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HPLC法测定民族药材禹州漏芦不同部位中绿原酸的含量



全 文 :* 作者简介:北京中医药大学中药药剂专业在读研博士,北京市朝
阳区北三环东路 11 号北京中医药大学逸夫科研楼 606 室,
18801231007;
HPLC法测定民族药材禹州漏芦不同部位中绿原酸的含量
胡伊力格其
(内蒙古民族大学附属医院蒙药剂部,内蒙古 通辽 028000)
摘 要:目的:HPLC 法测定禹州漏芦不同部位中绿原酸的含量。方法:HPLC 法测定,色谱柱 Kromasi - C18(4. 6mm ×
200mm,5μm) ,流动相乙腈 - 3mL·L -1磷酸溶液(12 ﹕ 88) ,波长 328nm。结果:绿原酸标准曲线浓度在 7 ~ 140 μg·mL -1
范围内呈线性关系(r = 0. 999) ,平均回收率为 104. 1%,RSD为 4. 21%(n = 6) ,禹州漏芦不同部位含有绿原酸。结论:禹州
漏芦绿原酸含量根部 0. 105%,茎枝 0. 110%,花 0. 358%,叶 0. 300%,平均含量 0. 218%,花叶绿原酸含量高,根茎含量最
低。
关键词:HPLC法;禹州漏芦;绿原酸
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)03 - 0055 - 02
本品系民族医习用药材,蒙古名洪股尔珠拉、扎日阿乌
拉,禹州漏芦为菊科植物蓝刺头 EchinopslatifoliusTausch.的
干燥根,是一种民族特色以及地方特色的植物药,在民族医
药及民间中应用广泛。禹州漏芦根入药或全株能入药。蒙
医为固骨质、接骨愈伤、清热止痛[1],中医为清热解毒、消
痈、下乳、舒筋通脉[2]。含有分噻吩、三萜、生物碱、黄酮等
化合物,药理研究表明:具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、抗炎及
保肝等作用[3]。a -三联噻吩(C12H8S3)可作为药材质量
控制成分之一[2]。本文对其不同部位绿原酸含量进行了
研究。
1 仪器与试剂
1. 1 仪器:1100 型高效液相色谱仪 (美国安捷伦公司) ,
TJ - 912 型色谱分析平台(太极计算机公司)。
1. 2 试药:绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提
供;乙腈为色谱纯;其他均为分析纯试剂;水为纯化水;禹州
漏芦自采(2013 年 8 月初内蒙古呼和浩特市大青山牌楼
沟)。
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件:色谱柱 Kromasi - C18 (4. 6mm × 200mm,
5μm) ,流动相乙腈 - 3mL·L -1磷酸溶液(12 ﹕ 88) ,波长
328nm,进样 10μL。在此条件下样品中绿原酸与其它组分
有较好的分离,见图 1。
图 1 HPLC图谱
A.绿原酸对照品;B.供试品;1. 绿原酸
2. 2 对照品溶液的制备及线性关系考察:精密称取干燥
至恒质量的绿原酸对照品适量,置棕色量瓶中,甲醇溶解,
配制成 1mL含 0. 28 mg 绿原酸溶液,作为对照品溶液。分
别精密量取绿原酸对照品溶液 0. 25,0. 5,1,2,3,4 和 5mL,
置于 10mL量瓶内,用甲醇稀释至刻度,按上述色谱条件进
行测定。结果,在 7 ~ 140 μg·mL -1浓度范围内以峰面积
(A)与对照品质量浓度(C)进行回归,其线性关系良好。
回归方程为:A =5452. 5 + 7008. 4 C,r = 0. 999。
2. 3 供试品溶液的制备:取本品根、茎、花叶与地上部位,
粉碎,过 100 目筛,精密称定 60mg,置具塞锥形瓶中,精密
加入甲醇 10mL,称质量,超声处理 50min ,放冷,称重,用甲
醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液备用,即得。
2. 4 稳定性实验:取同一份供试品溶液,分别在 0,1,2,4h
进样测定,以绿原酸峰面积值计算 RSD为 0. 33%。结果表
明,供试品溶液在 4h内稳定。
2. 5 精密度实验及重复性实验:吸取同一批供试品溶液,
在上述色谱条件下重复进样 6 次,测得绿原酸峰面积 RSD
为 0. 31%。取同批药材地下部位按 2. 3 项下平行制备 6 份
样品溶液,并按 2. 1 项下测定,绿原酸的平均含量为 0.
105%,RSD = 0. 78%。
2. 6 加样回收率实验:取同批药材地上部位已知含量的
样品 6 份,每份取约 40mg,精密称定,依次精密加入分别加
入 0. 1mL(每 mL 含绿原酸 4. 20 mg)对照品溶液,挥去溶
剂,按供试品溶液的制备操作,测定含量,计算回收率。绿
原酸平均回收率为 104. 1%,RSD为 4. 21%(n = 6)。
2. 7 样品测定:取禹州漏芦药材不同部位,按 2. 3 项下方
法制备供试品溶液,按拟定的色谱条件测定绿原酸含量,结
果根部 0. 105%,茎枝 0. 110%,花 0. 358%,叶 0. 300%,平
均含量 0. 218%。
3 讨论
禹州漏芦属资源丰富约有近百个品种,我区是主要产
地之一,是蒙医药习用药材。从测定结果看,禹州漏芦根茎
552015 年 3 月第 3 期 中国民族医药杂志
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.03.038
花叶中含有丰富的绿原酸成分,特别是花叶中绿原酸含量
高,蒙医药使用禹州漏芦地上部分更为科学合理。同时本
研究建立了以绿原酸为含量的禹州漏芦质量标准。
参考文献
[1]国家药典委员会.药品标准蒙药分册[S]. 1998,51.
[2]国家药典委员会.中国药典[S]. 一部. 北京:中国医药
科技出版社,2010.
[3]汪毅,李铣,张鹏. 禹州漏芦化学成分及药理活性的研
究进展[J].中草药,2005,36(2) :309 - 311.
2015 年 3 月 15 日收稿
△项目资助:国家自然科学基金项目(8146065)内蒙古民族大学
博士科研启动基金项目(BS326)
作者简介:桂荣(1981 -) ,女,硕士研究生,研究方向:蒙药与方剂
学 Tel :15848550948,E - mail:wangguirong@ 163. com
* 通讯作者:拉喜那木吉拉(1975 -) ,博士,男(蒙古族) ,教授,研究
方向:蒙药资源学,Tel :0475 -8314242,E - mail:namujila@126. com
HPLC法测定两种蒙药地衣类药材中的(+)-松萝酸含量△
桂 荣 巴根那 邰巴达拉胡 白梅荣 包明兰 拉喜那木吉拉*
(内蒙古民族大学蒙医药学院,内蒙古 通辽 028000)
摘 要:目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定长松萝和石花中(+)-松萝酸含量。方法:采用高效液相色谱法。色谱
柱:KroMaSiL C18(4. 6mm × 250mm,5μm) ,流动相:甲醇 - 1%乙酸溶液(80:30) ,流速:1. 1mL /min,检测波长 284nm,柱温
30℃。结果:(+)-松萝酸对照品在 0. 3549 ~ 2. 366μg范围内,与峰面积具有良好的线性关系,r = 0. 9997;长松萝的平均
回收率为 99. 28%,石花的平均回收率为 98. 87%。结论:该方法简便、快捷、准确、重复性好,可用于长松萝和石花中(+)
-松萝酸的含量测定。
关键词:蒙药;长松萝;石花;(+)-松萝酸;HPLC
中图分类号:R291. 2 文献标识码:A 文章编号:1006 - 6810(2015)03 - 0056 - 03
蒙药长松萝(Usnea longissima Ach.) ,蒙文名:阿拉坦
-乌塔斯 -乌布斯,异名:斯日古德。其味苦,性凉,效敦、
软、柔。清热,解毒,主治毒症,肠刺痛,腹鸣,泄泻,肠热,筋
腱疼痛,肺脓疡[1]。随科学技术发展对长松萝的研究较
多。研究结果表明长松萝中含(+)- 松萝酸等多种成
分[2],据国内外文献报道(+)-松萝酸是长松萝中含量较
多的化合物[3]。
蒙药石花(Parmelia Saxatilis Ach.) ,蒙文名:哈敦 -哈
格,异名:道日格、楚鲁乃哈格、哈敦乃 -西莫、哈敦乃 -其
其格。味甘、苦,性凉,效燥。清热,解毒,开胃,止吐,止泻。
主治肝热;毒热,包如破溃,吐血,鼻衄,血协日性头痛,亚
麻,脑刺痛[1]。
(+)-松萝酸为有毒又是地衣类中的有效成分。是
间苯三酚衍生物(P h lo r o g lu - e i n o l d e r iv a t iv e
s ) ,是目前最重要的、分布最广的地衣酸。松萝属(U s n
e a )、树发属(A le e t o r ia )、树花属(R a m a l in a )、扁
枝衣属(E v e r n i a )、岛衣属(C e - t r a r i a )、石蕊属
(C la d o n ia )、梅衣属(P a r m e lia )、茶渍属(L e e a n
o r a )、赤星衣属(H a e m a t o m m a )等属中都存在,其
抗菌,抗病毒作用[4 - 6]。
蒙药长松萝和蒙药石花这 2 种药材是蒙药特有品种,
均属于地衣类,都味苦,性凉,具有清热,解毒功能,本研究
建立对(+)-松萝酸的含量测定方法,为其质量控制提供
依据。
1 仪器、试剂与试药
1. 1 仪器:LC - 20AT 岛津高效液相色谱仪;色谱柱 Kro-
maSiL C18(4. 6mm × 250mm,5μm)。
1. 2 试剂:(+)-松萝酸对照品(由本实验室提取、纯化
得到,纯度达到 95%) ;甲醇(色谱纯,天津市天力化学试剂
有限公司) ;1%乙酸溶液,所用水为重蒸馏水,其他溶剂均
为分析纯。
1. 3 试药:长松萝(采集于内蒙古大兴安岭) ,石花(采集
于内蒙古扎鲁特旗罕山自然保护区)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件:色谱柱:KroMaSiL C18 柱(4. 6 × 250mm,
5μm) ;流动相:甲醇 - 1%乙酸溶液(80∶ 30) ;流速:1. 1mL /
min;检测波长 284nm;柱温:30℃。
2. 2 溶液的制备[7 - 8]
2. 2. 1 对照品溶液的制备:取(+)-松萝酸对照品约 0.
1183mg,精密称定,置 1mL容量瓶中,加丙酮溶解并稀释至
刻度;并精密量取 1mL 置 1mL 容量瓶中,加丙酮溶解并稀
释至刻度、摇匀,即得(+)-松萝酸对照品储备溶液(见图
1)。
65 中国民族医药杂志 2015 年 3 月第 3 期
DOI:10.16041/j.cnki.cn15-1175.2015.03.039