － azino － bis － (3 －
ethylbenzothiazoline－6－sulfonic acid) Sigma－Aldrich
公司;聚酰胺树脂(30～60 目) 国药集团化学试剂
有限公司;其它试剂均为分析纯。
KQ－300DE超声波清洗器 昆山市超声仪器有
限公司;ＲE－2000B旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器
厂;DL－5C低速台式离心机 上海安亭科学仪器厂;
Fluoroskan Ascent FL 荧光 /化学发光分析仪 美国
Thermo公司;Scientz－18N冷冻干燥机 宁波新芝生
物科技股份有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 辣木叶总黄酮的提取流程 辣木干叶→粉碎(60
目)→超声提取(300 W)→抽滤、离心(5000 r /min、15 min)→
旋蒸浓缩→真空冷冻干燥→黄酮粗提物。
1.2.2 最优参数的确定
1.2.2.1 单因素实验 以总黄酮得率和 OＲAC 值为
指标，固定超声功率 300 W，依次改变乙醇浓度、料液
比、提取时间和温度，实验方法如下:
乙醇浓度:称取辣木叶粉若干份，每份 1 g，分别
用 50%、60%、70%、80%和 90%的乙醇作为提取溶
剂，料液比 1∶ 30，60 ℃下超声提取 60 min。
料液比:称取辣木叶粉若干份，每份 1 g，分别加
入 5、15、25、35、45 mL的 70%乙醇，60 ℃下超声提取
60 min。
提取时间:称取辣木叶粉若干份，每份 1 g，加入
25 mL 70%乙醇，60 ℃下分别超声提取 10、30、45、
60、90 min。
提取温度:称取辣木叶粉若干份，每份 1 g，加入
25 mL 70%乙醇，分别于 40、50、60、70、80 ℃下超声
提取 45 min。
1.2.2.2 响应面优化实验 根据单因素实验结果确
定四因素三水平的最佳参数进行响应面分析，如表 1
所示。
表 1 因素水平表
Table 1 Orthogonal design
水平
因素
A乙醇浓度
(%)
B料液比
(g /mL)
C提取时间
(min)
D提取温度
(℃)
1 60 1∶ 15 30 40
2 70 1∶ 25 45 50
3 80 1∶ 35 60 60
1.2.3 芦丁标准曲线 准确称取 23.7 mg 芦丁标准
品，用 60%乙醇溶解并定容至 50 mL，装入棕色瓶中
置 4 ℃冰箱保存备用(474 μg /mL)。分别移取 0.2、
0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL 于 25 mL 比色管中，加入
0.3 mL 5% NaNO2 溶液，混匀，6 min 后加入 0.3 mL
10% Al(NO3)3 溶液，混匀，静置 6 min，加入 4 mL
4% NaOH溶液摇匀，放置 15 min，用 60%乙醇定容
至 10 mL，摇匀，15 min 后于 510 nm 处测定吸光度，
以芦丁浓度(μg /mL)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘
制标准曲线，得标准方程为 y = 0.0111x + 0.0049(x 为
芦丁浓度，范围为 9 μg /mL ＜ x ＜ 60 μg /mL，y 为吸光
度)，Ｒ2 = 0.9993。
1.2.4 黄酮含量测定 称取辣木叶粉 1 g 于 100 mL
三角瓶中，加入乙醇－水溶液，于超声清洗器(300 W)
中进行提取，抽滤、离心，用 60%乙醇定容至 50 mL，
取 0.5 mL提取液于 25 mL 比色管，用铝络合分光光
度法测定总黄酮得率，单位为 mg ＲE(rutin)/ g，计算
公式如下:
总黄酮得率 =(10 × CV1 /V2m)× 10
－3 式(1)
式(1)中:C为依据芦丁标准曲线计算出来的黄
酮浓度 μg /mL;V1 为提取液的总体积 mL;V2 为测定
过程中所移取的提取液体积 mL;m 为称取的辣木叶
粉的质量 g。
1.2.5 抗氧化活性的测定
1.2.5.1 OＲAC 参考 Zhang，W.等［8］的实验方法:样
品、Trolox和荧光素钠均用 75 mmol /L磷酸盐缓冲液
(pH7.4)配成所需浓度。于 96 孔板中依次加入
20 μL不同浓度的样品溶液和 Trolox 标准溶液
(6.25～50 μmol /L)、200 μL 荧 光 素 钠 盐 溶 液
(95.6 nmol /L)，同时设空白对照组和控制对照组。
设定荧光 /化学分析仪的程序，37 ℃孵育 20 min，自
动混匀，迅速加入 20 μL AAPH(119.4 mmol /L)，自动
混匀并开始测定。荧光强度为激发波长 485 nm，吸
收波长 538 nm，每 3.5 min测定一次，共 35 次。荧光
强度分别记录为 f1、f2、f3，……，f35，根据公式计算荧
光猝灭下的面积，计算公式如下:
AUC = 3.5 ×［0.5 × (f1 + f35)+ f2 + f3 + f4 + …
+ f34］ 式(2)
样品组和空白组的荧光猝灭面积差表示为
Trolox当量(TE)，单位为 μmol TE /g。
1.2.5.2 DPPH 自由基清除能力 参考 Brand －
Williams等［9］的方法并加以改进:用无水乙醇配制
200 μmol /L的 DPPH工作液，将 1 mL样品溶液加入
到3 mL DPPH工作液中，摇匀，室温下避光反应20 min
后于 517 nm下测定吸光值 Ai，无水乙醇代替 DPPH扣
228
除样品溶液的本底吸收，吸光值为 Aj，用相同体积的样
品溶剂代替样品溶液作为对照，吸光值为 A0。同时用
相同浓度的 VC 作为控制对照组，计算公式为:
清除率(%)=［1－(Ai－Aj)/A0］× 100 式(3)
1.2.5.3 ABTS自由基清除能力 参考 Ｒe 等［10］的方
法并加以改进:5 mL 7 mmol /L的 ABTS溶液和 5 mL
2.45 mmol /L的 K2S2O8 溶液避光反应 12 h 生成
ABTS +使用液，该使用液提前一天配制，且必须当天
使用，使用前用无水乙醇稀释到吸光值在 732 nm 处
为 0.70 ± 0.02。取 0.4 mL 不同浓度的样品溶液于试
管中，加入 3 mL ABTS +·使用液，室温下避光反应
30 min，于 732 nm 处测定吸光值 Ai，无水乙醇代替
ABTS +·扣除样品溶液的本底吸收，吸光值为 Aj，用相
同体积的样品溶剂代替样品溶液作为对照，吸光值为
A0。同时用相同浓度的 VC 作为控制对照组，计算方法
参考式(3)。
1.2.6 聚酰胺树脂纯化黄酮 将处理好的聚酰胺树
脂装入层析柱(Φ 6.0 ×80 cm)内。称取10 g黄酮粗提
物用 70%乙醇进行溶解，湿法装柱，柱平衡后，先用 8
倍柱体积的蒸馏水洗去水溶性杂质，然后用 10 倍柱体
积的 70%乙醇进行洗脱，流速为 2 mL /min，每 250 mL
收集一瓶，洗脱完成后合并洗脱液，减压旋蒸浓缩，冷
冻干燥，得黄色粉末，室温下置于干燥器内备用。
1.3 数据分析处理
所有实验重复 3 次，采用 Design－ Expert.8.05b、
Origin 9.0 64 位和 SPSS 17.0 软件对数据进行作图和
统计分析。
2 结果与讨论
2.1 单因素实验结果
乙醇浓度对总黄酮得率和 OＲAC 值的影响如图
1A所示，乙醇浓度为 80%时总黄酮得率达到最大
值，浓度小于 80%时，得率随乙醇浓度的增加而增
大，浓度大于 80%时得率反而降低;乙醇浓度小于
70%时 OＲAC值随浓度的增加而升高，在 70%处达到
最大值，70%～90%范围内反而降低，这是因为不同浓
度乙醇极性不同，随着乙醇浓度的增大脂溶性物质溶
出增多，使得黄酮化合物等有效成分溶出减少，活性降
低，故选取 70%作为响应面实验的一个中心点。
料液比对总黄酮得率和 OＲAC 值的影响如图 1B
所示，料液比从 1∶ 5(g /mL)上升到 1∶ 25(g /mL)的过
程中，随着料液比的增大，得率和 OＲAC 值均明显增
大，1∶ 25(g /mL)之后，随着料液比的继续增大，两者均
增长缓慢，但能耗及成本会随溶剂用量的增大而增加，
这说明加大提取溶剂的用量只能在一定程度上提高得
率和抗氧化活性，且考虑到生产成本及后期处理等因
素，不宜过度增加提取溶剂的用量，故料液比选在
1∶ 15～1∶ 35(g /mL)范围内。
提取时间对总黄酮得率和 OＲAC 值的影响如图
1C所示，超声时间从 10 min 延长至 45 min 的过程
中，得率和 OＲAC值均有明显的升高，在 45 min时达
到最大值，45 min后又均呈下降趋势，这可能是因为
随着时间的延长，黄酮化合物等活性物质结构遭到
破坏，故选取 45 min作为响应面的另一个中心点。
提取温度对总黄酮得率和 OＲAC 值的影响如图
1D所示，得率和 OＲAC 值在 50 ℃时达到最大值，
50～80 ℃范围内，随着温度的升高，得率和 OＲAC 值
呈明显下降趋势，这可能是因为高温使溶剂粘度降
低，分子运动加快，从而加快生物活性物质的溶出，
但温度过高会使得热敏性化合物降解为小分子化合
物，导致得率和 OＲAC值降低。
图 1 不同提取条件对总黄酮得率和 OＲAC值的影响
Fig.1 Effects of different extraction parameters
on total flavonoid yield and OＲAC values
2.2 响应面优化结果分析
2.2.1 总黄酮得率和 OＲAC 的优化结果 根据实验
结果建立以下模型:
总黄酮得率(mg ＲE /g)Y1 = + 49.16 －0.23A +
0.51B + 0.33C－ 0.38D + 0.32AB + 0.22AC－ 0.75AD－
0.37BC － 0.10BD － 0.68CD － 2.18A2 － 1.45B2 － 1.25C2
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－1.97D2
OＲAC(μmol TE /g)Y2 = + 2848.83 － 36.96A +
42.07B + 2.91C－9.22D + 0.56AB－102.80AC－58.72AD
+ 5.81BC － 14.49BD + 14.70CD － 235.88A2－ 98.97B2－
151.84C2－318.20D2
式中:A为乙醇浓度(%)，B 为料液比(g /mL)，
C为提取时间(min)，D为提取温度(℃)
由表 3 可知，总黄酮得率和 OＲAC模型的 p值均
小于 0.0001，失拟项 p 值均大于 0.05，表明这两个模
型均较显著。通过对两个模型的可信性分析，其决
定系数 Ｒ2 分别为 0.9444 和 0.9323，表明模型拟合度
好;校正决定系数分别为 0.8888 和 0.8647，说明有
88.88%和 86.47%的实验点可分别由这两个模型来解
释;精度分别为 14.648 和 12.795，表明模型准确度高，
模型可靠。对于总黄酮得率模型来说，一次项 B、C、
D，交互项 AD、CD和二次项 A2、B2、C2、D2 对其影响均
显著(p ＜ 0.05);而对于 OＲAC 模型来说只有交互项
AC和二次项 A2、B2、C2、D2 影响显著(p ＜0.05)。
表 2 超声提取辣木叶黄酮的响应面方案
Table 2 Design of response surface of
flavonoids from Moringa stenopetala leaves
实验号 A B C D
总黄酮得率
(mg ＲE /g)
OＲAC值
(μmol TE /g)
1 1 2 2 3 45.78 2419.43
2 3 2 1 2 44.91 2557.69
3 1 2 3 2 46.36 2622.56
4 3 2 2 3 44.25 2232.37
5 1 2 1 2 46.1 2418.28
6 2 2 2 2 49.04 2877.49
7 2 2 3 3 44.55 2330.1
8 1 3 2 2 45.57 2604.24
9 1 1 2 2 45.3 2447.62
10 3 1 2 2 44.06 2360.59
11 2 2 2 2 48.53 2829.86
12 3 2 3 2 46.06 2350.77
13 3 2 2 1 46.29 2297.09
14 2 2 1 3 45.49 2343.58
15 2 2 3 1 46.94 2322.57
16 2 3 3 2 47.35 2679.68
17 3 3 2 2 45.6 2519.44
18 2 3 1 2 47.22 2606.41
19 2 2 2 2 49.49 2740.62
20 2 1 2 3 45.1 2422.15
21 2 1 3 2 46.98 2587.61
22 2 2 1 1 45.17 2394.87
23 2 2 2 2 49.95 2984.5
24 2 3 2 1 46.86 2522.59
25 2 1 1 2 45.36 2537.57
26 1 2 2 1 44.81 2249.28
27 2 3 2 3 45.92 2407.43
28 2 2 2 2 48.79 2811.69
29 2 1 2 1 45.63 2479.35
2.2.2 各因素对总黄酮得率和 OＲAC 值的交互作
用 乙醇浓度和提取温度对总黄酮得率有显著的交
图 2 乙醇浓度、料液比、提取时间和提取温度
对总黄酮得率和 OＲAC值的交互影响
Fig.2 Interaction effects between ethanol concentration，
solid / liquid ratio，time and temperature on the
total flavonoid yield and OＲAC values
互作用，如图 2a所示，当乙醇浓度一定时，总黄酮得
率随提取温度的升高先明显上升，在 50 ℃时达到最
大值，从 50 ℃上升至 60 ℃的过程中又呈明显降低
趋势，这可能是因为超声温度过高使黄酮化合物等
有效成分的结构遭到破坏，导致得率降低;当提取温
度一定时，总黄酮得率随乙醇浓度的增加呈先升高
后降低的趋势，这可能是因为不同浓度乙醇极性不
同，乙醇浓度过高使其他脂溶性成分增多，影响黄酮
化合物的有效溶出。
提取时间和提取温度对总黄酮得率有显著的交
互作用，如图 2b所示，当提取温度一定时，总黄酮得
率随提取时间的延长先快速升高后有所降低，在
48 min时达到最大值，这可能是因为延长超声时间，
黄酮化合物的结构遭到破坏，使得得率降低;当提取
时间一定时，总黄酮得率随提取温度的升高先上升
后下降，这说明在超声辅助提取中合适的提取时间
和温度可提高总黄酮得率。
乙醇浓度和提取时间对 OＲAC 值有显著的交
230
表 3 辣木叶总黄酮得率和 OＲAC值回归分析结果
Table 3 Analysis of variance for response surface quadratic model of flavonoid yield and OＲAC
项目 平方和 自由度 均方 F值 p值 显著性
总黄酮得率模型 65.14 14 4.65 16.99 ＜ 0.0001 显著
A 0.63 1 0.63 2.30 0.1515
B 3.09 1 3.09 11.29 0.0047 显著
C 1.33 1 1.33 4.85 0.0450 显著
D 1.77 1 1.77 6.47 0.0234 显著
AB 0.40 1 0.40 1.47 0.2450
AC 0.20 1 0.20 0.72 0.4094
AD 2.27 1 2.27 8.27 0.0122 显著
BC 0.56 1 0.56 2.03 0.1764
BD 0.042 1 0.042 0.15 0.7011
CD 1.84 1 1.84 6.71 0.0214 显著
A2 30.81 1 30.81 112.54 ＜ 0.0001 显著
B2 13.58 1 13.58 49.61 ＜ 0.0001 显著
C2 10.21 1 10.21 37.29 ＜ 0.0001 显著
D2 25.10 1 25.10 91.66 ＜ 0.0001 显著
残差 3.83 14 0.27
失拟项 2.55 10 0.26 0.80 0.6506 不显著
净误差 1.28 4 0.32
总离差 68.97 28
Ｒ2 = 0.9444，Ｒ2Adj = 0.8888，Adeq Precisior = 14.648，C.V.% = 1.13
OＲAC值模型 9.891E + 005 14 70649.09 13.78 ＜ 0.0001 显著
A 16388.21 1 16388.21 3.20 0.0955
B 21243.67 1 21243.67 4.14 0.0612
C 101.45 1 101.45 0.020 0.8901
D 1021.02 1 1021.02 0.20 0.6623
AB 1.24 1 1.24 2.424E－004 0.9878
AC 42271.77 1 42271.77 8.24 0.0123 显著
AD 13790.98 1 13790.98 2.69 0.1233
BC 134.91 1 134.91 0.026 0.8735
BD 839.84 1 839.84 0.16 0.6918
CD 864.95 1 864.95 0.17 0.6875
A2 3.609E + 005 1 3.609E + 005 70.38 ＜ 0.0001 显著
B2 63532.11 1 63532.11 12.39 0.0034 显著
C2 1.496E + 005 1 1.496E + 005 29.16 ＜ 0.0001 显著
D2 6.568E + 005 1 6.568E + 005 128.08 ＜ 0.0001 显著
残差 71791.46 14 5127.96
失拟项 39115.07 10 3911.51 0.48 0.8427 不显著
净误差 32676.39 4 8169.10
总离差 1.061E + 006 28
Ｒ2 = 0.9323，Ｒ2Adj = 0.8647，Adeq Precisior = 12.795，C.V.% = 2.85
互作用，如图 2c所示，乙醇浓度小于 70%时，OＲAC
值随提取时间的延长先明显上升后略有下降，当乙
醇浓度大于 70%时则随时间延长先略有上升后明
显降低，这表明在超声辅助提取过程中过度延长超
声时间可能会起反作用;当提取时间一定时，OＲAC
值随乙醇浓度的升高先增大后降低，在 70%时达到
最大值，这说明适当增加乙醇浓度可促进黄酮化合
物等有效成分溶出，提高其抗氧化性。
故过度增加乙醇浓度和用量，过度延长超声时
间、升高超声温度均不能提高得率和抗氧化活性。
2.2.3 最优提取条件 综上分析，响应面模型预测
得出的最优提取条件为:乙醇浓度 69.45%，料液比
1∶ 26.82(g /mL)，提取时间 46.07 min，提取温度 49.48 ℃，
此条件下总黄酮得率和 OＲAC 值均达到最大值，分
别为 49.23 mg ＲE /g，2853.99 μmol TE /g。为验证预
测模型的可信性和准确性，对预测模型的最优条件
进行验证，并比较真实值和预测值的符合程度。结
合实际可操作性，将最优工艺条件修正为:乙醇浓度
231
70%，料液比 1∶ 27(g /mL)，提取时间 46 min，提取温
度50 ℃，此条件下总黄酮得率和 OＲAC 值分别为
(48.93 ±0.44)mg ＲE /g、(2747.17 ±301.51)μmol TE /g，
与预测值(49.23 mg ＲE /g，2853.99 μmol TE /g)的误
差为 0.6%和 3.7%。因此，采用响应面法优化辣木叶
黄酮的提取工艺具有较好的可行性。
2.3 最优条件下粗提物及纯化后黄酮的含量及其
DPPH自由基和 ABTS自由基清除能力的变化
最优条件下超声提取辣木叶黄酮，并取部分提
取物过聚酰胺柱进行纯化，测定其纯化前后对 DPPH
和 ABTS自由基的清除能力，以 VC 为阳性对照。
70%乙醇洗脱部位得率为 17.44%，纯化前后黄
酮化合物的含量分别为 21.90%和 65.89%，氧自由基
吸收能力(OＲAC)分别为 2747.17、5923.48 μmol
TE /g，其对 DPPH和 ABTS自由基的清除能力如图 3
所示，辣木叶黄酮对 DPPH和 ABTS 自由基的清除能
力随浓度的增加而增大，呈剂量依赖性。纯化前后
黄酮浓度从 0.05 上升到 0.5 mg /mL的时候，DPPH自
由基清除率分别从 5.35%和 8.47%上升到 53.78%和
78.75%，当样品浓度为 1 mg /mL 的时候，其对 DPPH
自由基的清除率为 85.93%和 91.59%，略低于同浓度
下 VC 的清除能力;ABTS 自由基清除率分别从
19.85%和 32.25%上升到 99.41%和 99.73%，当样品
浓度为 0.5 mg /mL的时候，其对 ABTS自由基的清除
能力为 99.41%和 99.35%，与同浓度下 VC 的清除能
力相 当。经 计 算，其 DPPH 的 EC50 值 分 别 为
0.45 mg /mL和 0.10 mg /mL，ABTS 的 EC50值分别为
0.26 mg /mL和 0.05 mg /mL。
图 3 辣木叶黄酮纯化前后对 DPPH
和 ABTS自由基的清除能力(n = 3)
Fig.3 DPPH and ABTS radical scavenging activities of
crude and purified flavonoids(n = 3)
3 结论
采用 Box－Behnken 结合响应面分析法优化超声
辅助提取辣木叶黄酮，最佳提取条件为:超声功率
300 W，乙醇浓度 70%(v /v)，料液比 1 ∶ 27(g /mL)，
提取时间 46 min，提取温度 50 ℃，在此条件下，总黄
酮得率为 (48.93 ± 0.44)mg ＲE /g，OＲAC 值为
(2747.17 ± 301.51)μmol TE /g，与预测值(49.23 mg
ＲT /g，2853.99 μmol TE /g)的误差为 0.6%和 3.7%，
表明优化超声辅助提取辣木叶黄酮的提取工艺具有
较好的可适用性。辣木叶黄酮粗提物具有很强的清
除 DPPH 和 ABTS 自由基能力，其 EC50值分别为
0.45 mg /mL和 0.10 mg /mL;聚酰胺树脂纯化后，其黄
酮含量和 OＲAC分别为65.89%和 5923.48 μmol TE /g，
EC50值分别为 0.26 mg /mL 和 0.05 mg /mL，表明聚酰
胺树脂能够有效地提高辣木叶提取物的黄酮的含量
和抗氧化性。
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