全 文 ：云 南 中 医 中 药 杂 志
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3. 2. 5 样品含量测定 见表 2。
表 2 伤风颗粒样品测定结果
样品序号
苦杏仁苷(mg /g)
第一次测定结果 第二次测定结果 平均值
1 3. 215 3. 289 3. 252
2 2. 727 2. 709 2. 718
3 3. 081 3. 083 3. 082
4 2. 811 2. 771 2. 791
5 3. 687 3. 694 3. 6905
6 2. 708 2. 710 2. 709
7 2. 815 2. 820 2. 818
8 2. 726 2. 790 2. 758
9 2. 462 2. 467 2. 465
10 2. 889 2. 896 2. 893
10 批样品测定含量的平均值 2. 918(mg /g)，考虑不同植
物来源含量的差异，及大规模生产提取率可能还会降低等因
素，按 10 批平均值的 80%计算为 2. 33(mg /g)，苦杏仁苷含量
应不低于 2. 33(mg /g)。
4 结果与讨论
将伤风冲剂剂型该为颗粒剂型是在工艺、质量控制方面
是可行，剂型改变后降低了患者的服糖量。有利于发挥药物
的疗效。
方中重用防风、荆芥子祛风解表共为君药。但工艺只提
取其挥发油，他们的指标成分无法检测。
本实验考察了不同溶剂的提取率，分别用丙酮、乙酸乙
酯、甲醇、乙醇超声提取 20min，丙酮、乙酸乙酯不能完全提取，
乙醇提取杂质较甲醇少，但不能完全提取。甲醇提取最充分，
选用甲醇为提取溶剂。
参考文献:
［1］中华人民共和国卫生部药典委员会 . 中华人民共和国卫生部药品
标准(中药成方制剂第 1 册)［S］． 1998:45.
［2］中国药典［S］．(一部)2005:144.
［3］胡爽，袁丹，刁桂芬，等 . 苦杏仁药材质量评研究［J］．中国中药杂
志，2002，27(10):735.
(收稿日期:2015 － 04 － 26)
作者简介:田妍妍(1992 －)，女，在读硕士研究生，研究方向:生药活性成分与质量评价，E － mail:TianYansq@ 163. com
△通信作者:李萍，Tel:025 － 85391244，E － mail:liping2004@ 126. com
羊耳菊药材中 3，5 －O －二咖啡酰基奎宁酸的含量测定
田妍妍1，2，周桂荣2，霍志鹏2，逄小倩2，何 毅2，李 萍1△
(1. 中国药科大学 天然药物活性组分与药效国家重点实验室，江苏 南京 210009;
2. 天士力制药集团股份有限公司研究院 现代中药研究所，天津 300410)
摘要:目的 建立羊耳菊药材中 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸的 HPLC 含量测定方法，为其质量控制和运用提供依据。
方法 采用 Agilent ZOＲBAX SB － C18 色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，以乙腈 － 0. 1%磷酸水(17∶ 83)为流动相等度洗脱，检测
波长 329 nm，柱温 40 ℃，流速 1. 0 mL /min。结果 测定了 20 批不同产地的羊耳菊药材，3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸的含量在
0. 12% ～ 0. 65%之间。结论 该方法简便、准确、重复性好，可用于羊耳菊药材的质量评价。
关键词:羊耳菊;3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1007 － 2349(2015)10 － 0066 － 03
羊耳菊 Inula cappa(Buch. － Ham. )DC 为菊科 Compositae
旋覆花属 Inula L植物，亚灌木，主要分布于我国四川、云南、
贵州、广西、广东、江西、湖南、福建、浙江等地，全草或根可供
药用，有除痰定喘、疏风散寒、解毒消肿、活血调经及治跌打损
伤等作用［1］，可用于感冒发热，咽喉肿痛，风湿疼痛等［2］。
国内外报道分离的羊耳菊化学成分已有 100 余种，主要包
括萜类、有机酸类、黄酮类、挥发油类等类型［3 －6］。3，5 －O －二
咖啡酰基奎宁酸具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化等诸多药理
作用［7］，本研究采用 HPLC 法测定了羊耳菊药材中3，5 － O －
二咖啡酰基奎宁酸的含量，以期为羊耳菊药材的质量控制提
供方法和依据。
1 材料
1. 1 仪器 waters 2695 系列高效液相色谱仪(美国Waters 公
司)，Milli － Q 型超纯水系列(美国 Millipore 公司)，XS －
66 2015 年第 36 卷第 10 期
DOI:10.16254/j.cnki.53-1120/r.2015.10.033
云 南 中 医 中 药 杂 志
205DU型 1 /10 万分析天平(瑞士梅勒特 －托利多公司)
1. 2 试药 乙腈、甲醇(色谱纯，美国 Merck 公司)，乙醇(分
析纯，天津市康科德科技有限公司)，磷酸(色谱纯，天津市光
复精细化工研究所)，水为自制超纯水。3，5 － O －二咖啡酰基
奎宁酸对照品(批号 111782 － 201204，纯度 94. 2%)购自中国
食品药品检定研究院，20 批羊耳菊药材于 2013 年 － 2015 年
采集于云南，广东，广西，贵州四省(表 1)，并经中国药科大学
李萍教授鉴定为植物羊耳菊 Inula cappa(Buch. － Ham. )DC
的新鲜或干燥全草。
表 1 羊耳菊药材产地、部位、采收时间明细
No. 产地 药材部位 采收时间
1 云南省西双版纳勐海县 全草 2013. 11. 20
2 云南省西双版纳勐海县星火山村 全草 2013. 11. 27
3 云南省普洱市思茅区 全草 2013. 12. 18
4 云南省玉溪市元江县 全草 2014. 01. 02
5 广东省云浮市 全草 2014. 01. 18
6 广西省崇左市宁明县 全草 2013. 10. 30
7 贵州省黔南布依族苗族自治州罗甸县 全草 2013. 08. 08
8 贵州省商品药材 全草 2013. 10. 10
9 贵州省黔南布依族苗族自治州三都水族自治县 全草 2013. 10. 20
10 贵州省黔南布依族苗族自治州独山县 全草 2013. 10. 20
11 贵州省黔南布依族苗族自治州荔波县 全草 2013. 10. 20
12 贵州省黔南布依族苗族自治州惠水县 全草 2014. 05. 22
13 贵州省黔南布依族苗族自治州长顺县 全草 2014. 05. 22
14 贵州省黔西南布依苗族自治州贞丰县 全草 2014. 05. 22
15 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 2014. 12. 09
16 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 2014. 12. 26
17 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 2015. 01. 12
18 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 2015. 01. 29
19 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 2015. 02. 13
20 贵州省黔南布依族苗族自治州龙里县 全草 2015. 03. 12
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent ZOＲBAX SB － C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)，流动相为乙腈:0. 1%磷酸水(17:83)，流速
1 ml /min，检测波长 329 nm，柱温 40 ℃，进样量 10 μL。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液 精密称取 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸
对照品 11. 78 mg置 50 mL棕色容量瓶中，加入甲醇溶解并稀
释至刻度，摇匀，得 0. 2219 mg /mL的对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液 精密称取羊耳菊粉末(过四号筛)约
1. 0 g，置 60 mL 索氏提取器中，加入 120 mL 甲醇，加热回流
4 h，提取液浓缩至约 10 mL，放冷，移入 25 mL容量瓶中，用甲
醇稀释至刻度，摇匀，5000 r /min，20 ℃下离心 10 min，吸取上
清液，即得。
2. 3 系统适应性试验 按照 2. 1 项下的色谱条件，吸取 3，5
－ O －二咖啡酰基奎宁酸对照品溶液，供试品溶液进样测定，
色谱图见图 1。理论板数按 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸峰计
≥5000，供试品色谱图中 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸的保留
时间与对照品相应的保留时间一致，与其他组分峰的分离度
大于 1. 5。
A. 对照品;B. 供试品;1. 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸
图 1 羊耳菊 HPLC图
2. 4 线性关系考察 精密吸取 2. 2 项下的对照品溶液 0. 5，
1，2. 5，5 mL置于 10 mL棕色容量瓶中，分别加入甲醇溶液稀
释至刻度，摇匀，将 5 个不同浓度级别的对照品按 2. 1 项下色
谱条件进样测定，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，
绘制工作曲线。结果表明，3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸进样
量在 0. 1110 μg － 2. 219 μg与峰面积成良好的线性关系，回归
方程为 Y =3949931X － 28863，Ｒ2 = 0. 9999。
2. 5 精密度试验 精密称取 6 号羊耳菊样品粉末约 1. 0 g，
按 2. 2 项下供试品溶液制备方法制得供试品，按 2. 1 项下色
谱条件，连续进样 6 次，得 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸峰面积
的 ＲSD值为 0. 21%，表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 精密称取 6 号羊耳菊样品粉末约 1. 0 g，
按 2. 2 项下供试品溶液制备方法制得供试品，按 2. 1 项下色
谱条件，分别于 0、2、4、8、12、24 h进样，测得 3，5 － O －二咖啡
酰基奎宁酸峰面积的 ＲSD值为 1. 15%，表明供试品溶液在 24
h内稳定。
2. 7 重复性试验 精密称取 6 号羊耳菊样品粉末 6 份，各约
1. 0 g，按 2. 2 项下供试品溶液制备方法制得供试品，按 2. 1 项
下色谱条件进样检测，测得 6 份平行样品中 3，5 － O －二咖啡
酰基奎宁酸含量的 ＲSD 值为 0. 46%，表明本方法重复性
良好。
2. 8 加样回收试验 精密称取 6 号羊耳菊样品粉末(重复性
762015 年第 36 卷第 10 期
云 南 中 医 中 药 杂 志
试验测得 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸的含量为 0. 1661%)6
份，各约 0. 5 g，分别加入 2. 2 项下的对照品溶液 4 mL，并按
2. 2 项下供试品溶液制备方法制得供试品，按 2. 1 项下色谱条
件进样检测，结果见表 2。
表 2 3，5 －O －二咖啡酰基奎宁酸加样回收率
No.
称样量
/ g
样品中含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
ＲSD
/%
1 0. 4975 0. 8263 0. 8876 1. 7145 100. 07
2 0. 5070 0. 8421 0. 8876 1. 7313 100. 19
3 0. 5075 0. 8430 0. 8876 1. 7352 100. 55
100. 30 0. 47
4 0. 5070 0. 8421 0. 8876 1. 7391 101. 11
5 0. 4955 0. 8230 0. 8876 1. 7116 100. 12
6 0. 4985 0. 8280 0. 8876 1. 7137 99. 77
2. 9 样品测定 取各产地羊耳菊样品粉末，按 2. 2 项下供试
品溶液制备方法制得供试品，按 2. 1 项下色谱条件测定，用外
标法计算不同产地羊耳菊样品中 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁
酸的百分含量，测定结果见表 3。
表 3 不同产地羊耳菊中 3，5 －O －二咖啡酰基奎宁酸的百分含量
No. 产地
药材
部位
3，5 －O －二咖啡酰
基奎宁酸含量(%)
1 云南省西双版纳勐海县 全草 0. 41
2 云南省西双版纳勐海县星火山村 全草 0. 27
3 云南省普洱市思茅区 全草 0. 22
4 云南省玉溪市元江县 全草 0. 35
5 广东省云浮市 全草 0. 44
6 广西省崇左市宁明县 全草 0. 17
7 贵州省黔南布依族苗族自治州罗甸县 全草 0. 26
8 贵州省商品药材 全草 0. 13
9 贵州省黔南布依族苗族自治州三都水族自治县 全草 0. 12
10 贵州省黔南布依族苗族自治州独山县 全草 0. 12
11 贵州省黔南布依族苗族自治州荔波县 全草 0. 29
12 贵州省黔南布依族苗族自治州惠水县 全草 0. 20
13 贵州省黔南布依族苗族自治州长顺县 全草 0. 18
14 贵州省黔西南布依苗族自治州贞丰县 全草 0. 20
15 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 0. 47
16 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 0. 65
17 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 0. 29
18 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 0. 45
19 贵州省黔东南苗族侗族自治州雷山县 全草 0. 54
20 贵州省黔南布依族苗族自治州龙里县 全草 0. 30
3 讨论
预实验分别考察了加热回流、超声提取、索氏提取三
种提取方式，二纯水、甲醇、乙醇 3 种提取溶剂，2、3、4 h 3
种提取时间的提取效率，结果表明以甲醇为提取溶剂，经
索氏提取 4 h 后 3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸的含量最高。
预实验比较了甲醇 －水，乙腈 －水等流动相系统，从分
离情况和出峰时间等综合分析，选择乙腈 － 0. 1% 磷酸溶
液以 17:83 等度洗脱，分离度较好，峰形对称且保留时间
适中。
通过紫外光谱扫描，3，5 － O －二咖啡酰基奎宁酸甲醇
溶液在 329 nm 处有最大吸收，因此选择 329nm 为检测
波长。
本实验对不同产地羊耳菊中 3，5 － O － 二咖啡酰基奎
宁酸的含量进行比较，20 批不同产地羊耳菊中 3，5 － O －
二咖啡酰基奎宁酸的含量在 0. 12% ～ 0. 65%之间，这种含
量差异可能与羊耳菊产地生态环境，采收时间等因素有
关。如果要更加全面的考察不同产地羊耳菊中 3，5 － O －
二咖啡酰基奎宁酸的含量，仍需要采集更多，更具代表性
的样品进行深入研究。
本实验采用高效液相色谱法对羊耳菊中 3，5 － O － 二
咖啡酰基奎宁酸进行含量测定，具有快速，准确，灵敏度高
的特点，为羊耳菊的深入研究与开发提供了参考，也为羊
耳菊质量控制提供了理论依据。
参考文献:
［1］中国科学院《中国植物志》编辑委员会 . 中国植物志［M］． 北京:
科学出版社，1979，75:271.
［2］贵州省药品监督管理局 . 贵州省中药材、民族药材质量标准［M］．
贵阳:贵州科技出版社，2003:176.
［3］胡琳，贺正山 . 羊耳菊化学成分和药理活性研究进展［J］．中国现
代应用药学，2012，29(10):889 － 894.
［4］杨雁，王于方，赵雷，等 . 羊耳菊花的化学成分研究［J］． 中草药，
2011，42(6):1083 － 1086.
［5］谢红刚，张宏武，张江，等 . 羊耳菊的化学成分［J］．中国天然药物，
2007，5(3):193 － 196.
［6］郭启雷，杨峻山 . 羊耳菊的化学成分研究(Ⅱ)［J］．中药材，2007，
30(1):35 － 37.
［7］李祖晟，朱志安 . 二咖啡酰奎宁酸药理实验研究进展［J］．医学综
述，2004，10(4):249 － 251.
(收稿日期:2015 － 07 － 06)
86 2015 年第 36 卷第 10 期