全 文 ：实验 研究
＊成都中医药大学 (610075)
2008年 7月 16日收稿
菜提取物体外抗菌活性研究
谌立巍＊　陈思敏＊　吴小唯＊　严铸云＊
摘　要:目的:研究 菜提取物对金色葡萄球菌 ATCC25923 、 大肠埃希菌ATCC25922 、 铜绿假单胞菌 ATCC27853 的体外抗
菌作用。方法:采用试管二倍稀释法测定 菜提取物的最低抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度 (MBC);利用琼脂扩散法测
定 菜提取物的抑菌圈大小判断其抑菌活性。结果:本品对所试金色葡萄球菌 、 大肠埃希菌 、 铜绿假单胞菌的 MIC 分别为
7.8 、 15.6 和 62.5mg/ ml , MBC 值分别为 62.5 、 >500 和 125 mg/ ml; 菜提取物在高浓度 (原液浓度及原液稀释 1/2 、 1/
4)时有抑菌环 , 抑菌环直径在 12-16mm。结论:本品具有一定的抗菌活性 , 对所试金葡菌和铜绿假单胞菌的 MBC 值约为
其 MIC 值的 8 倍和 2 倍 , 表明本品在高于 MIC 值 8 倍和 2 倍时分别对所试金色葡萄菌和铜绿假单胞菌呈现出杀菌作用 , 而
对所试大肠埃希菌的 MBC 值为其 MIC 值的 32 倍以上 , 表明本品对所试大肠埃希菌主要为抑菌作用。
关键词: 菜;金色葡萄球菌;大肠埃希菌;铜绿假单胞菌;抗菌活性
中图分类号:R916.693　　文献标识码:B　　文章编号:1006-0979 (2008)10-0031-02
Disquisition of External Anti-bacterial Activeness of the Distillate of the Rorippa
SHEN Li-wei　CHEN Sim-in ;WU xiao-wei　Y AN Zhu-yun
(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine ChengDu , 610075)
Abstract:OBJECTIVE:To Research into the ex ternal anti-bacterial activeness of distillate of the rorippa toward staphylococcus
aureus ATCC25923 , Escherichia coli ATCC25922 , pseudomonas aeruginosa ATCC27853.METHODS:To mensurate the M IC and
the MBC of the distilla te of rorippa by cuvette 2-fold dilution.To mensurate the diameter of haloes of the distillate of ro rippa and esti-
mate the anti-bacterial activeness of them by agar diffusion method.RESULTS:MIC toward staphy lococcus aureus , E.coli and
pseudomonas aeruginosa are respectively 7.8 , 15.6 and 62.5mg/ ml;MBC are respectively 62.5 , 500 and 125 mg/ml.There exist
haloes w hen the distillate of ro rippa is at high concentrations(concentration of the o riginal distillate o r 2-fold/ 4-fold diluted concen-
tration)and the diameters of haloes range from 12-16 mm.CONCLUSION:The distillate owns definite anti-bacterial activeness.
Its MBC are respectively 8 times and 2 times of the M IC tow ard staphylococcus aureus and pseudomonas aeruginosa.This indicates that
the distillate presents sterilization effect respectively tow ard staphy lococcus aureus or pseudomonas aeruginosa w hen it is at higher con-
centrations w hich are 8 times or 2 times of the M IC.Its MBC is 32 times upwards of the M IC toward E.coli and this shows the distil-
la te mostly presents inhibition effect tow ard E.co li.
Key Words:ro rippa, staphylococcus aureus , Escherichia coli , pseudomonas aeruginosa , anti-bacterial activeness
　　 菜为十字花科 菜属植物 菜 Rorippa Montana
(wall.)Small的全草 , 又名野油菜 , 民间常用。 5 -7 月采
收 , 鲜用或晒干入药。全草均含 菜素。 据 《本草纲目》 记
载:“利胸隔 , 豁冷痰 , 心腹痛。” 又有 《分类草药性》 记
载:“治刀砍斧伤 , 烂疮 , 生肌 , 嚼涂。” 该药物味辛 , 微
甘 , 性凉。主要功能有解表清热 , 祛痰止咳 , 利湿 , 解毒 ,
用于:感冒发热 , 麻疹透发不畅;急 , 慢性气管炎 , 咳嗽痰
多 , 气喘;湿热黄疸 , 水肿 , 小便不利;外治痈肿 , 烫火
伤 , 毒蛇咬伤。此外 , 还可用于风湿痛 , 胃痛等症。本实验
是在民间使用实践的基础上 , 利用体外细菌敏感性实验探讨
菜提取物对金色葡萄球菌 ATCC25923、 大肠埃希菌
ATCC25922 、 铜绿假单胞菌 ATCC27853 三种细菌的体外抗
菌活性。
1　实验材料与方法
1.1　材料
1.1.1　 菜提取物: 菜 Rorippa Montana(wall.)Small购
312008年 10期
DOI :10.16040/j.cnki.cn15-1101.2008.19.016
于五块石中药材市场 , 由成都中医药大学标本中心卢先明教
授鉴定取晒干的 菜 , 捣碎至粗粉状。 取 菜粗粉 100g , 加
水 1000ml , 煮沸 15min(以煎液煮沸开始计时), 滤过 , 滤液
浓缩至5ml , 加无水乙醇 15ml , 滤过 , 滤液水浴挥醇 , 干燥后
即得受试药物粉末。
1.1.2　阳性对照药:青霉素钠 (批号:20050109 规格:80
万单位/瓶 四川制药股份有限公司提供)
1.1.3　实验用菌种:金葡球菌 ATCC25923、 大肠埃希菌
ATCC25922 、 铜绿假单胞菌 ATCC27853 共计 3 株 , 由四川
省抗菌素工业研究所有限公司提供 , 并经该所实验室采用
API 方法及常规方法重新鉴定后使用。
1.1.4　培养基:M-H 琼脂培养基:批号 CM0337B;M-H
肉汤培养基:批号 CM0405B;均由 OXOID公司生产。
1.2　方　法
1.2.1　培养基的配置:M -H 肉汤培养基:称取 M -H 培
养基粉末 25g加 1000ml蒸馏水加热溶解 、 分装 , 116℃高压
灭菌 20 分钟后备用;M -H 固体培养基:称取 M-H 培养
基粉末 36g , 加 1000ml蒸馏水加热溶解 、 分装 , 116℃高压
灭菌 20 分钟后备用。
1.2.2 　 菌 液 的 制 备:将 已 经 鉴 定 后 的 金 葡 球 菌
ATCC25923、 大肠 埃希菌 ATCC25922 、 铜绿假 单胞菌
ATCC27853分别用 4ml生理盐水稀释为 0.5#麦氏比浊管的
浓度 (108CFU/ ml)备用。
1.2.3　最低抑菌浓度 (MIC)和最低杀菌浓度 (MBC)的
测定:采用试管二倍稀释法测定 菜粉对受试菌株的最低抑
菌浓度 (M IC)。精确称取上述制剂研磨后 , 加二甲基亚砜
助溶 , 然后加水配制成最高浓度 500mg/ ml , 然后对半稀释 ,
制成含药终浓度为 500mg/ ml , 250 , 125 , 62.5 , 31.2 ,
15.6 , 7.8 , 3.9 , 2.0 , 1.0mg/ ml 共 10 个浓度受试药液 ,
取灭菌试管编号后 , 分别吸取 2ml上述药液依次加入各试管
内 , 再分别于各试管内加入待测菌液 0.2ml , 使加入菌液终
浓度为 105CFU/ ml。同时设不加药液只加待测菌液 0.2ml
的细菌对照管及不加菌液的药物对照管。置入 37℃中培养
18-24 小时 , 观察结果。(细菌对照管生长 , 药物对照管无
细菌上长)以无细菌生长药物的最低浓度管为该菌的最低抑
菌浓度 (MIC)。 青霉素的终浓度为 128 , 64 , 32 ……
0.25μg/ ml , 相同方法检测 MIC。
将未见细菌生长管的培养液转种于无药琼脂平皿表面 ,
继续于 37℃培养 18 小时 , 仍未见细菌生长的药物最低浓度
为最低杀菌浓度 (MBC)。
1.2.4　琼脂扩散法测定抑菌圈:将要测试的菌悬液稀释至
0.5#麦氏比浊管的浓度 , 用无菌棉拭子蘸取试验菌液 , 在
M-H 琼脂培养基平板表面均匀涂抹一周。待菌液干后 , 放
上牛津小杯 , 分别滴加入不同浓度的待测样品 , 用瓦盖盖
好 , 置 37℃培养 18 小时 , 取出观察结果。若待测样品有抑
菌作用则牛津小杯周围形成透明的抑菌环 , 量取抑菌环大
小 , 根据抑菌环大小判断其抑菌活性 (抑菌环直径≥12mm ,
表明有抑菌作用)。
2　结果
2.1　 菜粉对所试菌株的体外抗菌作用:焊粉末对实验菌
株的最低抑菌浓度 (MIC)和最低抑菌浓度 (MBC)结果见
表 1 , 表 2。
表 1　 菜粉末的体外抑菌活性 (MIC)实验结果
菌号 MIC焊粉 (mg/ml) 青霉素 (μg/ml)
金色葡萄球菌 ATCC25923 7.8 <0.25
大肠埃希菌 ATCC25922 15.6 64
铜绿假单胞菌 ATCC27853 62.5 128
表 2　 菜粉末的体外杀菌活性 (MBC)实验结果
菌号 MIC焊粉 (mg/ml) 青霉素 (μg/ml)
金葡菌 ATCC25923 62.5 0.25
大肠埃希菌 ATCC25922 >500 >128
绿脓杆菌 ATCC27853 125 >128
2.2　琼脂扩散法 (抑菌环)测定结果:采用琼脂扩散法 ,
测定抑菌环 , 结果见表 3。
表 3　 菜粉末的抑菌环的测定结果
菜粉抑菌环 (mm) 青霉素抑菌环 (mm)
细菌
(菌号)(mg/ ml)含药浓度
药液稀释度原液 1/2 1/4 1/8 1/ 16 1/32 1/ 64 1/128
500 250 125 62.5 31.25 15.6 7.8 3.9 30μg/片
金葡 ATCC25923 16 14 14 - - - - - 24
大肠 ATCC25922 14 12 - - - - - - -
绿脓假单胞 ATCC27853 13 13 - - - - - - -
注:“ -” 表明无抑菌圈。
3　结论
由本次实验 结果表明: 菜粉末 对所试 金葡菌
ATCC25923、 大 肠 埃希 菌 ATCC 25922 和铜 绿 假单 胞菌
ATCC 27853 体外均呈现有一定抗菌活性, 其MIC 值依次是 7.8、
15.6和 62.5mg/ ml;MBC 依次是 62.5、 >500 和125mg/ ml。
琼脂扩散法测试结果表明本品在原液 、 原液稀释 1/ 2、
1/4 时 , 可观察到有抑菌环形成 , 抑菌环直径为 12-16mm。
4　讨论
4.1　本次试验结果表明 , 菜提取物具有一定的抑菌作用 ,
本品对所试金葡菌 ATCC25923和铜绿假单胞菌 ATCC27853
的 MBC 值约为其 M IC 值的 8 倍和 2 倍 , 表明本品在高于
MIC 值 8 倍和 2倍时分别对所试金葡菌和铜绿假单胞菌呈现
出杀菌作用 , 而对所试大肠埃希菌 ATCC25922 的 MBC 值
为其 MIC 值的 32 倍以上 , 表明本品对所试大肠埃希菌
ATCC25922 主要为抑菌作用。
4.2　琼脂扩散法测定抑菌环的实验结果表明:本品仅在原
液浓度和原液稀释 1/ 2 , 1/4 时对所试细菌有抑菌环 , 其出
现抑菌环的浓度皆高于 MIC , MBC 浓度 , 二者的差异是否
与本品在琼脂的扩散有关 , 有待进一步探讨。
32 内蒙古中医药